Sabouraud Agar Apa, Yayasan, Penyediaan, Kegunaan

Dia Sabouraud Agar, Juga dikenali sebagai sabouraud dextrose agar, ia adalah medium budaya yang kukuh, terutama diperkaya untuk pengasingan dan perkembangan kulat, seperti ragi, acuan dan dermatofit.

Oleh itu, medium ini tidak boleh hilang di makmal mikrobiologi untuk menyiasat kehadiran kulat patogen atau oportunistik, sama ada sampel klinikal atau bukan klinikal. Ia juga sesuai untuk pertumbuhan bakteria filamen seperti streptomices dan nocardias. Penggunaannya sangat luas, kerana ia boleh digunakan dalam mycology manusia, haiwan, sayur dan perindustrian.

Ke. Sabouraud Agar tanpa menanam. B. Sabouraud agar ditanam dengan ragi. Sumber: Foto yang diambil oleh pengarang MSC. Marielsa Gil

Medium ini dicipta pada tahun 1896 oleh ahli dermatologi yang cemerlang Raimond Sabouraud, yang menjadi pakar yang diiktiraf di seluruh dunia dalam gangguan kulit kepala, terutamanya disebabkan oleh dermatophytes.

Penciptaannya sangat penting bahawa ia telah digunakan sejak itu dan dikekalkan hari ini, walaupun dengan beberapa pengubahsuaian.

Walaupun ia istimewa untuk kulat, dalam bakteria sederhana ini dapat tumbuh, oleh itu untuk sampel dengan flora bercampur kemasukan antibiotik dalam penyediaannya diperlukan dan dengan itu menghalang pertumbuhan flora bakteria yang mungkin ada.

Pilihan antibiotik mesti dijalankan dengan teliti dan dengan mengambil kira jenis kulat yang akan pulih, kerana ada yang dihalang dengan kehadiran bahan -bahan tertentu.

Asas

Sabouraud Dextrose Agar adalah cara dalam perumusan asalnya lemah selektif, kerana 5 asid pH.6 ± 0.2, bagaimanapun, bakteria dapat dibangunkan, terutamanya dalam inkubasi yang berpanjangan.

Medium ini mengandungi caseine pankreas dan peptone tisu tisu tisu haiwan, yang menyediakan sumber karbon dan nitrogen untuk pembangunan mikroorganisma.

Ia juga mengandungi kepekatan glukosa yang tinggi, yang bertindak sebagai sumber tenaga yang memihak kepada pertumbuhan kulat di atas bakteria. Semua ini bercampur dengan agar -agar, komponen yang memberi anda konsistensi yang sesuai.

Sebaliknya, sabouraud dextrose agar boleh selektif jika antibiotik ditambah.

Dengan antibiotik, sangat berguna dalam sampel luka, ulser terbuka atau sampel di mana pencemaran bakteria yang besar disyaki.

Kombinasi sabouraud dextrose yang paling banyak digunakan dengan antibiotik

-Sabouraud Agar dengan Chloramphenicol: Sesuai untuk Memulihkan Ragi dan Kulat Filamen.

-Sabouraud agar dengan gentamycin dan chloramphenicol: hampir semua kulat dan ragi filamen tumbuh dalam medium ini, dan menghalang sejumlah besar bakteria, termasuk Enterobacteria, Pseudomonas dan Staphylococcus.

-Sabouraud Agar dengan Cycloheximide: Ia amat berguna untuk sampel dari kulit atau saluran pernafasan, selagi syak wasangka adalah kulat dimorphic.

Cycloheximide harus digunakan dengan berhati -hati; Walaupun ia digunakan untuk menghalang pertumbuhan kulat dan ragi bukan patogenik atau alam sekitar yang mungkin hadir sebagai bahan pencemar dalam sampel, ia juga menghalang pertumbuhan beberapa kulat seperti Cryptococcus neoformans,  Aspergillus fumigatus, Boydii Allescheria, Penicillium sp dan kulat oportunistik lain.

-Sabouraud Agar dengan chloramphenicol ditambah sikloheximide: Ia digunakan terutamanya untuk mengasingkan dermatophytes dan kulat dimorphic. Mempunyai kesulitan yang menghalang beberapa spesies kulat oportunis seperti Candida no Albicans, Aspergillus, Zigomicetos atau C. Neoformans.

-Sabouraud agar dengan chloramphenicol, streptomycin, penisilin g dan sikloheksimida: ia sesuai untuk sampel yang sangat tercemar dengan bakteria dan kulat saprophytes, tetapi ia mempunyai kesulitan menghalang pertumbuhan pertumbuhan pertumbuhan Actinomyces dan Nocardias, Sebagai tambahan kepada kulat oportunistik yang disebutkan di atas.

Boleh melayani anda: proses hominization: ciri dan fasa

Penyediaan

Jika mereka mempunyai bahan -bahan yang berasingan, ia boleh disediakan seperti berikut:

Sabouraud Dextrose 

Timbang:

- 40 gr dextrose

- 10 gr peptone

- 15 gr dari Agar -agar

- Mengukur 1000 ml air suling

Semua bahan bercampur, pH diselaraskan kepada 5.6. Larutan dibubarkan dengan mendidih, 20 ml medium diedarkan dalam tiub 25 x 150 mm, tanpa memegang dan dengan penutup kapas sebaiknya.

Tiub dengan penutup kapas. Sumber: Foto yang diambil oleh pengarang MSC. Marielsa Gil

Langkah -langkah tiub lain juga boleh digunakan, mengikut ketersediaan.

Mereka mengambil autoklaf selama 10 minit ke suasana tekanan (121 ° C). Ia tidak boleh dilebihi dalam masa autoklavasi. Semasa meninggalkan autoklaf, tiub cenderung dengan bantuan sokongan sehingga mereka menguatkan di puncak seruling.

Cara lain adalah membubarkan bahan -bahan dengan pemanasan sehingga ia mendidih. Dalam felola autoklavik yang sama selama 10 minit dan kemudian mengedarkan 20 ml di plat petri.

Jika medium sabouraud dextrose tersedia yang sudah mengandungi semua bahan, jumlah yang ditentukan oleh rumah komersial untuk satu liter air ditentukan. Selebihnya langkah sama dengan yang diterangkan di atas.

Sabouraud Dextrose Agar (Pengubahsuaian Emmons)

Timbang:

-  20 gr dextrose

- 10 gr peptone

-  17 gr dari Agar -gar

-  Mengukur 1000 ml air suling

Semua bahan bercampur, pH diselaraskan kepada 6.9. Teruskan dengan cara yang sama dari kes sebelumnya.

Terdapat rumah komersial yang menawarkan medium dengan semua bahan. Dalam kes ini, timbangkan dan sediakan cara memasukkannya.

Sabouraud Dextrose Agar (Pengubahsuaian Emmons) dengan chloramphenicol

Penyelesaian Ibu Chloranfenicol

- Timbang 500 mg asas chloramphenicol

- Ukur 100 ml 95% etanol

- Bergaul

Medium sabouraud dextrose (emmons) disediakan seperti yang telah diterangkan dan tambahan untuk setiap liter menambah 10 ml penyelesaian ibu chloranphenicol sebelum autoklavik.

Sabouraud emmons dengan cycloheximide dextrose

Penyelesaian Ibu Cycloheximide

- Timbang 5 gr cycloheximide

- Ukur 100 ml aseton

- Bergaul

Sabouraud dextrose apoure.

Sabouraud dextrose agar (Emmons) dengan chloramphenicol dan sikloheximide

Medium sabouraud dextrose (emmons) disediakan seperti yang telah diterangkan dan tambahan untuk setiap liter menambah 10 ml penyelesaian ibu chloranphenicol dan 10 ml larutan ibu sikloheksimida sebelum autoklavated.

Boleh melayani anda: sains yang berkaitan dengan biologi

Antibiotik lain yang boleh ditambah

dua puluh.000 hingga 60.000 unit penisilin seliter sederhana.

30 mg streptomycin seliter sederhana.

Kedua-duanya mesti dimasukkan selepas medium, sedikit disejukkan (50-55 ° C).

0.04 g neomycin seliter sederhana.

0.04 g gentamicin seliter sederhana.

Pertimbangan Khas

Keselamatan lebih disukai untuk menabur sabouraud dextrose agar dalam tiub berbentuk baji (cenderung dalam puncak seruling) dan bukannya di plat petri, untuk mengelakkan penyebaran dan penyedutan spora.

Adalah penting bahawa tiub dengan usia sabouraud ditutup dengan kapas dan tidak dengan tudung benang, kerana telah ditunjukkan bahawa keadaan separuh -aerobik menghalang pembentukan sporous dalam beberapa strain, contohnya Coccidioides Immitis. Di samping itu, kebanyakan kulat adalah aerob.

Sekiranya menggunakan tudung benang, tidak ditutup dengan ketat.

QA

Media yang disediakan harus dibuat kawalan kualiti untuk mengesahkan fungsi mereka yang betul. Untuk ini, strain tertentu disemai.

Untuk Sabouraud Dextrose Candida albicans, yang mesti mempunyai pertumbuhan yang sangat baik. Plat lain disuntik dengan strain dari Escherichia coli, mesti dihalang sepenuhnya.

Plak tanpa inokulasi juga diinkubasi di mana tiada mikroorganisma harus tumbuh.

Untuk sabouraud dextrose agar dengan chloramphenicol dan sikloheximide  Trichophyton Mentagrophytes, mesti berkembang dengan baik. Plat lain disuntik dengan ketegangan Aspergillus flavus, di mana mesti terdapat pertumbuhan yang terhad atau tidak berisiko. Di samping itu, plak yang tidak berasas diinkubasi untuk menunjukkan kemandulannya.

Untuk sabouraud dextrose dengan sikloheximide, strain dari Candida albicans, Trichophyton Rubrum  Sama ada Canis microsporum, yang mesti menunjukkan pertumbuhan yang baik.

Begitu juga, ketegangan Aspergillus flavus, menunjukkan pertumbuhan yang terhad atau tidak berkembang. Akhir.

Aplikasi

Penanaman utama

Sabouraud Dextrose Agar klasik mengandungi 4 gr dextrose dan sangat baik sebagai cara utama penebat, kerana ia menunjukkan morfologi ciri setiap kulat.

Ia juga sangat baik untuk menunjukkan pengeluaran pigmen. Walau bagaimanapun, bukan cara yang paling sesuai untuk memerhatikan sporulasi.

Dan juga tidak disyorkan untuk menanam Blastomyces dermatitidis, yang dihalang oleh kepekatan tinggi glukosa sekarang.

Sebaliknya, pertimbangan tertentu mesti diingat.

Sesetengah kulat berkembang lebih baik pada suhu bilik, seperti acuan, yang lain berkembang dengan jayanya pada suhu 37 ° C, seperti beberapa ragi, dan yang lain dapat berkembang pada kedua -dua suhu (kulat dimorphic).

Oleh itu, kadang -kadang perlu.

Sebagai contoh, Sporothrix Schenckii Ia disemai pada dua plat; Satu adalah incuba pada suhu bilik untuk mendapatkan fasa acuan dan yang lain diinkubasi pada suhu 37 ° C untuk mendapatkan fasa uppaduriform, tetapi di dalamnya perlu menambah 5% darah ke alam sekitar.

Ia boleh melayani anda: glukosa oksidase: ciri, struktur, fungsi

Dalam kes lain, seperti dalam sampel mitos, dua plat sabouraud agar ditaburkan, satu dengan chloramphenicol dan yang lain dengan sikloheximide. Yang pertama akan membolehkan pertumbuhan agen kausal mitos asal mitos (eumicetoma) dan agen kausal kedua miketoma asal bakteria, seperti actinomicetomas.

Sporulasi

Agar sabouraud dextrose yang diubahsuai oleh emmons mengandungi 2 gr dextrose dan bukan sahaja berfungsi untuk pengasingan, tetapi juga untuk sporulasi dan pemuliharaan kulat.

Dalam medium ini jika anda dapat memulihkan strain dari Blastomyces dermatitidis.

Pemuliharaan

Untuk memulihara tanaman kulat, mereka boleh disimpan di dalam peti sejuk (2-8 ° C). Masa pemuliharaan boleh berubah antara 2 hingga 8 minggu. Selepas masa ini mereka mesti subjektif untuk mengulangi prosesnya.

Beberapa kulat tetap lebih baik pada suhu bilik, seperti Epidermophyton Foccosum, Trichophyton Schoenleinnii, T. Violaceum dan Microsporum audounii.

Penyelenggaraan ketegangan boleh dilanjutkan untuk mengelakkan pleomorphism jika dextrose agar sepenuhnya dihapuskan dan jika jumlah agar kepada alam sekitar dikurangkan untuk mengelakkan kekeringan.

Mikrokultur

Untuk mengenal pasti beberapa kulat filamen, perlu melakukan mikrokultur menggunakan sabouraud agar atau cara khas lain untuk memerhatikan struktur pembiakan seksual dan aseksual.

Dalam mycology manusia

Ini terutamanya digunakan untuk diagnosis penyakit kulat, terutama yang mempengaruhi kulit dan lampirannya (rambut dan kuku).

Sampel boleh menjadi rembesan, exudates, kulit, rambut, kuku, dahak, LC atau air kencing. Patogen yang terlindung adalah dermatofit, kulat yang menyebabkan mikosis subkutan dan sistemik.

Mycology Haiwan

Haiwan sering terjejas oleh jangkitan kulat, oleh itu sabouraud agar adalah berguna dalam mycology haiwan seperti dalam manusia.

Contohnya, dermatofit dapat mempengaruhi haiwan. Demikianlah kes Canis var distortum microsporum, yang sering menjangkiti anjing, kucing, kuda, babi dan monyet. Sebagai tambahan, Microsporum gypseum menjangkiti anjing, kucing dan lembu.

Burung seperti ayam, ayam jantan dan ayam dipengaruhi oleh Microsporum Gallinae.

Kulat lain, seperti Zymonema farciminosum, Mereka juga menyebabkan penyakit pada haiwan, terutamanya dalam kuda, keldai dan keldai, menghasilkan keradangan penting dalam kapal limfa.

Sporothrix Schenkii dan Histoplasma capsulatum Mereka mempengaruhi haiwan dalam negeri dan manusia.

Mycology Alam Sekitar

Banyak kulat patogen atau oportunistik boleh menumpukan pada masa tertentu dalam persekitaran tertentu, terutamanya di bilik operasi dan unit rawatan rapi (ICU) klinik dan hospital. Oleh itu perlu mengawal perkara yang sama.

Ruang terdedah yang lain adalah perpustakaan dan bangunan lama, yang boleh dipengaruhi oleh kepekatan kulat alam sekitar.

Dalam kajian alam sekitar, sabouraud dextrose agar untuk pengasingan kulat digunakan.

Mycology industri

Sabouraud Dextrose Agar tidak dapat hilang untuk kajian mencemarkan kulat dalam pengeluaran kosmetik, makanan, minuman, kulit, tekstil, antara lain.

Mycology tumbuhan

Tumbuh -tumbuhan juga mengalami penyakit kulat, yang mempengaruhi bahagian -bahagian tumbuhan yang berlainan, yang bahkan dapat menamatkan penuaian, menyebabkan kerugian besar dalam bidang pertanian.

Rujukan

1. Makmal Valtek. (2009). Sabouraud Dextrose Agar dengan Cycloheximida. Terdapat di: andinamedica.com.
2. Navarro atau. (2013). Mycology Veterinar. Universiti Agrarian Kebangsaan. Nicaragua.