Agar Tsi Apa, Yayasan, Penyediaan, Kegunaan

Dia TSI AGAR o Triple Sugar Iron Agar adalah medium budaya pepejal yang berfungsi sebagai ujian biokimia untuk membimbing pengenalan awal Bacilli negatif Gram. Ia berdasarkan bukti.

Komposisi dan asasnya sangat mirip dengan ujian hierro Kigler, dengan perbezaan yang terakhir hanya mengandungi glukosa dan laktosa. Sebaliknya, -Selayan Nama Menunjukkan - Agar besi tiga kali mengandungi tiga karbohidrat yang boleh ditapis: glukosa, laktosa dan sukrosa.

Di samping. Ia juga mengandungi ammonium sulfat ferus, natrium thiosulfate, natrium klorida, fenol merah dan agar.

Ketidakupayaan mikroorganisma dalam menanam glukosa yang hadir di alam sekitar dengan segera tidak termasuknya daripada kepunyaan keluarga Enterobacteriaceae. Oleh itu, ujian ini penting untuk menentukan laluan pengenalan mana yang perlu diambil untuk menentukan jantina dan spesies.

Setiap makmal memutuskan sama ada ia berfungsi dengan TSI Agar atau dengan Kligler Hierro.

Asas

Setiap sebatian memenuhi fungsi dalam medium.

Natrium dan Agar Chloride

Natrium klorida diperlukan untuk mengekalkan keseimbangan osmotik medium. Walaupun agar memberi anda konsistensi yang kukuh.

Penunjuk PH (Phenol Red)

PH sederhana yang disediakan seimbang pada 7.3 dan penunjuk pH (fenol merah) bertukar menjadi kuning di bawah 6.8. Ini bermakna bahawa sejumlah kecil asid yang dihasilkan oleh penapaian gula akan menjadikan oren merah menjadi medium kuning.

Sekiranya ia tidak berlaku penapaian akan ada alkali medium kerana penggunaan peptone, beralih dari oren merah menjadi merah kuat.

Derivatif Protein (Ekstrak Ragi, Ekstrak Daging, Peptone dan Protein Peptone)

Apabila bakteria memetabolisme protein yang terdapat di TSI agar, amina dihasilkan yang alkali medium (terutamanya pada tahap bezel), kerana reaksi memerlukan oksigen. Amina menjadikan bezel menjadi merah kuat.

Tetapi ini bergantung pada keupayaan penapaian bakteria atau tidak karbohidrat.

Penapaian karbohidrat (glukosa, laktosa dan sukrosa)

Kajian penapaian gula dapat memberikan beberapa imej dan masing -masing ditafsirkan secara berbeza. Tafsiran ujian membahagikan mikroorganisma ke dalam 3 kategori: Fermenter bukan glukosa, penumbuk bukan laktosa dan penumbuk laktosa/sukrosa.

Harus diingat bahawa jumlah glukosa di tengah adalah terhad, sementara kepekatan laktosa dan sukrosa 10 kali lebih tinggi.

Bakteria keluarga Enterobacteriaceae dan mikroorganisma penapaian glukosa lain akan mula menanam gula ini kerana karbohidrat yang paling mudah adalah untuk mendapatkan tenaga untuk mendapatkan tenaga.

Boleh melayani anda: Penyelesaian isotonik: komponen, penyediaan, contoh

Sebaliknya, laktosa dan sukrosa adalah karbohidrat kompleks yang mesti diuraikan dan menjadi glukosa supaya mereka dapat memasuki kitaran Embden-Meyerhof.

-Mikroorganisma bukan fermentari

Apabila mikroorganisma yang disuntik tidak dapat menanam glukosa, lebih kurang dapat ditapai karbohidrat lain. Oleh itu, asid tidak terbentuk di sini, tetapi terdapat pembentukan amina dalam bezel kerana penggunaan peptones.

Dalam kes ini, serong bertukar kuat.

Tafsiran: k / k bermaksud latar belakang alkali / alkali atau neutral

Dalam imej yang terdapat pada permulaan artikel lihat imej tiub d.

Hasil ini menunjukkan bahawa mikroorganisma bukan milik keluarga Enterobacteriaceae.

-Mikroorganisma bukan fermentari laktosa/sukrosa

Jika bakteria dapat menanam glukosa tetapi tidak laktosa atau sukrosa, berikut akan berlaku:

Bakteria akan menggunakan semua glukosa yang hadir selepas kira -kira 6 hingga 8 jam, dapat mengasingkan kedua -dua bezel dan taco; iaitu, agar akan menjadi kuning sepenuhnya. Tetapi apabila glukosa habis dan diberi kemustahilan menggunakan laktosa dan sukrosa, bakteria akan memulakan metabolisme protein.

Reaksi ini memerlukan oksigen, jadi degradasi peptonas berlaku di permukaan (bezel). Amina yang dihasilkan alkleinize bevel berliku kuning ke merah. Reaksi ini dibuktikan pada 18 hingga 24 jam pengeraman.

Tafsiran: k/a bermakna bezel alkali dan asid taco.

Dalam imej yang terdapat pada permulaan artikel lihat imej tiub b.

-Mikroorganisma fermentari/sukrosa

Mikroorganisma yang mampu menanam laktosa dan sukrosa jelas dapat ditapai glukosa. Selepas jumlah glukosa yang minimum dalam medium habis, piruvat yang terbentuk mula metabolisme untuk membentuk asid melalui kitaran aerobik Krebs, dan dalam tempoh 8 hingga 12 jam, seluruh medium akan menjadi kuning.

Sekiranya bakteria dapat membentangkan laktosa atau sukrosa, asid akan terus dihasilkan, dan selepas 18 hingga 24 jam seluruh tiub -bisel dan taco- akan terus kuning.

Harus diperhatikan bahawa penggunaan glukosa mengambil.

Tafsiran: A/ A Bermakna Latar Belakang Bevel/ Asid Asid. Boleh membentangkan gas atau tidak.

Dalam imej yang terdapat pada permulaan artikel lihat imej tiub a.

Boleh melayani anda: sitosin: struktur, fungsi, sifat, sintesis

Pengeluaran gas

Beberapa mikroorganisma mampu menghasilkan gas semasa penapaian gula. Gas dibuktikan dalam tiub kerana tekanan yang dikenakan di dalam agar. Tekanan menyebabkan pembentukan gelembung atau anjakan agar. Kadang kala pembentukan gas dapat patah ke alam sekitar.

Adalah penting apabila menyemai medium TSI, tusukan dilakukan dengan bersih melalui pusat agar sehingga sampai ke bawah. Sekiranya tusukan menyimpang ke dinding tiub, ia boleh menyebabkan positif palsu dalam pengeluaran gas, kerana ia akan melarikan diri dari saluran yang terbentuk dengan salah.

Pengeluaran gas, serta tindak balas yang berlaku di dalam serong agar, memerlukan oksigen, oleh itu disyorkan bahawa tiub ditutup dengan topi kapas, dan jika penutup baquelite digunakan, ia tidak sepatutnya diselaraskan sepenuhnya.

Pengeluaran gas dilaporkan sebagai positif (+) atau negatif (-).

Natrium tiosulfat dan ammonium sulfat ferus (pengeluaran sulfida hidrogen)

Bakteria yang mampu menghasilkan hidrogen sulfida (gas tidak berwarna), ambil sulfur natrium thiosulfate yang terdapat dalam medium. Setelah H terbentuk₂S bertindak balas dengan ammonium sulfat ferus, menghasilkan sulfida besi (mendakan hitam yang jelas kelihatan).

H₂S dilaporkan sebagai positif (+) atau negatif (-).

Dalam imej yang terdapat pada permulaan artikel lihat imej tiub c.

Penyediaan

Timbang 62.5 gr dari setengah -Segar Iron Agar (TSI) Dehidrasi dan larut dalam satu liter air suling.

Panas untuk membubarkan agar. Didih. Bagikan 4 ml medium dalam tiub ujian 13/100 dengan penutup kapas.

Sterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit. Keluarkan dari autoklaf dan biarkan berdiri cenderung. Harus dijaga bahawa kedua -dua pangkalan dan serong mempunyai jarak yang sama.

Simpan dalam peti sejuk 2-8 ° C. Biarkan marah sebelum menyemai ketegangan bakteria.

Warna medium dehidrasi adalah kuning air dan medium yang disediakan berwarna merah

PH akhir medium yang disediakan ialah 7.3 ± 0.2.

Aplikasi

Ujian TSI digunakan secara meluas di peringkat makmal mikrobiologi. Ujian ini sangat diperlukan untuk membimbing jenis ujian yang mesti digunakan untuk mencapai pengenalan genus dan spesies. Pelaksanaan dan tafsiran anda yang baik dapat menjimatkan bahan dan bekerja.

Sekiranya hasilnya adalah TSI K/K K dan ujian oxidase cytochrome memberi positif, ujian harus digunakan untuk mengenal pasti bacilli negatif gram yang tidak berpengalaman, seperti pseudomonas, alkali, achromobacter, burkholderia, antara genres lain. Jika ia adalah oksidase negatif, ia berorientasikan ke arah acinetobacter, stenotrophomonas, dll.

Ia boleh melayani anda: taksimiliti: sejarah, ciri dan kepentingan

Sebaliknya, jika TSI A/A atau K/A diperolehi dan ujian oksidase cytochrome adalah negatif, mereka mengurangkan nitrat ke nitrit, kami pasti akan menjadi mikroorganisma milik keluarga Enterobacteriace. Dalam kes ini, laluan pengenalan akan berorientasikan kepada ujian tertentu untuk kumpulan bakteria ini.

Sebaliknya, jika imej K/A atau A/A diperolehi dan ujian oksidase sitokrom adalah positif, ujian tambahan akan diarahkan kepada pengenalpastian strain penapaian yang tidak tergolong dalam keluarga Enterobacteriaceae, seperti: Aeromonas , Plesiomonas, Vibrio dan Pasteurella.

TSI dengan hidrogen sulfida, oksidase negatif, akan membimbing genre berikut keluarga Enterobacteriaceae: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella atau Salmonella.

TSI dengan sulfida hidrogen yang terhad atau sederhana di bezel alkali dengan latar belakang alkali dan oksidase positif, akan membimbing ujian untuk mengenal pasti gram gram yang tidak menghasilkan pengeluar bacilli negatif₂S, sebagai Shewanella Putrefaciens.

Akhir Erysipelothrix rhusiopathiae.

Disemai

Medium TSI mesti disuntik dengan koloni murni, diasingkan dalam tanaman utama atau selektif. Sekiranya koloni diambil dari cara terpilih yang disemai dengan sampel dengan flora bercampur, penjagaan mesti diambil hanya dari permukaan, kerana di bahagian bawah tanah jajahan mungkin ada strain yang dapat dihalang dalam medium itu.

Oleh itu, pemegangnya tidak boleh sejuk dalam medium selektif dan kemudian mengambil tanah jajahan dan memasuki medium TSI.

Yang ditaburkan akan dilakukan dengan lurus atau jarum. Tusuk akan dijalankan, menjaga bahawa ia adalah melalui pusat tengah sehingga sampai ke bawah, dan kemudian disemai selesai memusnahkan permukaan berbentuk zigzag. Jangan buat dua punca.

Inkubasi pada suhu 37 ° C dalam aerobiosis selama 18-24 jam. Mentafsirkan pada masa ini, tidak sebelum ini, atau selepasnya.

Batasan

Ujian TSI harus dibaca antara 18 hingga 24 jam pengeraman. Pembacaan sebelum masa ini dapat memberikan penapaian palsu a/a. Walaupun, bacaan selepas masa ini, boleh membawa kepada imej negatif palsu yang tidak palsu, disebabkan oleh penggunaan pepton yang alkali medium.

Rujukan

1. Laboratorium Britania. TSI AGAR (Triple Sugar Iron Agar). 2015. Terdapat di: Britanialab.com
2. Makmal BD. Gula Iron Agar Triple (TSI Agar). 2003. Terdapat di: BD.com