Half Löwenstein-Jensen Foundation, Penyediaan dan Penggunaan

Dia Tengah Löwenstein-Jensen Ia adalah medium pepejal selektif untuk pengasingan dan perkembangan bakteria genus Mycobacterium, seperti Mycobacterium tuberculosis, M. Avium, antara lain, kecuali spesies lepra, yang tidak dapat ditanam.

Bakteria genus Mycobacterium tidak tumbuh dalam media kultur konvensional, oleh itu perlu merancang cara khas untuk pengasingannya. Medium asal dicipta oleh Löwenstein dan kemudian diubahsuai oleh Jensen.

Separuh Löwenstein-Jensen dengan koloni Mycobacterium tuberculosis. Sumber: Agarwal et al / Biomed Central Ltd., Dengan ihsan Perpustakaan Imej Biologi

Pengubahsuaian terdiri daripada penghapusan pewarna merah Congo, menggantikannya untuk kepekatan malachite hijau yang lebih besar. Ia juga mengubah kepekatan magnesium sitrat dan fosfat monopotasic.

Medium Löwenstein-Lose kini mengandungi kanji papate, asparragin, sitrat magnet, fosfat monopo-fasa, sulfat magnet, hijau malachite, asid nalidíxico, sikloheksimid.

Mycobacteria biasanya terpencil dari laman web yang tidak steril, seperti dahi, air kencing, abses, antara lain. Ini bermaksud bahawa kebanyakan sampel akan mengandungi mikrobiota biasa di kawasan tersebut, ditambah patogen.

Itulah sebabnya medium Löwenstein-Jensen mengandungi satu siri inhibitor dalam komposisinya yang diwakili oleh malachite hijau, antibiotik dan antijamur.

Di samping itu, sampel yang datang dari tapak bukan steril mesti dibatalkan dan dinetralkan sebelum disemai di medium Löwenstein-Jensen.

[TOC]

Asas

Kehadiran telur dan gliserin dalam medium Löwenstein-Jensen merangsang pertumbuhan mycobacteria kerana mereka menyediakan asid lemak dan protein yang diperlukan untuk pembangunan mikroorganisma ini.

Medium Löwenstein-Jensen mengandungi Malachite Green, yang merupakan perencat mikrobiota yang disertakan. But it also contains nalidíxic acid (35 µg/ml), which inhibits the gram negative microbiota, cycloheximide (400 µg/ml), which inhibits saprophytes fungi and yeasts, and lynching (2µ/ml), which inhibits the microbiota Gram positive.

Beberapa rumah komersial lebih suka menambah gabungan antibiotik berikut: Polymixina B 200.000 unit/l, amphotericin B 10 mg/l, carbenicillin 50 mg/l dan trimetoprima 10 mg/l.

Medium ini tidak mengandungi agar, oleh itu pemejalan medium berlaku oleh pembekuan albumin yang hadir dalam telur semasa pensterilan.

Penyediaan

Timbang 37.3 g medium dehidrasi dalam 600 ml air suling yang sebelum ini telah ditambah 12 ml gliserol. Campuran dipanaskan, sering kacau sehingga pembubarannya. Autoclavar medium pada 121 ° C selama 15 minit.

Boleh melayani anda: 12 peringkat pembangunan manusia dan ciri -cirinya

Sebaliknya, penggantungan homogen 1000 ml telur segar harus disediakan dalam keadaan aseptik. Masukkan penggantungan telur pada 600 ml yang disediakan pada suhu 50 - 60 ° C, mengelakkan gelembung udara.

Penyelesaian antibiotik juga ditambah selepas pensterilan dalam autoklaf.

Tuangkan medium dalam tiub ujian steril dengan palam benang. Panaskan tiub pada 85 ° C selama 45 minit dalam kedudukan cenderung.

Warna medium yang disediakan adalah Aguamarine Hijau dan boleh membentangkan titik putih untuk kehadiran lipid telur.

PH sederhana mestilah 7.2 ± 0.2

Simpan tiub peti sejuk dan dilindungi dari cahaya langsung sehingga digunakan. Tenggelam sebelum menyemai.

Terdapat pengubahsuaian medium yang disebut "Pengubahsuaian Gruft Löwenstein Jensen". Ini mengandungi sebatian yang sama seperti medium klasik tetapi RNA-5mg/100 ml ditambah, dan sebagai inhibitor ia mengandungi malachite hijau 0.025 g/100 ml, penisilin 50 U/ml dan asid Nalidíxico 35 ug/ml.

Aplikasi

Medium Löwenstein-Jensen digunakan untuk penebat mycobacteria, dari pelbagai jenis sampel. Adalah disyorkan untuk melakukan pewarnaan ziehl-neelsen ke mana-mana sampel di mana kehadiran mycobacteria disyaki.

Beberapa sampel datang dari tapak steril tetapi yang lain tidak. Sampel yang tidak stabil mesti dibatalkan seperti yang mungkin:

Pudar

Sampel Sputum mesti dibatalkan seperti berikut: Tentukan jumlah sampel Sputum di ML dan tambahkan kepada jumlah yang sama 4% NaOH dan Incube hingga 37 ° C.

Goncang campuran kerap dalam tempoh 30 minit. Selanjutnya sentrifugue pada 3000 rpm selama 30 minit.

Buang supernatan pada penyelesaian disinfektan fenolik. Gunakan sedimen menyemai, tetapi pertama pH mesti dinetralkan.

Untuk meneutralkan sedimen, h digunakan₂SW₄ pada 5% dengan kehadiran penunjuk fenol merah sehingga ia membawa kepada pH neutral yang berasal dari warna salmon.

Mencuci gastrik, mencuci bronkial dan bronkial

Dalam kes ini, sampel harus sentrifuge pada 3000 rpm selama 30 minit. Supernatan dibuang dan sedimen digunakan. Untuk menghilangkan sedimen, 3 ml 4% NaOH ditambah dan sering diaduk pada suhu 37 ° C selama setengah jam.

Boleh melayani anda: stroma (histologi)

Centrifuge lagi, supernatan dibuang dan sedimen digunakan. Yang terakhir mesti dinetralkan seperti yang dijelaskan dalam sampel dahak.

Air kencing

Biarkan sampel di dalam peti sejuk selama 24 jam. Pisahkan supernatan. Sedimen baki mesti disentrifugasi selama 30 minit pada 3000 rmp. Buang supernatan lagi dan rekonstitusi sedimen dengan 3 ml penyelesaian fisiologi steril.

Tambahkan 3 ml 4% NaOH dan teruskan ke dekontaminasi dan peneutralan seperti yang diterangkan sebelumnya.

Cecair askit, cecair pleura, cecair cerebrospinal

Dalam sampel jenis ini ia disentrifugasi dan supernatan dibuang. Buat gram ke sedimen atau perhatikan secara langsung dalam mikroskop; Sekiranya bakteria tidak dipatuhi, laluan dekontaminasi tidak diperlukan dan tidak meneutralkan.

Dalam kes ini, sampel dapat disemai secara langsung menggunakan sedimen. Sekiranya terdapat bakteria, teruskan untuk menghilangkan dan meneutralkan seperti yang diterangkan di atas.

Biopsi

Sampel jenis ini harus ditambah 5 ml air suling ke sentrifuge kemudian pada 1500 rpm selama 10 minit. Buang supernatan dan menyentuh sedimen pada 3500 rpm selama 30 minit. Gunakan sedimen untuk menanam medium budaya.

Hiophare Laryngeal

Swab mesti diperkenalkan ke dalam tiub steril yang mengandungi bahagian air suling yang sama dan 4% NaOH. Swab mesti ditekan di dinding tiub supaya sampel dicairkan dalam cecair. Sentrifuge dan gunakan sedimen. Meneutralkan sedimen seperti yang telah diterangkan.

Disemai

Media Löwenstein-Jensen disuntik dengan menambahkan 0.5 ml sampel pada permukaan medium. Putar tiub untuk mengedarkan sampel di seluruh medium. Jangan memakai pemegang platinum.

Anda boleh menanam tiub kedua yang mengandungi setengah batu untuk mengasingkan Mycobacterium bovis dan spesies lain yang tidak tumbuh di persekitaran Löwenstein-Jensen.

Inkubasi

Tiub yang diinokulasi diinkubasi dalam aerobiosis pada suhu 37 ° C, dengan tudung yang sedikit malas dan cenderung pada kira -kira 5 ° dan dilindungi dari cahaya. Persekitaran dengan karbon dioksida dapat diperkaya pada 5-10%. Periksa tanaman dua kali seminggu sehingga penampilan koloni.

Ia boleh melayani anda: exudate hidung: Apa itu, prosedur, penanaman

Apabila sampel telah diserap, tapas diselaraskan. Masa inkubasi maksimum adalah 8 minggu, jika selepas masa ini tidak ada pertumbuhan dilaporkan sebagai negatif.

QA

Sebagai kawalan kualiti, anda boleh menggunakan strain berikut:

Mycobacterium tuberculosis ATCC 27294,  Mycobacterium Kansasii ATCC 12478, Mycobacterium avium ATCC 19291, Mycobacterium bovis ATCC 19219, Mycobacterium fortuitum ATCC 6841, Escherichia coli ATCC 25922, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Cryptococcus neoformans ATCC 32045

Untuk tiga spesies pertama yang disebutkan, perkembangan yang sangat baik dijangka, kepada M. Fortuitum Pertumbuhan mesti baik, sementara untuk M. Bovis pertumbuhan yang terhad atau sifar dijangka. Sementara, spesies selain daripada genus Mycobacterium mesti dihalang sepenuhnya.

Batasan

Medium yang disediakan mesti melindungi diri mereka dari cahaya, pendedahan yang berpanjangan ke cahaya menjadikan vire sederhana dari hijau ke biru, dalam hal ini medium tidak lagi dapat digunakan. Ini kerana hijau malachite adalah photosensitif.

Medium, kerana ia mengandungi telur, boleh tercemar dengan mudah jika tidak dimanipulasi. Ia boleh dibubarkan jika tercemar dengan bakteria proteolitik.

Penanaman dan manipulasi bakteria genus Mycobacterium memerlukan kakitangan yang berkelayakan, yang menyedari langkah -langkah biosekuriti yang mesti dipenuhi untuk mengelakkan tercemar atau mencemarkan orang lain.

HCL tidak boleh digunakan dalam laluan peneutralan kerana pembentukan natrium klorida, yang boleh menjadi toksik kepada Koch Bacillus.

Sampel mesti disimpan disejukkan dan dilindungi dari cahaya selagi mereka tidak diproses.

Rujukan

1. Makmal Francisco Soria Melguizo. 2009. Löwenstein-Jensen Medium Selective. Terdapat di: F-Soria.adalah
2. Laboratorium Britania. 2017. Löwenstein-Jensen Medium. Terdapat di: Britanialab.com.
3. Makmal Neogen. Löwenstein-Jensen Medium. Terdapat di: FoodSafety.Neogen.com.
4. "Tengah Löwenstein-Jensen." Wikipedia, ensiklopedia percuma. 20 Nov 2018, 15:15 UTC. 24 Apr 2019, 18:34. Wikipedia.org
5. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologi. Edisi ke -5. Pan -American Editorial S.Ke. Argentina.
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Pan -American Editorial S.Ke. Argentina.
7. Mac Faddin J. (2003). Ujian biokimia untuk mengenal pasti bakteria kepentingan klinikal. Edisi ke -3. Pan -American Editorial. Buenos Aires. Argentina.