Asas kromatografi cecair keberkesanan (HPLC) asas, peralatan, jenis

The Kromatografi Cecair Kecekapan Tinggi Ini adalah teknik instrumental yang digunakan dalam analisis kimia yang dibenarkan untuk memisahkan campuran, membersihkan dan mengukur komponennya, serta melaksanakan kajian lain. Ia dikenali dengan singkatan HPLC, yang berasal dari bahasa Inggeris: Kromatografi cecair prestasi tinggi.

Oleh itu, seperti namanya, ia berfungsi dengan memanipulasi cecair. Ini terdiri daripada campuran yang terdiri daripada analit atau sampel kepentingan, dan satu atau lebih pelarut yang bertindak sebagai fasa mudah alih; iaitu, yang menyeret analit sepanjang pasukan HPLC dan lajur.

Peralatan HPLC. Sumber: DQWYY [CC BY-SA 4.0 (https: // creativeCommons.Org/lesen/by-sa/4.0)]

HPLC disebarkan secara meluas oleh makmal analisis kualiti di banyak syarikat; seperti ahli farmasi dan makanan. Penganalisis yang berkenaan mesti menyediakan sampel, fasa mudah alih, periksa suhu dan parameter lain, dan letakkan jalan di dalam roda atau karusel supaya peralatan melakukan suntikan secara automatik.

Peralatan HPLC ditambah pula dengan komputer yang mana kromatogram yang dihasilkan dapat diperhatikan, serta memulakan analisis, mengawal aliran fasa mudah alih, program jenis elusi (isokratik atau kecerunan), dan menghidupkan pengesan (UV -Vis atau spektrofotometer massa).

[TOC]

Asas

Tidak seperti kromatografi cecair konvensional, seperti kertas atau lajur yang disumbat dengan silika gel, HPLC tidak bergantung kepada graviti supaya cecair itu mempunyai fasa pegun. Sebaliknya, bekerjasama dengan pam akhbar yang tinggi, yang mengairi fasa mudah alih atau eluen melalui lajur dengan intensiti yang lebih besar.

Dengan cara ini, tidak perlu.

Boleh melayani anda: karbonoid: unsur, ciri dan kegunaan

Tetapi kecekapan teknik ini tidak disebabkan secara eksklusif untuk perincian ini, tetapi juga kepada zarah pengisian kecil yang membentuk fasa pegun. Menjadi lebih kecil, kawasan hubungannya dengan fasa mudah alih lebih besar, jadi ia akan berinteraksi dengan tahap yang lebih baik dengan analit dan molekulnya akan dipisahkan lebih banyak.

Kedua -dua ciri ini, ditambah dengan fakta bahawa teknik ini membolehkan gandingan pengesan, menjadikan HPLC jauh lebih tinggi daripada kromatografi lapisan halus atau kertas. Pemisahan lebih cekap, fasa mudah alih bergerak lebih baik melalui fasa pegun, dan kromatogram membolehkan untuk mengesan beberapa analisis dalam analisis.

Peralatan

Rajah Ringkas Operasi Peralatan HPLC. Sumber: Gabriel Bolívar.

Gambar rajah yang dipermudahkan ditunjukkan di atas bagaimana pasukan HPLC berfungsi. Pelarut ditemui di dalam bekas masing -masing, diatur dengan hos untuk pam untuk membawa jumlah kecil mereka ke dalam peralatan; Kami mempunyai fasa mudah alih.

Fasa mudah alih atau eluen mesti dipakai terlebih dahulu, supaya gelembung tidak menjejaskan pemisahan molekul analit, yang dicampur dengan fasa mudah alih apabila peralatan telah membuat suntikan.

Lajur kromatografi terletak di dalam ketuhar yang membolehkan pengaturcaraan suhu. Oleh itu, untuk sampel yang berbeza terdapat suhu yang mencukupi untuk mencapai pemisahan yang tinggi, serta katalog luas lajur dan jenis tampalan atau fasa pegun untuk analisis khusus dalam analisis tertentu.

Fasa mudah alih dengan analit yang dibubarkan memasuki lajur, dan daripadanya terlebih dahulu menghilangkan molekul yang "merasa" kurang afiniti untuk fasa pegun, dan kemudian eluuate mereka yang paling disimpan olehnya. Setiap molekul eluida menghasilkan isyarat yang digambarkan dalam kromatogram, di mana masa pengekalan molekul berasingan diperhatikan.

Boleh melayani anda: cecair: konsep, gas, tanah dan seismik, seminal

Dan sebaliknya, fasa mudah alih selepas melalui pengesan berakhir di bekas sisa.

Jenis HPLC

Terdapat banyak jenis HPLC, tetapi di antara mereka semua yang paling cemerlang adalah empat berikut.

Kromatografi fasa normal

Kromatografi fasa normal merujuk kepada di mana fasa pegun adalah sifat kutub, sementara mudah alih apolar. Walaupun ia dipanggil normal, sebenarnya ia adalah yang paling kurang digunakan, menjadi fasa songsang yang paling meluas dan cekap.

Kromatografi fasa songsang

Menjadi fasa songsang, kini fasa pegun adalah apolar dan fasa mudah alih kutub. Ini amat berguna dalam analisis biokimia, kerana banyak biomolekul dibubarkan lebih baik dalam pelarut air dan kutub.

Kromatografi pertukaran ion

Dalam jenis kromatografi ini, analit, dengan beban positif atau negatif, bergerak melalui lajur menggantikan ion yang dimilikinya. Semakin besar beban, semakin besar pengekalannya, jadi ia digunakan secara meluas untuk memisahkan logam peralihan ion.

Kromatografi pengecualian molekul

Kromatografi ini, bukannya memisahkan, bertanggungjawab untuk membersihkan campuran yang dihasilkan. Seperti namanya, analit dipisahkan tidak lagi bergantung pada bagaimana yang berkaitan dengan fasa pegun, tetapi mengikut saiz dan massa molekulnya.

Molekul terkecil akan lebih ditahan daripada molekul besar, kerana yang terakhir tidak terperangkap di antara liang -liang pengisian polimer lajur.

Aplikasi

HPLC membolehkan analisis kualitatif dan kuantitatif. Berkenaan dengan kualitatif, apabila membandingkan masa pengekalan kromatogram dalam keadaan tertentu, kehadiran sebatian tertentu dapat dikesan. Kehadiran ini boleh menunjukkan penyakit, pencemaran, atau penggunaan dadah.

Boleh melayani anda: larut dan pelarut

Oleh itu, ia adalah satu pasukan adalah sebahagian daripada makmal diagnostik. Begitu juga, ia berada dalam industri farmaseutikal, kerana ia membolehkan untuk mengesahkan kesucian produk, serta kualiti yang sama berkaitan dengan pembubarannya dalam persekitaran gastrik. Bahan permulaan juga mengemukakan kepada HPLC untuk membersihkannya dan menjamin prestasi yang lebih baik dalam sintesis dadah.

HPLC membolehkan anda menganalisis dan memisahkan campuran protein kompleks, asid amino, karbohidrat, lipid, porphyrin, terpenoid, dan pada dasarnya ia adalah pilihan yang sangat baik untuk bekerja dengan ekstrak tumbuhan.

Dan akhirnya, kromatografi pengecualian molekul membolehkan anda memilih polimer saiz yang berbeza, kerana beberapa mungkin lebih kecil atau besar. Dengan cara ini, produk dengan massa molekul purata rendah atau tinggi diperolehi, ini menjadi faktor penentu dalam sifatnya dan aplikasi atau sintesis masa depan.

Rujukan

1. Hari, r., & Underwood, a. (1989). Kimia Analisis Kuantitatif. (Kelima ed.). Pearson Prentice Hall.
2. Bussi Juan. (2007). Kromatografi cecair keberkesanan tinggi. [Pdf]. Pulih dari: jari.Edu.Oh
3. Wikipedia. (2019). Kromatografi cecair berprestasi tinggi. Diperoleh dari: dalam.Wikipedia.org
4. Clark Jim. (2007). Kromatografi cecair prestasi tinggi. Pulih dari: chemguide.co.UK
5. Matthew Barkovich. (5 Disember 2019). Kromatografi cecair prestasi tinggi. Kimia Librettexts. Pulih dari: chem.Libretxts.org
6. G.P. Thomas. (15 April 2013). Kromatografi Cecair Prestasi Tinggi (HPLC) - Kaedah, faedah dan aplikasi. Pulih dari: azom.com