Bahan, penyediaan dan kegunaan EC

Dia EC Broth atau sup Escherichia coli Ia adalah medium budaya cecair terpilih. Medium ini disyorkan oleh kaedah standard untuk mengira jumlah keseluruhan dan fecal, dengan teknik nombor yang paling mungkin (NMP) dalam sampel air dan makanan, di mana ejen utama yang terlibat adalah Escherichia coli.

Sup EC terdiri daripada tripteine, laktosa, garam hempedu, fosfat pipotasi, fosfat monopotasi, natrium klorida dan air. Formulanya direka bentuk secara strategik untuk memihak kepada pertumbuhan koliform total dan kotoran dan mencegah pembangunan mikroorganisma lain yang disertakan.

Perwakilan kiasan penyediaan sup EC. Sumber: Pixabay.com

Bakteria Escherichia coli Ini adalah koliform kotoran utama yang hadir sebagai bahan pencemar dalam sumber air dan makanan, sebagai punca kesan gastrousus yang penting.

Harus diperhatikan bahawa terdapat banyak serotype Eschchia coli; Antaranya, Enterohemorrágica (EHEC), Enteroinvasive (EIEC), Enteopathogenic (EPEC), Enterotoxigenic (ETEC) dan Enteroagregative (EAEC) dapat disebutkan.

Medium ini mempunyai keupayaan untuk membolehkan pembangunan mereka semua, tetapi tidak dapat membezakannya dari satu sama lain. Untuk ini, ujian tambahan mesti dilakukan.

Kajian mikrobiologi air dan makanan untuk nombor yang paling mungkin (NMP) untuk mencari jumlah dan koliform fecal adalah protokol yang terdiri daripada beberapa fasa; Fasa menganggap, fasa pengesahan dan fasa penyelesaian. Sup EC digunakan dalam fasa pengesahan.

[TOC]

Asas

EC Broth

Medium EC didasarkan pada menyediakan unsur pemakanan yang diperlukan untuk perkembangan optimum jumlah dan koliform fecal, di mana bakteria dimasukkan Escherichia coli.

Unsur pemakanan ini disediakan oleh triptein, menjadi sumber peptida dan asid amino yang sangat baik. Di samping itu, ia juga mengandungi laktosa, karbohidrat yang ditapai yang menyediakan tenaga dan membolehkan anda menunjukkan jika bakteria menghasilkan gas.

Sebaliknya, medium mengandungi garam hempedu yang memberikan sifat selektif, kerana ia menghalang pertumbuhan mikroorganisma positif gram yang mungkin ada dalam sampel.

Ia boleh melayani anda: Flora dan Fauna Nuevo León

Begitu juga, phosphat dipotasy. Sistem ini perlu, kerana laktosa yang terkandung dalam sup cenderung untuk mengasingkan medium apabila ia ditapai oleh mikroorganisma, tetapi ini dikompensasi oleh garam fosfat.

Oleh itu, unsur -unsur ini penting, kerana keasidan tanpa kawalan dapat mempengaruhi perkembangan mikroorganisma yang dicari yang baik.

Bagi bahagiannya, natrium klorida menstabilkan alam sekitar, sementara air adalah pelarut larutan yang hadir dan memberikan konsistensi cecair kepada alam sekitar.

Sup ec diubah suai dengan novobiocin

OKREND dan ROSE mencipta pelbagai sup EC, yang dipanggil EC Modified EC Broth. Pengubahsuaian terdiri daripada penurunan kepekatan garam hempedu dan agregat 20 mg/dl novobiocina.

Pengubahsuaian ini memihak kepada pemulihan strain Escherichia coli Enterohemorrágica (O157: H7).

Serotype bakteria ini menyebabkan kolitis hemoragik yang teruk yang boleh menyebabkan sindrom uremik hemolitik (SUH); yang seterusnya dapat menghasilkan kegagalan buah pinggang akut, dengan kadar kematian yang tinggi yang dapat mencapai sehingga 50% pada orang tua.

Oleh kerana morbidly disebabkan oleh bakteria ini untuk penggunaan makanan yang tercemar, Jabatan Pertanian Amerika Syarikat (USDA) sangat mengesyorkan penggunaan medium ini.

Penyediaan

EC Broth

Timbang 37.4 gr medium dehidrasi dan larut dalam 1 liter air suling. Campuran mesti dibenarkan selama 5 minit. Selanjutnya, dalam sumber haba, ia akan melambatkan melambai.

Setelah dibubarkan, ia diedarkan dalam tiub ujian yang sebelum ini dikondisikan dengan tiub Durham di dalamnya. Sterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit.

Boleh melayani anda: sphingomyeline: apakah, struktur, fungsi, sintesis

PH sederhana mestilah 6.9 ± 0.2.  Warna medium dehidrasi adalah kuning air dan disediakan adalah jelas amber.

Sup disimpan di dalam peti sejuk sehingga digunakan. Pada masa penggunaan sup mesti berada pada suhu bilik.

Sebaliknya, sup EC juga boleh disediakan dalam kepekatan berganda.

Sup ec diubah suai dengan novobiocin

Timbang 36.7 gr medium dehidrasi dan larut dalam 1 liter air. Selebihnya penyediaan adalah sama dengan yang diterangkan di atas.

Gunakan

Analisis Coliform Jumlah dan Fecal

Sup EC sesuai untuk fasa pengesahan kajian koliform dengan kaedah NMP, baik dalam sampel air, seperti dalam produk farmaseutikal dan makanan.

Sup kuah pengeluaran yang lebih ketat dan gas yang diperolehi dalam fasa yang menganggap harus dipulihkan dalam sup hijau terang pada 2% dan dalam sup EC.

Untuk jumlah coliforms EC sup diinkubasi dalam aerobiosis selama 24 hingga 48 jam pada suhu 37 ° C, dan untuk koliform fecal mereka diinkubasi dalam aerobiosis selama 24 hingga 48 jam pada 44 ° C.

Dalam kedua -dua kes, ia ditafsirkan seperti berikut: Tiub keruh dengan pengeluaran gas dianggap positif. Sekiranya dalam 24 jam tidak ada pengeluaran gas yang berterusan pengeraman sehingga 48 jam.

Kacang EC positif pergi ke fasa pengesahan lengkap, yang terdiri daripada ganjaran dalam media selektif seperti Mac Conkey, EMB atau Endo Endo Agar.

Jika sup yang digunakan diubah suai dengan novobiocin, tiub positif disyorkan untuk menyerupai mac conkey agar dengan sorbitol.

QA

Kawalan kualiti mesti dilakukan dari setiap kumpulan sederhana yang disediakan. Pada mulanya, kemandulan persekitaran mesti. Dalam pengertian ini, satu atau dua sup tanpa inokulasi dalam aerobiosis selama 24 jam pada suhu 37 ° C diinkubasi. Hasil yang diharapkan adalah sup telus, tanpa kekeruhan atau perubahan warna.

Boleh melayani anda: kecekapan interspecific: ciri dan contoh

Kedua, pertumbuhan strain yang diketahui mesti dinilai, untuk ini anda boleh menggunakan bakteria berikut: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Dalam semua kes, perkembangan mikrob yang memuaskan dijangka, memerhatikan sup mendung dengan pengeluaran gas untuk Dan. coli dan tanpa gas untuk salmonella.

Strain lain yang boleh dimasukkan ke dalam kawalan adalah: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Strain ini mesti dihalang sepenuhnya.

cadangan

-Penempatan tiub Durham sangat diperlukan untuk kajian koliform.

-Mengedarkan medium dalam tiub ujian sebelum mensterilkan, tidak pernah selepas itu.

-Jangan gunakan jika medium mempunyai lebih daripada 3 bulan yang disediakan.

-Jangan gunakan jika ada perubahan ciri biasa medium yang diperhatikan.

Rujukan

1. Laboratorium Britania. EC Tengah. 2015. Terdapat di: Britanialab.com
2. Dan. coli Enterohemorrhagic. Pusat Keselamatan Makanan dan Kesihatan Awam. 2010. Terdapat di: CFSPH.iastate.Edu
3. Perbadanan Neogen. Sederhana EC. Terdapat di: FoodSafety.Neogen.com
4. Neogen. Medified EC diubah suai dengan Novobiocina. Terdapat di: FoodSafety.Neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, oleh Castillo M. Pengesanan, pengasingan dan pencirian Escherichia coli Pengeluar toksin Shiga dari daging tanah segar dari tukang daging Concepción, wilayah Tucumán. Rev arg of microbiol; 2010, 42 (4): 284-287.  Terdapat di: www.Scielo.org.