TCBS AGAR Apa itu, asas, penyediaan, penggunaan

Dia TCBS AGAR Ia adalah budaya pepejal yang sangat selektif dan berbeza, digunakan untuk pengasingan dan penanaman bakteria genus Vibrio, terutamanya Vibrio cholerae, v. Vulnificus dan V. parahaemolyticus sebagai patogen utama genre ini.

Akronim TCBS bermaksud thiosulfate hempedu sitrat. Agar ini juga dikenali sebagai medium terpilih untuk getaran. Formula asal dicipta oleh Nakanishi dan kemudian diubahsuai oleh Kobayashi.

Ia terdiri daripada ekstrak yis, peptone daging, tripteine, natrium sitrat, natrium thiosulfate, hempedu lembu, sukrosa, natrium klorida, sitrat ferrik, biru bromool, thymol biru dan agar.

Komposisi ini membolehkan perkembangan spesies vibrium yang mencukupi dari sampel air, makanan dan najis; Kecuali Vibrio Hollisae, yang tidak tumbuh dalam medium ini. Di samping itu, medium TCBS dapat menghalang pertumbuhan bakteria lain yang disertakan, terutama koliform.

Oleh kerana masalah gastrousus dan usus besar yang serius yang dihasilkan oleh beberapa spesies genus Vibrio, diagnosis mereka sangat penting. Manusia terutamanya dijangkiti dengan penggunaan makanan mentah atau kecil di laut atau perairan yang tercemar, tetapi juga melalui jangkitan luka.

Oleh sebab itu, makmal klinikal mesti termasuk TCBS agar dalam kajian copoults sampel najis cecair, terutamanya dengan penampilan air beras. Terutama jika pesakit merujuk kepada hubungan dengan air laut atau menggunakan kerang atau ikan.

Asas

Ekstrak ragi, peptone daging, dan tripteína, adalah sumber berkhasiat medium ini. Walau bagaimanapun, TCBS agar adalah medium yang tidak ramah untuk kebanyakan bakteria.

Selektiviti yang tinggi diberikan oleh agregat natrium sitrat dan hempedu lembu; Kedua -duanya adalah agen penghalang yang juga menyediakan pH alkali ke medium, menyekat pertumbuhan flora yang disertakan dan memihak kepada pertumbuhan V. Cholerae, antara spesies lain. Terutamanya Vibrio cholerae sangat sensitif terhadap keasidan.

Bagi bahagiannya, natrium klorida mengimbangi baki osmotik ke alam sekitar. Di samping itu, kerana kepekatannya tinggi, ia juga bertindak sebagai ejen perencat, memihak kepada pertumbuhan bakteria halofil.

Tarks adalah gula fermentable yang bersama -sama dengan penunjuk pH biru dan biru biru dan biru memberi watak pembezaan sederhana. Atas sebab ini, dengan medium ini adalah mungkin untuk membezakan strain penapaian dari yang tidak berpengalaman.

Koloni strain sukrosa yang ditanam berkembang dengan warna dan akan mengubah medium dari hijau ke kuning dengan pengeluaran asid. Lutut yang tidak ditanam tumbuh dan sisa sederhana warna asal (hijau).

Begitu juga, medium ini mengandungi natrium thiosulfate sebagai sumber sulfur dan sitrat ferrik sebagai ejen yang mendedahkan. Kedua -duanya menunjukkan bakteria yang mampu menghasilkan hidrogen sulfida (gas tanpa warna). H₂S terbentuk dari thiosulfate dan kemudian bertindak balas dengan sitrat ferric yang mendakan hitam yang kelihatan terbentuk.

Akhirnya, agar adalah yang memberikan konsistensi yang kukuh kepada alam sekitar.

Penyediaan

Timbang 89 gr medium dehidrasi dan larut dalam satu liter air suling. Bantu pembubaran untuk pemanasan dan pergolakan yang kerap. Campuran boleh direbus sehingga 2 minit.

Medium ini tidak autoklava. Selepas penyelesaiannya, ia dihidangkan secara langsung di atas plat steril. Dengan mengukuhkan mereka diperintahkan dengan cara terbalik dalam platelet dan disimpan di dalam peti sejuk (2-8 ° C) sehingga digunakan.

Medium selepas disediakan mestilah pada pH 8.6 ± 0.2.

Warna medium dehidrasi adalah kuning air atau kuning air, dan warna medium adalah hutan hijau atau hijau biru.

Penting untuk membiarkan pinggan marah sebelum menyemai sampel.

Gunakan

Sampel yang paling biasa untuk pengasingan yang mengasyikkan adalah najis diare.

Sampel najis tidak dapat disemai dengan segera di persekitaran selektif, mereka mesti diangkut di tengah -tengah Cary Blair.

Untuk meningkatkan sensitiviti tanaman, najis dapat diluluskan oleh air peptonada ke pH 8.4 sebagai cara pengayaan selama 8 jam maksimum, dari sana ia subjektif ke medium TCBS.

Perlu diingat bahawa beberapa strain yang mengasyikkan boleh menyebabkan septikemia pada pesakit imunosupresi, oleh itu mereka boleh diasingkan dari budaya darah. Begitu juga, sampel makanan dan makanan dari laut dapat dianalisis apabila terdapat wabak wabak penyakit kolera.

Disemai

Inokulum sampel di bawah kajian mesti menonjol, yang ditaburkan dilakukan oleh kaedah keletihan keletihan. Plat diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 24 jam dalam aerobiosis.

Koloni yang dianggap sebagai Vibrio cholerae Mereka adalah tepi yang sederhana, licin, legap, nipis dan kuning kerana mereka menanam sukrosa.

Begitu juga menanam spesies dari V. Alginolyticus, V. sungai, V. Hareyi, v. Cincinnatiensis, v. Furnissii, v. Metschnikovii dan beberapa V. Vulnificus. Spesies penting klinikal lain seperti V. parahaemolyticus Mereka tidak menanam sukrosa, berkembang sebagai koloni hijau zaitun.

Sebaliknya, perlu diingat bahawa beberapa strain aeromones dan plesiomones yang oksidase (+) dapat tumbuh dalam medium ini, membangunkan koloni kuning yang dapat mengelirukan doktor. Walaupun beberapa strain pseudomonas juga oksidase (+) tumbuh sebagai koloni hijau dan juga V. parahaemolyticus.

Batasan

Ujian oksidase yang positif untuk genus Vibrio tidak boleh dilakukan dari koloni yang diperoleh dari TCBS agar, kerana hasil yang diperolehi akan menjadi negatif palsu. Sebatian sederhana mengganggu dengan kuat dalam ujian ini. Oleh itu, ia mesti dilakukan dari subjek dalam agar darah.

QA

Untuk membuktikan bahawa medium dalam keadaan baik itu dinasihatkan.

Untuk ini anda boleh menggunakan strain:

-Vibrio cholerae - Pertumbuhan yang memuaskan (koloni kuning, kelebihan lutak).

-Vibrio parahaemolyticus - Pertumbuhan yang memuaskan (koloni dengan pusat hijau dan kelebihan lutut).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - Pertumbuhan yang memuaskan (koloni kuning dengan halos warna yang sama di sekitar koloni).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - Jumlah atau perencatan separa (koloni kuning kecil atau lutut).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- Perencatan Separa atau Jumlah (Koloni Biru).

-Escherichia coli ATCC 25922 - dihalang sepenuhnya.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Penghambatan Jumlah atau Separa. (Koloni kecil kelebihan tepi hijau).

Inkubasi medium tanpa inokulasi tidak boleh berubah.

Rujukan

1. Makmal BD. BD. TCBS AGAR. Terdapat di: BD.com
2. Laboratorium Britania. TCBS sederhana. Terdapat di: Britanialab.com