Ziehl-Neelsen pewarnaan

Mycobacterium tuberculosis Divisualisasikan dengan pewarnaan ziehl-neelsen

Apa pewarnaan Ziehl-Neelsen?

The Ziehl-Neelsen pewarnaan Dalam teknik pewarna untuk mengenal pasti mikroorganisma asid alkohol tahan (AAR). Nama prosedur mikrobiologi ini merujuk kepada penulisnya: ahli bakteria Franz Ziehl dan ahli patologi Friedrich Neelsen.

Teknik ini adalah jenis warna yang berbeza, yang membayangkan penggunaan pewarna yang berbeza untuk mewujudkan kontras antara struktur yang dikehendaki untuk memerhatikan, membezakan dan seterusnya mengenal pasti. Pewarnaan Ziehl-Neelsen berfungsi untuk mengenal pasti jenis mikroorganisma tertentu.

Sebahagian daripada mikroorganisma ini adalah mycobacteria (contohnya, Mycobacterium tuberculosis), Nocardias (contohnya, Nocardia sp.) dan beberapa parasit uniselular (contohnya, Cryptosporidium parvum). Banyak bakteria dapat diklasifikasikan melalui teknik biasa yang disebut pewarnaan gram.

Walau bagaimanapun, beberapa kumpulan bakteria memerlukan kaedah lain untuk mengenal pasti mereka. Teknik seperti pewarnaan ziehl-neelsen memerlukan kombinasi haba dengan haba untuk menetapkan yang pertama ke dinding sel.

Kemudian datang proses perubahan warna yang membolehkan untuk mendapatkan dua hasil: rintangan atau kepekaan terhadap perubahan warna asid dan alkohol.

Asas

Asas teknik pewarnaan ini berdasarkan sifat -sifat dinding sel mikroorganisma ini. Dinding terbentuk oleh sejenis asid lemak yang dipanggil asid mycolic; Ini dicirikan dengan membentangkan rantai yang sangat panjang.

Apabila asid lemak mempunyai struktur yang sangat panjang, ini dapat mengekalkan pewarna lebih mudah. Beberapa genre bakteria sangat sukar untuk dicelup oleh gram pewarnaan, kerana kandungan tinggi asid mycolic dari dinding sel.

Dalam pewarnaan Ziehl-Neelsen, sebatian fenolik fuchsin carbol digunakan, pewarna asas. Ini mempunyai keupayaan untuk berinteraksi dengan asid lemak dinding sel, yang merupakan tekstur cerosa pada suhu bilik.

Boleh melayani anda: monosakarida

Pewarnaan dengan fuchsin carbol diperbaiki dengan kehadiran haba, kerana lilin cair dan molekul pewarna bergerak lebih cepat ke dalam dinding sel.

Asid yang digunakan kemudian berfungsi untuk menghilangkan sel -sel yang tidak dicelup kerana dinding mereka tidak berkaitan dengan pewarna; Oleh itu, daya asid asid mampu menghapuskan pewarna asid. Sel-sel yang menentang perubahan warna ini dipanggil asid-tahan.

Pewarna sekunder

Selepas perubahan warna sampel, ini berbeza dengan pewarna lain yang disebut pewarna sekunder. Mustileo Blue atau Malachite Green biasanya digunakan.

Pewarna sekunder mencemarkan bahan latar dan, akibatnya, mewujudkan kontras dengan struktur yang dicelupkan pada langkah pertama. Hanya sel-sel yang berubah warna menyerap pewarna kedua (kaunter-kaunter) dan mengambil warna mereka, sementara sel tahan asid mengekalkan warna merah.

Prosedur ini sering digunakan untuk mengenal pasti Mycobacterium tuberculosis dan Mycobacterium leprae, yang dipanggil bacilli asid tahan tahan lama.

Reagen

Pewarna utama

0.3 % Fuchsin Carbol digunakan (ditapis). Pewarna ini disediakan dari campuran alkohol: fenol etanol (90 %) atau metanol (95 %), dan dalam campuran ini 3 gram fuchsin asas larut.

Menyelesaikan penyelesaian

Dalam langkah ini, anda boleh menggunakan penyelesaian asid alkohol 3 % atau 25 % asid sulfurik.

Pewarna sekunder (kolar kaunter)

Pewarna yang paling banyak digunakan untuk kontras dalam sampel biasanya 0.3 % metilena biru. Walau bagaimanapun, yang lain juga boleh digunakan, seperti 0.5 % malachite hijau.

Boleh melayani anda: Timina

Teknik

Nematode dipaparkan dengan ziehl-neelsen

Prosedur pewarnaan asid

Sediakan smear bakteria

Penyediaan ini dilakukan pada slaid yang bersih dan kering, berikutan langkah berjaga -jaga kemandulan.

Pengeringan frovis

Biarkan smear kering pada suhu bilik.

Panaskan sampel

Sampel mesti dipanaskan dengan menggunakan api ke slaid di bawah. Penetapan dengan alkohol boleh dibuat apabila bau tidak disediakan dengan dahak (dirawat dengan natrium hipoklorit untuk melunturnya) dan jika ia tidak akan dicelup dengan segera.

M. Tuberkulosis dihapuskan dengan peluntur dan semasa proses pewarnaan. Thermofixation of the non -treated sputum tidak akan membunuh M. Tuberkulosis, Walaupun penetapan alkohol adalah bakteria.

Tutup noda

Noda ditutup dengan penyelesaian fuchsin carbol (pewarna asas utama).

Panaskan noda

Ini dilakukan selama 5 minit. Anda harus melihat detasmen stim (kira -kira 60 ° C). Penting untuk tidak terlalu panas dan mengelakkan membakar sampel.

Berhubung dengan pemanasan noda, anda harus berhati -hati ketika memanaskan karbol fuchsin, terutama jika pewarnaan dilakukan pada dulang atau bekas lain di mana bahan kimia yang sangat mudah terbakar telah dikumpulkan dari pewarnaan sebelumnya sebelumnya.

Hanya api kecil yang harus digunakan di bawah slaid menggunakan pencahayaan swab sebelum ini dibasahkan dengan beberapa titisan alkohol berasid, metanol atau 70 % etanol. Elakkan menggunakan swab besar yang direndam dalam etanol kerana ini adalah risiko kebakaran.

Basuh noda

Mencuci ini mesti dilakukan dengan air bersih. Sekiranya air paip tidak bersih, basuh menggosok dengan air yang ditapis atau disuling, sebaik -baiknya.

Tutup smear dengan alkohol asid

Alkohol asid ini mestilah pada 3 %. Liputan dilakukan selama 5 minit atau sehingga bau cukup berwarna, iaitu merah jambu pucat.

Boleh melayani anda: Epiblast

Perlu dipertimbangkan bahawa alkohol berasid mudah terbakar; Oleh itu, ia harus digunakan dengan teliti. Elakkan dekat dengan sumber pencucuhan.

Basuh noda

Mencuci mesti dengan air yang bersih dan sulingan.

Tutup smear dengan pewarna

Ia boleh menjadi pewarna hijau malachite (0.5 %) atau metilena biru (0.3 %) selama 1 atau 2 minit, menggunakan masa yang lebih kuat jika bau nipis.

Basuh noda

Air bersih (suling) mesti digunakan lagi.

Untuk mengalir

Bahagian belakang slaid mesti dibersihkan dan noda diletakkan di atas rak saliran, sehingga ia mengering ke udara (tidak menggunakan kertas penyerap untuk pengeringan).

Periksa smear dalam mikroskop

Objektif 100x dan minyak rendaman harus digunakan. Mengimbas smear secara sistematik dan tuliskan pemerhatian yang relevan.

Mentafsirkan hasilnya

Secara teorinya, mikroorganisma yang dicelup dari warna kemerahan dianggap asid alkohol positif (AAR+).

Sebaliknya, jika mikroorganisma dicelup biru atau hijau, bergantung kepada pewarna yang digunakan sebagai kolar kaunter, mereka dianggap asid tahan negatif (AAR-).

Rujukan

1. Apurban, s. & Sandhya, b. (2016). Keperluan mikrobiologi praktikal (Ed ed.). Penerbit Perubatan Jaypee Brothers.
2. Bauman, r. (2014). Mikrobiologi dengan deseodas oleh sistem badan (ed ke -4.). Pearson Education, Inc.
3. Warisan, J., Evans, e. & Killington, a. (Sembilan belas sembilan puluh enam). Mikrobiologi Pengenalan (Ed ed.). Cambridge University Press.
4. Morello, j., Granato, ms. Wilson, m. & Morton, v. (2006). Manual Makmal dan Buku Kerja dalam Mikrobiologi: Aplikasi untuk Penjagaan Pesakit (Edisi ke -11.). Pendidikan McGraw-Hill.
5. Vasanthakumari, r. (2007). Buku teks mikrobiologi (Ed ed.). B.Yo. Penerbitan Pvt.