Separuh daripada saya, asas, penyediaan, kegunaan

Dia Separuh saya Ini adalah ujian biokimia yang digunakan untuk membantu pengenalpastian spesies bakteria milik keluarga Enterobacteriace. Ia agak berkhasiat dan terdiri daripada glukosa, ekstrak yis, peptone, tripteine, l -ornitine hydrochloride, bromocresh dan agar ungu.

Makna akronimnya (lombong) menggambarkan setiap parameter yang dapat diperhatikan dalam medium ini; Motilitas, indol dan ornitine. Motilitas adalah keupayaan mikroorganisma untuk bergerak di sekitar kehadiran flagella. Agar harta ini dapat diperhatikan, konsistensi medium mestilah separa -solid, jadi penyediaannya membawa kurang angka agar.

Skim tafsiran hasil dalam lombong sederhana. Sumber: Disediakan oleh pengarang MSC. Marielsa Gil

Pengeluaran Indol membuktikan kehadiran enzim triptofanasa yang bertindak pada asid amino tryptophan, yang diperlukan untuk menggunakan reagen yang mendedahkan untuk menjadikan pengeluaran indole.

Akhirnya, ornithine menentukan sama ada bakteria mampu decarboxillary.

Asas

Peptone, ekstrak ragi dan triptein

Unsur -unsur ini menyumbang kepada kuasa pemakanan medium ini. Mereka berfungsi sebagai sumber nutrien penting dan asid amino untuk pembangunan bakteria.

Di samping itu, triptein adalah sumber tryptophan untuk menunjukkan kehadiran enzim triptofanasa, yang merendahkan tryptophan.

Indol tidak berwarna, oleh itu kehadirannya diturunkan dengan menambahkan lima titik reagen Ehrlich atau Kovacs, kedua-duanya dengan p-dimethylaminobenzaldehyde.

Kumpulan aldehid sebatian ini bertindak balas dengan indol, menghasilkan produk berbentuk merah fuchsia di permukaan agar.

Sebarang lekuk warna harus dianggap sebagai ujian positif. Ujian mesti dibaca dengan segera, sejak masa warna merosot.

Sebaliknya, ujian ini mesti diturunkan setelah mencatat hasil motilitas dan decarboxylation ornithine.

Boleh melayani anda: tulang padat: ciri, struktur, fungsi

Tafsiran

Ujian positif: Pembentukan cincin merah fuchsia ketika menambah penurunan reagen Kovacs.

Ujian negatif: Tidak ada pembentukan cincin.

Motilitas

Keupayaan bakteria bergerak akan menjadi bukti.

Ujian motilitas negatif akan dibuktikan dengan mengamati garis pertumbuhan yang nipis, dan segala -galanya akan menjadi tanpa pertumbuhan.

Penting bahawa motilitas dibaca sebelum mendedahkan.

Dalam bakteria mudah alih tetapi pertumbuhan yang perlahan, sukar untuk menunjukkan motilitasnya dengan medium ini. Dalam kes ini, disarankan untuk menggunakan ujian atau kaedah lain, seperti motilitas sederhana atau kaedah drop yang belum selesai.

Glukosa

Glukosa adalah karbohidrat yang boleh ditapai yang selain menyediakan tenaga mengasingkan medium, keadaan yang diperlukan supaya decarboxylation asid amino ornithine boleh berlaku.

Penapaian glukosa harus selalu berlaku, berdasarkan prinsip bahawa semua bakteria milik keluarga Enterobacteriaceae menanam glukosa.

L -ornitin

Sekiranya bakteria menghasilkan enzim ornitine decarboxylase, ia boleh bertindak sebaik sahaja medium telah diasaskan oleh penapaian glukosa.

Enzim ornithine decarboxylase bertindak pada kumpulan karboksil asid amino yang menghasilkan amina yang dipanggil putresina yang alkheies medium lagi.

Ujian ini harus dibaca selepas 24 jam pengeraman, kerana jika anda cuba membaca sebelum anda boleh salah faham ujian dengan negatif palsu.

Ingat bahawa reaksi pertama yang berlaku adalah penapaian glukosa, jadi medium menjadi kuning dalam fasa awal (10 hingga 12 jam pertama). Sekiranya decarboxylation ornithin berlaku kemudian, medium akan menjadi ungu.

Adalah penting untuk mentafsirkan ujian decarboxylation ornithine sebelum mendedahkan indole, kerana agregat reagen Kovacs mengubah warna medium.

Dapat melayani anda: Kerajaan alam dan ciri -cirinya

Tafsiran

Ujian negatif: medium kuning atau kuning.

Ujian positif: Separuh separuh ungu.

Penunjuk pH

Dalam kes ini, Bromocresol ungu digunakan; orang yang bertanggungjawab mendedahkan apabila terdapat perubahan pH di tengah. Dengan mengidap, penunjuk menjadi kuning, dan ketika alkalinari dia bertukar ungu.

Teknik yang ditanam dan diturunkan

Untuk menanam medium saya, lurus atau jarum digunakan dan sebahagian koloni untuk dikaji dikumpulkan dengannya.

Tusukan yang mendalam dibuat di tengah saya dalam garis lurus. Ia tidak dianjurkan.

Inkubasi selama 24 hingga 48 jam pada suhu 37 ° C dalam aerobiosis. Perhatikan hasil dalam susunan ini: motilitas, decarboxylation ornithine dan akhirnya mendedahkan indole.

Adalah dinasihatkan untuk mengambil 2 ml ke medium, memindahkannya ke tiub steril dan melakukan ujian indole di sana, jadi jika ia memberi negatif, seluruh tiub asal boleh diinkubasi selama 24 jam lagi, untuk mendedahkan indole lagi.

Perkembangan indole dilakukan seperti berikut: 3 hingga 5 titisan reagen Kovacs ditambah di persekitaran saya dan menggerakkan dengan kuat. Diperhatikan sama ada cincin merah fuchsia muncul atau tidak.

Penyediaan

Separuh saya

Timbang 31 gr dari persekitaran saya dan larut dalam satu liter air suling.

Panaskan sehingga campuran mendidih selama satu minit, kerap kali kacau sehingga anda membubarkan agar. Bagikan 4 ml medium dalam tiub ujian 13/100 dengan penutup kapas.

Sterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit. Keluarkan dari autoklaf dan biarkan terus kejutan, sehingga taco separa -kolid terbentuk.

Simpan dalam peti sejuk 2-8 ° C. Biarkan marah sebelum menyemai ketegangan bakteria.

Warna medium dehidrasi adalah kuning air dan medium disediakan ungu sedikit opalescent.

Ia boleh melayani anda: evolusi yang berbeza: penyebab dan contoh

PH terakhir medium yang disediakan ialah 6.5 ± 0.2

Medium menjadi kuning dengan pH asid dan ungu ke pH alkali.

Kovacs Reaktif (Pemaju Ujian INDOL)

Reagen ini disediakan seperti berikut:

150 ml amil, isoamil atau butil alkohol diukur (mana -mana tiga). 10 gr p-dimethylaminobenzaldehyde dibubarkan di dalamnya. Selanjutnya, 50 ml asid hidroklorik pekat perlahan -lahan ditambah.

Reagen yang disediakan tidak berwarna atau berwarna kuning. Ia mesti disimpan dalam botol amber dan dipelihara di peti sejuk. Warna coklat gelap menunjukkan kemerosotannya.

Juga reagen Kovacs boleh digantikan oleh reagen ehrlich. Yang terakhir, kerana ia lebih sensitif, lebih disukai untuk mendedahkan indol dalam bakteria yang menghasilkannya dalam jumlah yang minimum, seperti dalam beberapa bacilli negatif yang tidak berpakaian dan anaerob tertentu.

Gunakan

Medium ini adalah ujian yang melengkapkan bateri ujian biokimia untuk mengenal pasti bakteria milik keluarga Enterobacteriace.

Data decarboxylation ornithin berfungsi untuk membezakan Shigella Sonnei, yang memberi positif, Shigella Boydii, Shigella Flexneri dan S. Dysenterieae, Mereka memberi negatif.

Ia juga membezakan genus Klebsiella, yang memberikan negatif, genus Enterobacter, di mana kebanyakan spesiesnya memberi positif.

Sumber: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologi. Edisi ke -5. Pan -American Editorial S.Ke. Argentina.

QA

Setiap kali separuh saya disediakan, ujian kawalan dapat dilakukan. Untuk ini, strain yang diketahui atau disahkan digunakan untuk memerhatikan tingkah laku medium.

Strain yang boleh digunakan adalah Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, enterobacter aerogenes dan Proteus mirabilis.

Keputusan yang diharapkan adalah Dan. coli dan m. Morganii. Dan M: +, i: + dan o: +.

Klebsiella pneumoniae Beri segalanya negatif (m:-, i:-, o :-). Proteus mirabilis dan Enterobacter aerogenes Dan M:+ i:- dan o: +.

Rujukan

1. Mac Faddin J. (2003). Ujian biokimia untuk mengenal pasti bakteria kepentingan klinikal. Edisi ke -3. Pan -American Editorial. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Pan -American Editorial S.Ke. Argentina.