Kentang dextrose, penyediaan dan penggunaan

Dia Dextrose Potato Agar Ia adalah medium kultur pemakanan yang kukuh, tidak selektif. Di dalamnya, spesies bakteria dan kulat dapat tumbuh, tetapi penggunaannya ditunjukkan terutama untuk pengasingan kulat dan ragi filamen. Ia juga dikenali sebagai medium PDA dengan ungkapan dalam bahasa Inggeris dextrose agar Inggeris.

Ia amat berguna untuk pengasingan kulat phytopathogenic, iaitu, yang mempengaruhi sayur -sayuran. Untuk menanam sampel dari sayur-sayuran yang dijangkiti, media lain seperti Sabouraud atau Malt-agar boleh digunakan, namun untuk penggunaan rutin, Dextrose Pope Agar lebih disukai dengan mendapatkan.

Aspergillus Niger dan Sinemas di Dextrose Pope Agar. Sumber: Alextrevelian 006 di Bahasa Inggeris Wikipedia [Domain Awam]/Joselrojas [CC BY-SA 4.0 (https: // creativeCommons.Org/lesen/by-sa/4.0)]

Ia juga digunakan untuk menghitung koloni kulat dalam sampel kosmetik, produk farmaseutikal dan beberapa makanan tenusu. Ia juga kondusif untuk menyemai sampel mengikis kulit untuk mencari dermatophytes, yang tumbuh dengan baik dalam medium ini, mengembangkan pigmen ciri mereka.

Paus dextrose sederhana adalah medium yang sangat mudah dan mudah untuk disediakan di makmal. Ia mengandungi, seperti namanya, infusi kentang, dextrose dan agar -agar. Di samping itu, bahan perencatan boleh ditambah untuk mengelakkan pertumbuhan bakteria dan meningkatkan selektiviti untuk spesies kulat.

[TOC]

Asas

Dextrose Pope Agar adalah medium budaya yang menyediakan unsur pemakanan yang diperlukan untuk pembangunan kulat dan ragi filamen.

Gabungan infusi kentang dengan glukosa menyediakan sumber tenaga yang sempurna sehingga terdapat pertumbuhan kulat yang memuaskan. Walaupun agar adalah orang yang memberikan konsistensi kepada alam sekitar.

Medium sahaja tidak menghalang pertumbuhan bakteria, oleh itu ia adalah medium yang tidak selektif. Untuk berbuat demikian memerlukan agregat bahan perencatan seperti asid tartarik atau antibiotik.

Penyediaan

-Buatan sendiri (bukan komersial) papa dextrose agar

Plat Petri

Ia disediakan seperti berikut:

Di tempat pertama, kentang dibasuh dengan baik dengan mengeluarkan tanah yang mereka miliki. Mereka dipotong dengan irisan halus dengan segala -galanya dan cangkang. 200 gr kentang ditimbang dan mendidih dalam satu liter air suling, selama setengah jam.

Masa selesai penapis atau ketegangan keseluruhan persediaan melalui kasa.

Cecair yang diperolehi diselesaikan dengan air suling sehingga mencapai satu liter. Infusi ditambah 20 gr agar -agar dan 20 gr dextrose, bercampur dengan baik dan autoklava pada 121 ° C, 15 paun tekanan selama 15 minit.

Boleh melayani anda: koevolusi

Biarkan sejuk sehingga 50 ° C dan berkhidmat di plat steril petri. Plat yang disediakan disimpan di dalam peti sejuk.

Baji

Anda juga boleh menyediakan baji kentang dextrose.

Dalam kes ini, sebelum mensterilkan autoklaf. Simpan di dalam peti sejuk.

Medium berada pada pH 5.6 ± 0.2, bagaimanapun, sesetengah makmal menambah 10% asid tartarik untuk menurunkan pH kepada 3.1 ± 0.1 dengan tujuan menghalang pertumbuhan bakteria.

Dalam erti kata yang sama, makmal lain lebih suka menambah antibiotik untuk melakukannya selektif untuk penanaman kulat dan mengelakkan perkembangan bakteria.

-Penyediaan komersial Pope Agar Dextrose

Timbang 39 gr gred dehidrasi dan larut dalam satu liter air suling. Tinggalkan selama 5 minit.

Campuran dipanaskan dengan kerap kali kacau sehingga jumlah pembubarannya. Seterusnya ia disterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit.

Anda boleh menyediakan plat atau baji. Teruskan seperti yang diterangkan di atas.

PH ialah 5.6 ± 0.2. Sekiranya pH 3.1 dikehendaki, 14 ml asid tartarik sterar perlu ditambah kepada 20% sebelum disajikan di dalam pinggan.

Warna medium yang tidak bersedia adalah kuning air dan disediakan adalah jelas amber dengan penampilan yang sedikit mendung atau opalescent.

Aplikasi

Proses untuk menanam sampel tumbuhan di periuk dextrose

-Untuk daun dengan bintik

Daun dipotong.

Di dalam kapal 50 cc dengan alkohol 50%, letakkan kepingan daun (potongan -potongan yang berwarna dan sihat), untuk membasmi permukaan sebanyak 20 hingga 30 saat. Buang alkohol dan tambahkan natrium hipoklorit 20% selama 40 hingga 50 saat jika mereka daun halus dan tambah masa hingga 80 saat jika kulit dan batang.

Buangkan natrium hipoklorit dan ambil kepingan yang dibasahi dengan pengapit steril dan letakkannya di permukaan sederhana (maksimum 10 keping). Letakkan tarikh dan masukkan dari 20 hingga 30 ° C.

-Untuk buah -buahan dan ubi

Sekiranya buahnya berisi, buka buah -buahan yang dipengaruhi oleh kulat dan mengambil kepingan dengan pisau bedah steril, kedua -dua sakit dan bahagian yang sihat dan meletakkannya di permukaan agar agar.

Sekiranya buahnya adalah sitrus, seperti lemon atau oren, benihnya mesti dibuka dan ditanam.

Boleh melayani anda: Phosphatidylinositol: Struktur, Latihan, Fungsi

Apabila permukaan buah terjejas dan sporing diperhatikan, idealnya adalah menggunakan kaedah parut pada plat; Ini terdiri daripada bermain sporous dengan spatula berbentuk "L" yang disterilkan dan disejukkan, dan kemudian disemai di zigzag 2 hingga 3 kali pada agar.

-Untuk bijirin

Mereka membasmi kuman sama seperti yang diterangkan di daun dan seterusnya diletakkan di agar.

-Untuk cawangan dan batang

Raspecue korteks dilakukan dan kemudian kepingan bahagian yang sihat dan sakit diambil dan ditaburkan secara langsung di agar.

Plak yang ditanam diinkubasi dalam aerobiosis pada 20-30 ° C selama 72 jam.

Proses untuk menanam skala kulit, rambut atau kuku di Dextrose Pope Agar

Sampel harus dilakukan dengan menggunakan lembaran pisau bedah No. 11, sama ada untuk memotong rambut, kulit atau skala kuku yang terjejas untuk mencari dermatofit. Sebelum mengambil sampel, kawasan dengan alkohol 70% mesti dibasmi kuman.

-Sampel kulit

Dalam luka penipuan, kelebihan kecederaan mesti dikikis, kerana ada kemungkinan besar mencari kulat.

Dalam luka exudative sampel diambil dengan swab kering atau basah. Menanam segera ke atas Paus Dextrose atau Sabouraud Agar. Elakkan cara pengangkutan.

Satu lagi kaedah pengambilan sampel adalah melalui teknik Mariat dan Ada Campos's Carpet Square. Dalam kes ini, kawasan yang terjejas digosok 5 kali dengan sekeping bulu steril untuk tanaman berikutnya.

Sampel boleh diletakkan secara langsung dalam medium budaya.

-Sampel rambut

Bergantung pada patologi, bahagian yang terjejas atau akar bermula dapat dipotong. Letakkan sampel dalam medium budaya.

-Contoh kuku

Mereka boleh dikikis atau memotong bahagian tertentu kuku yang terjejas. Akan bergantung pada jenis kecederaan.

Potong sampel ke dalam bit 1 mm sebelum menyemai untuk meningkatkan kebarangkalian hubungan kulat dengan medium budaya.

Prosedur pengenalan

Tanah jajahan yang diperolehi di dalam pinggan diasingkan dalam tiub mengandungi.

Kajian mikroskopik (pemerhatian struktur dan pembentukannya), boleh dilakukan oleh mikrokultur atau pemerhatian langsung ke mikroskop antara lembaran dan lamella.

Boleh melayani anda: histidine: ciri, struktur, fungsi, makanan

Koloni mengira

Medium ini juga boleh digunakan untuk menentukan beban kulat dan ragi yang terdapat dalam sampel tumbuhan, makanan, kosmetik atau ubat. Untuk tujuan ini, kentang kentang ditambah agar dengan antibiotik digunakan, seperti: (chloramphenicol, chlorotetracycline atau kedua -duanya).

Tuangkan 1 ml sampel - lebih baik dicairkan - pada plat petri steril dan kosong, kemudian cairkan pistol kentang dextrose dan biarkan ia sejuk pada suhu 45 ° C. Tuangkan ke atas plat petri dan putar sehingga homogenisasi. Tinggalkan rehat sehingga.

Inkubasi dalam aerobiosis pada 20-25 ° C (acuan) atau pada 30-32 ° C (ragi) selama 5 hingga 7 hari atau lebih, bergantung kepada jenis kulat yang dicari dan jenis sampel. Dua plat boleh digunakan untuk mengeram kedua -dua julat suhu.

Profesor koloni kulat dalam contoh makanan. Agar kentang dextrose ditambah dengan antibiotik. Sumber: Pxhere.com foto/777267

Penyelenggaraan strain kulat

Dextrose Pope Agar boleh digunakan untuk mengekalkan strain kulat yang berdaya maju selama beberapa tahun.

Untuk ini, kulat ditanam dalam baji kentang dextrose dan apabila kulat ditanam, ia ditutup dengan minyak mineral. Minyak mesti disterilkan dalam autoklaf selama 45 minit, dan mempunyai kelikatan kira -kira 300 hingga 330 Saybolt. Minyak mesti melebihi 1 hingga 2 cm hujung bezel.

QA

Dari setiap lot yang disediakan, plat 1 atau 2 mesti diambil dan diinkubasi pada 25 ° C selama 48 jam atau 20 ° C selama 96 jam. Kawalan kemandulan yang baik adalah salah satu di mana pembangunan koloni tidak dipatuhi.

Anda juga boleh menggunakan kawalan yang diketahui atau disahkan seperti:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton Mentagrophytes ATCC 9533. Dalam semua kes pertumbuhan yang baik dijangka.

Rujukan

1. Laboratorium Britania. Glycosado Pot. 2015. Terdapat di: Britanialab.com
2. Makmal Neogen. Kentang dextrose. Terdapat di: FoodSafety.Neogen.com
3. Makmal Insumolab. Dextrose Potato Agar. Terdapat di: insumolab.Cl
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Pan -American Editorial S.Ke. Argentina.
5. Rumah rumah g. Mycology Umum. 1994.  Edisi ke -2. Universiti Pusat Venezuela, Edisi Perpustakaan. Venezuela Caracas.
6. Aceituno m. Penilaian kualiti mikrobiologi dalam bayangan mata, jenis habuk padat makmal pengeluaran nasional, menurut Pharmacoea USP 2005. Tesis untuk memilih tajuk ahli kimia farmaseutikal. Universiti San Carlos dari Guatemala.
7. Cuétara m. Memproses sampel permukaan. Majalah Mycology Ibero -American. 2007; ms. 1-12