Urea sup apa, asas, penyediaan, kegunaan

Dia Urea sup Ia adalah medium budaya cecair, digunakan untuk menunjukkan kehadiran enzim ureasa dalam mikroorganisma tertentu. Ureasa adalah enzim mikrob yang berlaku dengan cara yang konstitutif, iaitu, disintesis tanpa mengira atau tidak dengan menjadi substrat yang bertindak.

Fungsi ureASA berkaitan dengan penguraian sebatian organik. Tidak semua mikroorganisma dapat mensintesis enzim ini, oleh itu penentuannya di makmal membolehkan anda mengenal pasti strain bakteria tertentu dan bahkan membezakan antara spesies jantina yang sama.

Terdapat dua jenis ujian urea: Stuart dan Christensen. Mereka berbeza dalam komposisi dan kepekaan mereka. Yang pertama adalah istimewa untuk menunjukkan sejumlah besar ureasa yang dihasilkan oleh spesies genus protein.

Yang kedua lebih sensitif dan dapat mengesan sejumlah kecil ureasa akhir -akhir ini oleh genre bakteria lain, seperti Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, Helicobacter dan Mycobacterium.

Sup urea Stuart terdiri daripada urea, natrium klorida, dipotassium phosphat.

Manakala sup atau cengkaman urea Christensen terdiri daripada peptonas, natrium klorida, fosfat monopotásic, glukosa, urea, fenol merah, air sulingan dan agar-gut. Yang terakhir hanya jika ia adalah medium pepejal.

Asas

Enzim ureasa menghidrolisis. Sebatian ini bertindak balas untuk membentuk produk akhir yang disebut ammonium karbonat.

Urea de stuart sup

Sup urea Stuart lebih buffered dengan pH 6.8. Oleh itu, mikroorganisma mesti dapat membentuk banyak ammonium untuk menjadikan merah fenol. PH mesti naik melebihi 8.

Oleh itu, sup urea Stuart selektif untuk spesies proteus, memberikan hasil positif dalam 24 hingga 48 jam pengeraman, dan tidak berkesan untuk bakteria yang menghasilkan beberapa jumlah ureasa atau yang perlahan -lahan menghidrolisis urea.

Ini kerana spesies Proteus dapat menggunakan urea sebagai sumber nitrogen. Sebaliknya, bakteria yang menghasilkan urasa lain memerlukan sumber tambahan.

Ia boleh melayani anda: succinate dehydrogenase: struktur, fungsi, peraturan, penyakit

Walau bagaimanapun, Pérez et al. (2002) menentukan bahawa sup urea Stuart adalah efisien seperti urea agar Christensen, untuk menentukan ureasa dalam strain yis dari terang.

Penulis kajian mendakwa telah mencapai kebetulan 100% dengan kedua -dua media (Stuart dan Christensen) dengan mengeram selama 24 dan 48 jam; membuat pengecualian bahawa strain yang berjaya mengubah media menjadi warna merah jambu yang kuat.

Penjelasan ini perlu, kerana Lodder (1970) mengatakan bahawa hampir semua ragi berjaya meletakkan bezel urea de Christensen urea kepada pucat rosado. Ini kerana mereka boleh menghidrolisis urea dalam jumlah yang minimum, dan pembentukan amina oleh decarboxylation oksidatif asid amino permukaan. Ini tidak boleh ditafsirkan sebagai positif.

Sup atau agar urea Christensen

Sup atau agar urea Christensen kurang buffered, dapat mengesan sedikit ammonium. Di samping itu, medium ini diperkaya dengan peptonas dan glukosa. Sebatian ini menjadikan ureasa lain yang menghasilkan mikroorganisma yang tidak tumbuh di sup stuart berkembang.

Begitu juga, ujian urea Christensen menawarkan hasil yang lebih cepat, terutama untuk Proteus, dapat memberikan positif dalam hanya 30 minit sebagai waktu minimum dan sehingga 6 jam sebagai waktu maksimum.

Selebihnya mikroorganisma yang menghasilkan Ureasa berjaya mengubah warna persekitaran sedikit selepas 6 jam, dan kuat selepas 24, 48, 72 jam atau lebih, dan juga beberapa strain dapat memberikan reaksi yang lemah setelah 5 atau 6 hari.

Tafsiran kedua -dua media (Stuart dan Christensen)

Medium pada asalnya berwarna oren kuning dan tindak balas positif akan mengubah warna dari medium hingga fucsia merah jambu. Keamatan warna berkadar terus dengan jumlah ammonium yang dihasilkan.

Reaksi negatif akan meninggalkan warna asal kecuali untuk ragi, yang dapat memberikan merah jambu pucat dengan medium urea Christensen.

Penyediaan

Urea de stuart sup

Timbang gram yang diperlukan mengikut petunjuk rumah komersial. Larut dalam air suling yang lebih baik.  Jangan gunakan haba untuk dibubarkan, kerana urea adalah sensitif haba.

Boleh melayani anda: monosakarida

Untuk mensterilkan kaedah penapisan membran digunakan. Untuk ini, penapis millipor digunakan dengan liang diameter 0.45 μ. Jangan gunakan autoklaf. Sebaik sahaja penyelesaiannya ditapis, ia diedarkan dalam tiub steril. Untuk mendapatkan hasil yang boleh dipercayai, antara 1.5 ml mesti dipindahkan sebagai jumlah minimum pada 3 ml sebagai kuantiti maksimum setiap tiub.

Teruskan peti sejuk dan marah sebelum menggunakan.

Sekiranya kaedah penapisan tidak tersedia, medium mesti digunakan dengan segera untuk mendapatkan hasil yang boleh dipercayai.

Satu lagi cara untuk menyediakan sup urea Stuart adalah seperti berikut:

Beberapa rumah komersial menjual medium asas untuk ujian urea, tidak termasuk urea.

Jumlah yang ditunjukkan oleh rumah komersial adalah berat. Ia larut dalam air suling dan disterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit. Biarkan sedikit dan apabila medium hangat 100 ml penyelesaian urea yang disediakan 20% dan penapisan dengan penapisan ditambah.

Ia diedarkan dalam tiub steril, seperti yang diterangkan di atas.

Sup atau agar urea Christensen

-Penyediaan penyelesaian urea

Timbang 29 gr urea dehidrasi dan larut dalam 100 ml air suling. Gunakan kaedah penapisan untuk mensteril. Bukan autoclavate.

-Agar asas urea

Larutkan 24 gr atas dehidrasi di 950 ml air suling. Sterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit. Biarkan berdiri sehingga mencapai suhu 50 ° C dan tambahkan urea sebelum ini disediakan dengan cara aseptik.

Tuangkan 4 hingga 5 ml ke dalam tiub steril dan kecondongan sehingga mereka menguatkan. Puncak seruling panjang mestilah.

Medium ini juga boleh disediakan dalam bentuk cecair.

Aplikasi

Ujian urea sangat berkesan untuk membezakan genre proteus dari genre lain dari keluarga Enterobacteriaceae, memandangkan reaksi pesat yang disediakan oleh Proteus.

Sekiranya komposisi Christensen digunakan, ujian membantu membezakan antara spesies dari genus yang sama. Sebagai contoh, S. Haemolyticus dan s. Warneri sPada Staphylococcus coagulase negatif dan betahemolytic, Tetapi mereka berbeza dengan apa S. Haemolyticus Ia negatif dan S. Warneri Urea positif.

Boleh melayani anda: sistem saraf entic

Sebaliknya, McNulty berjaya menggunakan sup urea 2% Christensen untuk mengkaji kehadiran Helicobacter pylori Dalam sampel biopsi yang diambil dari mukosa gastrik (rantau Antral).

Kehadiran H. pylori Ia dibuktikan dengan ujian urea positif. Tempoh untuk memerhatikan hasilnya berkadar terus dengan jumlah mikroorganisma yang hadir.

Seperti yang dapat dilihat, ia adalah kaedah mudah untuk diagnosis Helicobacter pylori Dalam biopsi gastrik.

Akhirnya, ujian ini juga berguna untuk membezakan spesies dari genre Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus dan Mycobacteria.

Ujian urea disemai

Kedua -dua kaedah memerlukan inokulum mikrob yang kuat untuk mengoptimumkan hasilnya. Koloni bakteria lebih disukai diambil dari agar darah dan ragi sabouraud agar, kecuali beberapa pengecualian. Inokulum diemulsi dalam persekitaran cecair.

Untuk sup urea Stuart, 37 ºC diinkubasi selama 24 hingga 48 jam, mengetahui bahawa ia hanya mencari strain genus protein apabila ketegangan adalah bakteria. Untuk ragi, anda boleh mengeram pada suhu 37 ° C atau pada suhu bilik selama 24 hingga 48 jam pengeraman.

Dalam kes sup urea Christensen, 37 ºC diinkubasi selama 24 jam. Sekiranya ujian negatif, ia boleh diinkubasi sehingga 6 hari. Sekiranya ujian memberi positif sebelum 6 pagi, ia menunjukkan bahawa ia adalah ketegangan genre protein.

Dalam kes urea Agar Christensen, bezel Agar sangat disuntik, tanpa tusukan. Sup adalah incuba dan mentafsirkan dengan cara yang sama.

QA

Untuk menguji medium, anda boleh menggunakan kawalan kawalan, seperti Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae  ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 dan Salmonella typhimurium.  Dua yang pertama mesti memberikan hasil yang positif dan dua hasil negatif yang terakhir.

Rujukan

1. Laboratorium Britania. Christensen Media (urea asas agar). Terdapat di: Britanialab.com