Sup malonat, penyediaan dan kegunaan

Dia Sup malonato Ia adalah medium budaya cecair yang digunakan untuk ujian diagnostik (ujian Malonato), digunakan untuk membezakan beberapa genre keluarga Enterobacteriace. Ia dicipta oleh Leifson dalam 1.933 dan kemudian diubahsuai oleh Ewing, yang menambah sedikit ekstrak dextrose dan yis ke formula asal.

Medium kini terdiri daripada ekstrak yis, ammonium sulfat, dipotassium fosfat, fosfat monopotonik, natrium klorida, natrium malonat, dextrose dan bromotimol biru. Ujian ini biasanya termasuk dalam bateri pengenalan biokimia untuk Enterobacteria, membantu membezakan genera dan spesies tertentu.

Perwakilan grafik ujian malonato. Ke. Ujian negatif, b. (Pengasidan) ujian negatif, c. (Alcalinization tengah) ujian positif. Sumber: tiub berwarna domainpicures awam.jaring

Ujian Malonato terutamanya berdasarkan keupayaan beberapa mikroorganisma untuk menggunakan natrium malonato sebagai sumber karbon tunggal dan sebagai sumber nitrogen kepada ammonium sulfat.

Ujian Malonato biasanya memberi positif dalam beberapa spesies genre Enterobacter, Klebsiella dan Citrobacter. Walaupun, kebanyakan spesies genre Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus dan Providencia, memberikan reaksi negatif.

[TOC]

Asas

Ujian Malonat terdiri daripada bukti.

Sebilangan besar Enterobacteria yang tidak menggunakan Malonato mampu berkembang dalam medium ini, mengambil sebagai nutrien ekstrak dextrose dan yis.

Dalam kes ini, sebarang percubaan alkali disebabkan oleh penggunaan peptone akan diatasi oleh pengeluaran asid yang dihasilkan oleh penapaian dextrose. Begitu juga, fosfat dipotassium dan monopotasic bertindak sebagai penampan yang menjaga pH pada 6.7.

Ia boleh melayani anda: sekitar Donax

Itulah sebabnya, apabila ujian negatif, sup adalah warna asal yang sama (hijau). Jarang medium boleh diasaskan kerana penapaian dextrose; Tanpa menggunakan peptonas dan penunjuk pH akan menghidupkan warna dari sederhana hingga kuning. Untuk ini, pH mesti turun hingga 6.

Sekarang, apabila ujian ini positif bahawa mikroorganisma menggunakan malonato dan ammonium sulfat sebagai sumber karbon dan nitrogen masing -masing, tanpa menggunakan komponen lain.

Dalam kes ini, medium dialkali disebabkan oleh pembebasan natrium dan pembentukan NaOH yang akibatnya. Dalam pengertian ini, penunjuk pH (bromotimol biru) mengubah warna tengah hijau menjadi biru apabila pH sama dengan atau lebih besar daripada 7.6. Biru boleh jelas atau sengit (Prussia Blue).

Akhirnya, natrium klorida mengekalkan osmolarity medium dan air adalah cair semua komponen.

Tafsiran

Sup warna yang sama (hijau): ujian negatif

Sup kuning: ujian negatif

Sup biru jelas atau sengit: ujian positif

Terdapat variasi yang dipanggil sup malonato phenylalanine, juga dipanggil shaw dan medium clarke. Dalam kes ini, dua ujian boleh dianalisis, penggunaan malonato sebagai sumber karbon dan pengeluaran asid pyruvic dari phenylalanine.

Penyediaan

Sup malonato

Jumlah gram yang ditentukan oleh sisipan rumah komersial yang dipilih adalah berat (ia boleh berubah dari satu ke satu sama lain). Gram berat digantung dalam satu liter air suling. Panaskan sedikit sehingga pembubarannya yang lengkap. Bagikan 3 ml medium dalam tiub ujian 13/100 dengan penutup kapas.

Mensterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 atau 20 minit.

Sejuk. Sekiranya mereka tidak akan digunakan dengan segera, simpan di peti sejuk sehingga digunakan. Marah sup pada suhu bilik sebelum memancarkannya.

Boleh melayani anda: giptodon

PH sederhana mestilah 6.7 ± 0.2. Warna medium yang disediakan adalah botol hijau.

Malonato Phenylalanine Broth

Timbang 11 gr medium dehidrasi dan larut dalam 1 liter air suling. Selebihnya penyediaan sama dengan yang diterangkan di atas.

Ia juga boleh disediakan dengan menambahkan 2 gr/l phenylalanine ke medium sup malonato sebelum disterilkan.

Gunakan

Ia digunakan sebagai sebahagian daripada bateri ujian biokimia yang dipasang untuk mengenal pasti bakteria keluarga Enterobacteriaceae.

Bantu membezakan antara:

-Genus Klebsiella dan Enterobacter (+) genus Escherichia dan Serratia (-).

-Spesies SSP Arizonae Entrico Salsonella SSP, Ssp ssp salmonella salmonella Salmonella Enterica SSP Diarizonae (+), spesies Salmonella enterica SSP enterica (-).

-Genus Klebsiella secara amnya (+) genus Actinobacillus (-).

-Kadang -kadang ia dapat membantu pembezaan genre dan spesies bakteria yang tidak dimiliki oleh keluarga Enterobacteriaceae, seperti di antara Bacilli Negatif Gram yang tidak berpakaian Alcaligenes faecalis (+) Acinetobacter sp (-).

Sumber: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologi. Edisi ke -5. Pan -American Editorial S.Ke. Argentina.

Prosedur

Di bawah lebih ringan, sebahagian koloni tulen diambil, menggunakan pemegang platinum yang disterilkan dan disejukkan dengan betul. Sampel yang diambil (inokulum cahaya) larut dalam sup malonato. Ia diinkubasi dengan penutup malas dalam aerobiosis pada 35 ° C ± 0.2 selama 24 hingga 48 jam.

Anda juga boleh menyenaraikan sup malonato dari tanaman 18 - 24 jam dalam sup soya triptyse. Dalam kes ini, 0.01 ml diambil dengan pipet steril dan sup malonato disuntik. Ia diinkubasi dengan penutup malas dalam aerobiosis pada 35 ° C ± 0.2 selama 24 hingga 48 jam.

Boleh melayani anda: pengguna sekunder

Selesai masa hasilnya ditafsirkan. Mana -mana sisa warna biru selesai 48 jam pengeraman harus dianggap positif. Ujian tidak boleh ditafsirkan sebagai negatif sehingga masa inkubasi 48 -hour telah dipenuhi.

Dalam kes menggunakan varian sup fenilalanin malonato, malonato pertama kali ditafsirkan dan kemudian 5 titisan HCl 1n dan 3-5 titisan 8% ferric chloride ditambah. Warna hijau gelap ditafsirkan sebagai ujian positif untuk fenilalanin. Jika sebaliknya medium menjadi biru pucat ujian adalah negatif untuk fenilalanin.

QA

Untuk melaksanakan kawalan kemandulan medium, satu atau dua sup mesti diinkubasi pada 35 ° C ± 0.2 selama 24 jam pengeraman. Selepas masa ini tidak ada kekeruhan atau perubahan warna.

Untuk kawalan kualiti, anda boleh menggunakan strain yang diketahui atau disahkan, seperti: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, SSP Arizonae Entrico Salsonella SSP ATCC 13314 dan Escherichia coli ATCC 25922.

Keputusan yang diharapkan adalah:

• Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae dan SSP Arizonae Entrico Salsonella SSP Mereka memberikan reaksi positif (separuh biru).
• Untuk Escherichia coli Hasilnya mesti memberi negatif, iaitu, diharapkan tidak ada perubahan warna (hijau) atau ia akan berubah menjadi kuning disebabkan oleh penapaian glukosa.

Batasan

Jangan gunakan sup yang menunjukkan kekeruhan, precipitates, perubahan warna atau tanda kemerosotan.

Rujukan

1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Penebat mikrobiologi Salmonella spp. dan alat molekul untuk pengesanan. Kesihatan Uninorte. Barranquilla (col.) 2014; 30 (1): 73-94. Terdapat di: Scielo.org.co
2. Bbl. Sup malonat, ewing diubah suai. 2007. Terdapat di: BD.com
3. Senna Laboratories. Sup malonato. Terdapat di: Saintifik.com
4. Renylab. Sup malonato. 2013. Terdapat di: ini.Renylab.Ind.Br
5. Diagnostik Mbiologi. Sup malonato. Terdapat di: Mbiologi.com
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologi. Edisi ke -5. Pan -American Editorial S.Ke. Argentina.
7. Makmal Conda Pronadisa. Malonato Phenylalanine Broth. Terdapat di: Condalab.com