Yayasan Biuret, Reagen, Prosedur, Kegunaan

Dia Biuret Ia adalah reagen yang digunakan untuk penentuan rantaian panjang dan protein rantai pendek. Ia terutama digunakan dalam bidang kimia analisis dan uroanalisis untuk menyiasat kepekatan jumlah serum, plasma dan protein air kencing.

Nilai protein dapat ditingkatkan atau menurun dalam patologi tertentu. Gambar hipoproteinemias biasanya dibentangkan pada pesakit dengan penyakit buah pinggang, dalam gizi dan pada pesakit dengan jangkitan kronik.

Struktur kimia kompleks yang terbentuk dalam ujian biuret biuret positif biuret. Sumber: Yikrazuul [Domain Awam]/Flickr

Walaupun hyperproteinemia diperhatikan dalam patologi seperti pelbagai myeloma, lupus erythematosus sistemik, endokarditis bakteria, meningitis bakteria, waldenstrom macroglobulinemia, antara lain, antara lain, antara lain, antara lain, antara lain, antara lain, antara lain, antara lain, antara lain, antara lain, antara lain, antara lain.

Sebaliknya, kehadiran protein dalam air kencing adalah disebabkan oleh penapisan albumin oleh buah pinggang. Ini adalah tingkah laku patologi yang mesti dikaji.

Dalam pengertian ini, biuret sangat berguna, kerana ia membolehkan mengukur kehadiran protein serum, plasma, air kencing, antara banyak sampel lain.

Malah biuret boleh digunakan untuk menyiasat kehadiran dan kepekatan protein dalam sampel komposisi yang tidak diketahui atau tidak diketahui. Oleh itu, ia digunakan secara meluas di kawasan penyelidikan.

Ujian Biuret didasarkan pada mengesan pautan peptida. Ujian diberikan dalam medium alkali. Sampel mesti mengandungi sekurang-kurangnya dua pautan peptida supaya kompleks warna kuasa ungu dapat dibentuk. Kompleks ini dibentuk oleh kesatuan pautan dan ion tembaga.

[TOC]

Asas

Reagen Biuret terdiri daripada kalium hidroksida, sulfat cuprik dan natrium dan kalium tartrato. Natrium hidroksida digunakan untuk alkali persekitaran, kerana keadaan ini sangat diperlukan untuk reaksi berlaku.

Bahan yang bertindak balas dengan protein adalah sulfat cuprik, manakala natrium tartrato mempunyai fungsi tidak membenarkan pembentukan hidroksida tembaga, yang cenderung mendakan dan mengganggu reaksi.

Boleh melayani anda: penapaian: sejarah, proses, jenis, contoh

Sekiranya dalam sampel terdapat bahan yang mempunyai ikatan peptida (polipeptida atau protein) ujian akan memberi positif.

Tindak balas ditafsirkan sebagai positif apabila penyelesaian menjadi ungu. Warna dihasilkan oleh pembentukan kompleks antara sekurang-kurangnya dua ikatan peptida yang mempunyai kumpulan bersama dan kation cuprik semasa.

Kompleks Violet boleh dibentuk dalam dua cara: satu adalah kerana kehilangan proton kumpulan di tengah -tengah yang mengikat logam (kasar), dan yang lain oleh kesatuan elektron oksigen dan nitrogen yang bebas dan mengikat dengan tembaga.

Reaksi ini boleh berubah dalam intensiti dan warna bergantung kepada jenis protein.

Ujian boleh dilakukan secara kualitatif atau kuantitatif. Dalam bentuk kualitatif ia dilaporkan sebagai positif atau negatif. Walaupun dalam bentuk kuantitatif kepekatan dapat diukur dengan kaedah spektrofotometrik.

Reaksi dibaca antara 540-560 nm. Keamatan warna berkadar terus dengan kepekatan pautan peptida dalam sampel.

Reagen

-Natrium hidroksida (NaOH) pada 20%

-1% sulfat cupric pentahydrate (CUO₄. 5h₂Sama ada)

-Natrium campuran dan tetrahydrate kalium tartrato (Knac₄H₄Sama ada₆· 4h₂Sama ada)

Kestabilan reagen Biuret

-Ia mesti disimpan dalam penyejukan.

Prosedur

Teknik

-Letakkan 100 μl sampel atau corak yang akan dianalisis dalam tiub ujian.

-Tambah 2 ml natrium hidroksida.

-Campurkan dengan baik.

-Tambah 5 ml reagen biuret.

-Campurkan dan tinggalkan 25 minit pada suhu bilik, tutup dan lindungi dari cahaya.

-Perhatikan pembentukan atau tidak warna dan ukur spectofotometrically.

Lengkung penentukuran

Untuk melakukan lengkung penentukuran, anda boleh menggunakan albumin serum bovine sebagai corak. Beberapa kepekatan disediakan daripadanya. Contohnya 25, 50, 75, 100, 125 dan 150%.

Reaksi dipasang dengan semua kepekatan yang diketahui dan penyerapan dibaca ke panjang gelombang 540 nm. Dengan data kepekatan yang diketahui dan bacaan menyerap lengkung penentukuran dijalankan.

Ia boleh melayani anda: Flora dan Fauna China: Spesies Wakil

Dalam setiap penentuan atau banyak sampel yang diproses, disarankan. Sebagai corak penentukuran, anda boleh menggunakan albumin serum bovine 0.1-2 mg/ml.

Pengukuran dibuat dalam spektrofotometer 540 nm.

Linearity dipenuhi sehingga kepekatan 12 g/dl.

Gangguan

Bahan yang mengganggu ujian biuret

Walaupun ia tidak terlalu kerap, perlu diperhatikan bahawa semasa pelaksanaan ujian ini, beberapa bahan dapat mengganggu. Sebagai contoh, kehadiran ammonium dapat menghalang pembentukan warna.

Begitu juga, bahan lain dapat menyerap panjang gelombang yang sama, seperti pigmen tertentu.

Sebaliknya, gangguan boleh dijana apabila bahan lain selain pautan peptida membentuk kompleks dengan garam logam. Contoh: Beberapa karbohidrat dan lipid tertentu.

Sekiranya ia menunjukkannya untuk menganalisis beberapa jenis mendakan, ia mesti ditapis atau disentrifugasi sebelum membuat ujian.

Bahan yang tidak mengganggu ujian biuret

Ujian ini tidak terjejas oleh kehadiran:

-Bilirubin sehingga kepekatan 20 mg/dl.

-Hemoglobin ke kepekatan 750 mg/dl.

-Dextran ke kepekatan 30 g/l.

-Trigliserida sehingga kepekatan 4000 mg/dl.

Kelebihan

-Ia adalah kaedah mudah untuk melaksanakan.

-Ia adalah ujian ekonomi.

-Ia mempunyai kekhususan protein yang tinggi.

-Beberapa gangguan.

Kekurangan

Ia mempunyai sedikit kepekaan untuk mengesan jumlah protein yang rendah. Kerja yang dilakukan oleh Fuentes dan kolaborator menegaskan bahawa kaedah ujian biuret mempunyai had pengesanan 1 mg/ml protein dan had kuantifikasi 3 mg/ml.

Walau bagaimanapun, satu lagi penyelidikan yang dijalankan di University of Amazon melaporkan nilai yang lebih rendah. Had pengesanan yang dilaporkan oleh kajian adalah 0.020 mg/ml dan had kuantifikasi 1.33 mg/ml.

Aplikasi

Reagen atau ujian biuret digunakan untuk penentuan protein dalam sampel klinikal dan bukan klinikal dalam makmal rutin dan penyelidikan.

Dapat melayani anda: ciri makhluk hidup

Patologi yang mengkaji atau menurun Protein

Dalam banyak patologi, penting untuk menentukan kepekatan jumlah protein dalam sampel klinikal, dapat tinggi atau menurun.

Mereka dinaikkan:

-Pelbagai myeloma,

-Sistemik lupus erythematosus,

-Endokarditis bakteria,

-Meningitis bakteria,

Waldestrom macroglobulinemia, antara lain.

Ia berkurangan dalam:

-Kekurangan buah pinggang,

-Orang yang mengalami kekurangan zat makanan,

-Pesakit dengan jangkitan kronik, antara lain.

Sampel klinikal

Sampel klinikal yang paling biasa adalah serum, plasma dan air kencing. Nilai normal protein serum atau plasma ialah 6.0-8.8 gr/dl.

Kepekatan protein pada orang dewasa pada orang dewasa tidak melebihi angka 150 mg/24 -hour.

Nilai normal indeks protein air kencing/kreatinin dalam air kencing

Bayi: < a 0,50 mg

Kanak -kanak 2 tahun ke atas: Indeks: 0.20 mg

Dewasa: < 0,2 mg

Sampel bukan klinikal

Reaksi biuret boleh digunakan untuk pelbagai jenis sampel bukan klinikal, seperti produk tenusu, sera antiofid atau bahan yang tidak diketahui yang mana kehadiran protein ingin disiasat.

Rujukan

1. Vázquez J, Guerra L, Quintana J, Ramírez J, Fernando RY Vázquez dan. (2014). Pencirian fizikal dan kandungan protein ekstrak bendalir mangrove ostrion (Crassostrearizophorae). Jurnal Kimia Kuba, 26 (1), 66-74. Diperoleh pada 26 Jun 2019, dari http: // scielo.SLD
2. Chaparro S, Lara A, Sandoval A, Sosa S, Martínez J, Gil J. Pencirian fungsional badam benih mangga (Mangifera menunjukkan l.) Majalah Sains Pembangunan. 2015; 6 (1): 67-75
3. "Biuret." Wikipedia, ensiklopedia percuma. 19 Jun 2019, 16:37 UTC. 26 Jun 2019, 22:18
4.  Fuentes F, Quispe I, García J. Kaedah Biuret Standardisasi Untuk Mengukur Jumlah Protein Dalam Serum Antibotropik Berbilang Purpose yang Dihasilkan di Pusat Produk Biologi Kebangsaan. BOL - Inst NAC Health 2012; 18 (11-12).  Terdapat di: repositori.Ins.Gob.PE
5. Makmal Winer. Jumlah protein. Kaedah Colorimetric Untuk Menentukan Jumlah Serum dan Protein Plasma. Terdapat di: Wiener-Lab.com.ar