Müeller Hinton Agar Apa, Yayasan, Penyediaan, Kegunaan

Dia Müeller Hinton Agar Ia adalah medium pemakanan yang kukuh, tidak selektif, yang terdiri daripada infusi daging, asid peptone kasein, kanji, cengkaman dan air suling. Medium ini membolehkan perkembangan mikrob yang sangat baik bakteria pertumbuhan yang paling pesat.

Ia pada asalnya dicipta oleh John Howard Müeller dan Jane Hinton untuk mengasingkan bakteria yang menuntut dari sudut pandang pemakanan, seperti Neisseria Gonorrhoeae dan Neisseria meningitidis. Walau bagaimanapun, kerana ciri -cirinya ternyata sesuai untuk mengkaji kerentanan terhadap antibiotik, memberikan hasil yang boleh dipercayai dan boleh dihasilkan.

Oleh itu, Müeller Hinton Agar adalah medium budaya yang diterima oleh Institut Piawaian Klinikal dan Makmal (CLSI) dan Jawatankuasa Eropah mengenai ujian kerentanan antimikrob, untuk pelaksanaan ujian kerentanan antimikrob oleh kaedah penyebaran Kirby dan Bauer.

Asas

Kerana ia adalah medium pemakanan yang tidak selektif, ia sangat baik untuk pertumbuhan bakteria yang paling patogen.

Sebaliknya, komposisi mudahnya menyebabkan bahan -bahan mudah tersebar di atasnya, menjadi ciri penting untuk ujian kerentanan oleh kaedah penyebaran cakera.

Satu lagi ciri -cirinya ialah ia mengandungi bilangan perencat yang rendah, yang membolehkan sulfonamide, trimetoprim dan tetracyclines untuk menilai dengan berkesan.

Walau bagaimanapun, perlu diingat bahawa medium mesti memenuhi syarat -syarat tertentu untuk menjamin fungsi yang sesuai, termasuk:

Sesuai dengan pH, kedalaman agar dan kepekatan Timina, Timidina, CA yang betul⁺⁺, Mg⁺⁺ dan Zn⁺⁺.

Anda juga perlu tahu bahawa metodologi diseragamkan dan oleh itu semua parameter, seperti:

Kepekatan inokulum, kepekatan dan pemuliharaan cakera antibiotik, penempatan bilangan cakera yang betul pada agar, jarak antara satu cakera dan yang lain, penempatan strategik antibiotik tertentu, atmosfera, suhu dan masa pengeraman.

Penyediaan

Timbang 37 gr dari müeller sederhana Hinton dehidrasi dan larut dalam 1 liter air suling. Panaskan persekitaran sambil kacau untuk membantu pembubaran anda. Rebus selama 1 minit.

Bawa ke autoklaf untuk mensterilkan pada 121 ° C selama 15 minit. Semasa mengeluarkan dari autoklaf, fixola mesti diletakkan di bilik mandi dari maría hingga 50 ° c untuk menyejukkan. Tuangkan 25 hingga 30 ml ke dalam plat diameter 10 cm steril steril.

Plat harus ditinggalkan dengan ketebalan purata 4 mm (ideal), julat 3-5 mm dibenarkan.

Jika anda ingin menyediakan darah menggunakan Müeller Hinton, 5% darah kambing steril dituangkan sebagai pangkalan.

Boleh melayani anda: Glyceraldehyde 3-fosfat (G3P): Struktur, Fungsi

PH akhir medium mestilah antara 7.2 hingga 7.4.

Melabur dan simpan di dalam peti sejuk, sehingga digunakan. Biarkan plat mengambil suhu ambien sebelum menggunakan.

Warna medium yang disediakan adalah kuning air.

Aplikasi

Ia digunakan untuk melakukan antibiogram atau ujian kerentanan terhadap antibiotik kepada patogen pertumbuhan yang paling pesat.

Sekiranya agar itu ditambah dengan darah untuk melaksanakan antibiogram menuntut mikroorganisma seperti: Streptococcus pneumoniae, Haemophilus SP, Neisseria Meningitidis, dalam kalangan yang lain. Ia juga digunakan untuk mengasingkan Legionel pneumophila.

Teknik antibiogram

Sebelum melakukan antibiogram, penyelesaian bakteria bersamaan dengan 1.5 x 10 mesti disediakan⁸ Sel.

Untuk melakukan ini, 3 hingga 4 koloni tanaman tulen diambil dan digantung dalam sup soya triptych atau di Müeller Hinton sup, mengeram selama 2 hingga 6 jam dan kepekatan dengan larutan garam steril diselaraskan, membandingkannya dengan corak Mac Farland sebanyak 0.5%.

Sekiranya mereka menuntut mikroorganisma, koloni boleh digantung secara langsung sehingga kepekatan Mac 0.5%. Selanjutnya, plat Müeller Hinton disemai dengan swab yang diresapi dengan penyelesaian bakteria yang disediakan.

Untuk melakukan ini, swab direndam dalam larutan dan kemudian cecair berlebihan dikeluarkan oleh tekanan terhadap dinding tiub. Sejurus selepas swab melalui seluruh permukaan, tanpa pergi tanpa menyentuh, maka plat itu berubah sedikit dan menabur lagi. Operasi diulang 2 kali lebih banyak.

Biarkan selama 10 minit dan kemudian letakkan cakera antibiotik dengan pengapit steril, meninggalkan ruang 24 mm antara satu dan yang lain. Setelah meletakkan setiap album di agar, tekan masing -masing dengan pengapit untuk memastikan bahawa ia dilampirkan dengan baik.

Selepas proses, plat dilaburkan dan 35-37 ° C diinkubasi dalam aerobiosis selama 16 hingga 18 jam. Sekiranya ia adalah mikroorganisma yang menuntut, ia boleh merit microaerophilia dan jika antibiogram mengandungi cakera oxacillin, ia harus dibaca pada 24 jam.

Untuk mengukur diameter setiap halo, peraturan digunakan. Hasilnya mesti direkodkan dalam mm. Selanjutnya, nilai yang diperoleh dengan jadual titik potong yang diterbitkan oleh manual CLSI semasa berkorelasi.

Laporkan sebagai sensitif, pertengahan (i), atau tahan (r), mengikut mana -mana yang berkenaan.

Antibiotik dipilih mengikut mikroorganisma terpencil dan jenis jangkitan yang menghasilkan.

Dapat melayani anda: tahap organisasi makhluk hidup

Kadang -kadang penempatan strategik antibiotik mesti diingat untuk menunjukkan corak rintangan fenotip.

Penempatan Strategik Cakera di Müeller Hinton Agar

Untuk Enterobacteria, cakera asid clavulanic mesti diletakkan di hadapan cephalosporin generasi ke -3 dan ke -4. Pelebaran berbentuk telur menunjukkan bahawa ketegangan adalah pengeluar spektrum beta -laktamase yang dilanjutkan (blee). Ini bermaksud bahawa pesakit tidak boleh dirawat dengan mana -mana cephalosporin.

Di Staphylococcus, ia penting.

Tahan halo dalam erythromycin dan kebosanan di clindamycin halo menunjukkan bahawa ketegangan mempunyai rintangan yang boleh ditindas terhadap clindamycin, ketegangan (RIC). Ini bermaksud bahawa rawatan clindamycin tidak akan berkesan.

Untuk mencari strain amp C yang boleh diinduksi di Enterobacteria dan beberapa cakera Bacilli, Ceftazidime, Cefoxitin atau Piperacilin Non -Fermenting Gram atau Piperacilin.

Halo ditenun pada salah satu cakera yang menghadap ke imipenem menunjukkan kehadiran amp c yang boleh diinduksi.

Untuk mencari amp C konstitutif, pembetung 500 μg dengan cakera cloxacillin. Lebar sembuh di salah satu cephalosporin menunjukkan positif.

Anda juga boleh menggantikan cakera cloxacillin dengan 9 mm kertas penapis Whatman No. 6 yang diresapi dengan asid borik (400 μg) dengan jarak 18 mm. Ia ditafsirkan sama dengan yang sebelumnya.

Akhirnya, untuk menyiasat pengeluaran metalobethalactamases terutama dalam Pseudomonas aeruginosa, Cakera yang diresapi dengan 10 μL asid etilendiaminteraacetic (EDTA 750 μg) dan asid thioglycolic (SMA 300 μg) digunakan, yang menghadapi cakera imipenem dan meropenem, pada jarak 15 mm.

Ujian ini positif jika terdapat pelebaran imipenem atau meropenem halos ke album EDTA/SMA. Hasil ini mesti disahkan oleh ujian Hodge yang diubah suai.

Kaedah ini terdiri daripada inokulasi ketegangan Escherichia coli ATCC 25922 di Plat Müeller Hinton. Cakera imipenem di tengah plat diletakkan dan kemudian stro cakera dibuat ke pinggir dengan ketegangan P. Aeruginosa curiga. Anda boleh mencuba sehingga 4 strain setiap pinggan.

Ujian ini akan positif jika terdapat zon penyelewengan imipenem halo di sekitar stro.

Ia boleh melayani anda: Neolamarckismo: Latar Belakang dan Ciri

Punca hasil yang salah

-Cakera antibiotik yang dipelihara teruk dapat menghasilkan rintangan palsu. Contohnya, cakera oxacillin sangat terdedah kepada perubahan suhu.

-PH medium di bawah yang ditunjukkan (asid) menghasilkan halos yang lebih kecil dalam aminoglikosida dan makrolida (risiko rintangan palsu), dan halos yang lebih besar dalam penisilin, tetracycline dan novobiocin (risiko kepekaan palsu).

-Sekiranya pH berada di atas yang ditunjukkan (alkali) kesan yang diterangkan di atas dilaburkan.

-Media dengan kepekatan timin dan thymidin yang tinggi mempengaruhi mengurangkan sulfonamida dan trimetoprim perencatan hals.

-Kepekatan kalsium dan magnesium yang tinggi menghasilkan rintangan palsu aminoglycosides, polymixin B dan tetracyclines di hadapan strain Pseudomonas aeruginosa.

-Kepekatan rendah kalsium dan magnesium menghasilkan kepekaan palsu aminoglycosides, polyxin B dan tetracyclines di hadapan strain Pseudomonas aeruginosa.

-Kehadiran zink mempengaruhi hasil cakera karbapenem (imipenem, meropenem dan ertapenem).

-Ketebalan medium di bawah 3 mm menghasilkan hasil kepekaan palsu, sementara ketebalan di atas 5 akan menghasilkan rintangan palsu.

-Mobilisasi cakera dalam antibiogram akan memberikan halo yang cacat, kerana pelepasan antibiotik segera.

- Inokular yang sangat lemah mempengaruhi keputusan, kerana tidak akan ada seragam atau pertumbuhan yang berkumpul di agar, keadaan yang diperlukan untuk mengukur halos perencatan, sebagai tambahan kepada halos dapat memberikan lebih besar daripada biasa.

-Inoculos juga dimuatkan boleh memberi lebih kecil daripada hals biasa.

-Jangan menghormati jarak antara cakera membuat satu tumpang tindih dengan yang lain dan tidak dapat dibaca dengan betul.

-Inkubasi dengan co₂ Meningkatkan cakera tetracycline dan meticillin.

-Inkubasi pada suhu di bawah 35 ° C menghasilkan halos yang lebih besar.

-Agregat darah mengurangkan saiz halo sulfamida.

Batasan

Kepekaan antibiotik yang ditunjukkan dalam antibiogram terhadap mikroorganisma (In vitro) Bukan jaminan bahawa ia akan berfungsi Dalam vivo.

QA

Untuk mengetahui sama ada medium mengandungi jumlah Timina yang tepat, ketegangan mesti disemai daripada Enterococcus faecalis ATCC 29212 dan membuktikan kerentanan kepada trimetoprim sulfametoxazole (SXT), ia mesti memberikan halo yang sama atau> 20 mm untuk menjadi memuaskan.

Rujukan

1. Cona e. Syarat untuk kajian kerentanan yang baik melalui ujian penyebaran. Rev Chil Infect, 2002; 19 (2): 77-81
2. Laboratorium Britania. Müeller Hinton Agar. Terdapat di: Britanialab.com