Ujian Voges-Proskauer Apa itu, Yayasan, Penyediaan, Kegunaan

Dia Ujian Voges-Proskauer Ini adalah ujian biokimia yang digunakan untuk membantu mengenal pasti bakteria milik keluarga Enterobacteriaceae. Terutamanya berguna untuk membezakan strain dari Escherichia coli dari Klebsiella dan Enterobacter, antara yang lain.

Ujian ini dilakukan dalam medium kultur cecair yang dipanggil metil-voges merah proskauer, lebih dikenali dengan akronim RM/VP. Medium ini terdiri daripada polipeptone buffered, glukosa, dipotassium fosfat dan air suling.

Metil merah metilo-voges proskauer (RM/ VP)/ ujian VP positif dan negatif. Sumber: Foto yang diambil oleh pengarang MSC. Marielsa Gil/ Sudipta.Nov15 [CC BY-SA 3.0 (https: // creativeCommons.Org/lesen/by-sa/3.0)], dari Wikimedia Commons

Medium RM/VP semasa adalah pengubahsuaian medium Clark dan Lubs, yang pada mulanya mengandungi kepekatan peptones dan glukosa yang kurang. Oleh itu, terdapat kurang jumlah ion hidrogen, yang diperlukan untuk reaksi positif Voges-Proskauer.

Ujian ini berdasarkan keupayaan mikroorganisma menggunakan glukosa oleh laluan butilén-glycolic, dan membentuk produk akhir neutral yang dipanggil acetoine, dengan kehadiran oksigen dan pH alkali pH.

Dalam medium RM/VP, selain dapat mendedahkan ujian Voges-Proskauer, anda juga boleh mendedahkan ujian merah Metilia.

Asas

Yayasan Ujian Voges-Proskauer

Pluripeptons yang hadir di tengah memberikan keperluan pemakanan yang sangat diperlukan untuk pertumbuhan bakteria. Bagi bahagiannya, glukosa adalah sebatian utama. Ramai bakteria mempunyai keupayaan untuk memetabolisme glukosa dan membentuk asid pyruvic.

Asid pyruvic adalah titik tengah dalam metabolisme glukosa dan dari sana setiap mikroorganisma boleh mengambil laluan yang berbeza. Ada yang akan membentuk asid campuran, seperti asid laktik, asid asetik, asid formik dan asid succinic, dan yang lain akan membentuk produk neutral seperti 2.3-butnediol.

Ia boleh melayani anda: Flora dan Fauna dari Mexico City

Ujian Voges-Proskauer mendedahkan kapasiti mikroorganisma membentuk asetil metil karbinol (acetoine), produk perantara 2.3-butnediol dalam keadaan aerobiosis.

Acetoine dikurangkan dan bentuk 2,3-butnediol, tetapi tindak balas ini boleh diterbalikkan, oleh itu jika 2,3-butnediol dioksidakan. Oleh itu, oksigen sangat diperlukan.

Dipotassium fosfat adalah penampan yang kusyen campuran ke pH 6.9 ± 0.2.

Asas untuk pembangunan bukti dan tafsiran

Untuk menunjukkan reaksi, wahyu mesti dijalankan menggunakan dua reagen (reagen Barrit), yang dikenali sebagai Voges A dan Voges B.

Voges A adalah penyelesaian α-naftol 5%, dan Voges B adalah penyediaan kalium hidroksida 40%. Sekiranya kalium hidroksida tidak tersedia, ia boleh diganti dengan 40% natrium hidroksida.

Α-naftol adalah pemangkin yang akan meningkatkan keamatan warna reaksi, yang menjadikan ujian yang paling sensitif. Α-naftol mesti selalu ditambah terlebih dahulu, menggerakkan tiub supaya medium memasuki hubungan dengan oksigen. Dengan cara ini, acetoine sekarang dioksidakan kepada diacetyl, dan 2.3-butnediol dioksidakan untuk membentuk acetoine, lulus ke diacetyl.

Ini adalah bagaimana α-naftol akan menyertai diacetyl, yang seterusnya telah menyertai nukleus guanidine yang terdapat dalam asid amino arginin, yang terakhir dari multipartones.

Bagi bahagiannya, kalium atau natrium hidroksida bertanggungjawab untuk menyerap CO₂ Dan bertindak balas dengan peptones. Reaksi ini berasal dari pembentukan warna merah jambu-salmon, jelas kelihatan selepas menggerakkan tiub dengan baik.

Boleh melayani anda: Tahap organisasi tisu: Ciri dan contoh

Agar pewarnaan berlaku dengan serta-merta, jumlah yang betul dari diacetyl, peptone dan α-naftol mesti bercampur. Sekiranya ini tidak berlaku, tiub dibenarkan berehat selama 15 minit sebelum mentafsir.

Ujiannya biasanya positif selepas 2 hingga 5 minit, apabila anda dapat melihat warna merah jambu yang lemah. Sekiranya dibiarkan berehat selama 30 minit pada 1 jam intensiti warna akan maksimum (merah yang sengit).

Ujian negatif akan dibuktikan apabila sup kuning. Selepas 1 jam, jika ujian negatif, produk warna coppery reaksi kalium hidroksida pada α-naftol boleh dibentuk.

Penyediaan

RM/VP Tengah

Timbang 17 gr budaya dehidrasi dan larut dalam satu liter air suling. Biarkan selama 5 minit. Panaskan sehingga mendidih untuk membubarkan sepenuhnya. Hidangkan 3 hingga 4 ml dalam tiub dan mensterilkan autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit.

Medium budaya dehidrasi adalah kuning air dan medium yang disediakan adalah ambar cahaya.

PH akhir medium ialah 6.9 ± 0.2.

Voges reagen a

Timbang 5 gr α-naftol dan larut dalam 50 ml etil alkohol (mutlak). Selanjutnya, menambah etil alkohol walaupun enrasar pada 100 ml.

Voges Reagent b

Timbang 40 gr kalium hidroksida dan larut dalam 50 ml air suling dalam bikar. Kaca mesti diletakkan di dalam mandi air sejuk untuk mengawal suhu, kerana pada masa melarutkan penyediaan, ia naik suhu dengan tajam.

Selepas penyelesaiannya sejuk, ia dipindahkan ke bola cincang dan siram pada 100 ml dengan air suling.

Ia dapat melayani anda: agar darah

Prosedur ujian Voges-Proskauer

Untuk melaksanakan ujian Voges-Proskauer, sup RM/VP disuntik dengan mikroorganisma yang sedang dikaji, dari tanaman tulen dari 18 hingga 24 jam.

Inokulum tidak seharusnya sangat padat. 35-37 ° C adalah incuba selama 24 hingga 48 jam, walaupun pengeraman selama beberapa hari kadang-kadang diperlukan. Cowan dan Steel percaya bahawa 5 hari adalah masa inkubasi minimum yang diperlukan untuk mengesan semua spesies positif Voges-Proskauer (VP).

Ujian diturunkan

Pisahkan aliquot 1 ml dalam tiub dan buat pembangunan seperti berikut: Tempat 12 tetes (0.6 ml) voges A dan 4 tetes (0.2 ml) voges B. Campurkan ke udara dan biarkan 5 - 10 minit sebelum mentafsir. Walau bagaimanapun, jika ujian masih negatif, biarkan berdiri dan perhatikan tiub selepas 30 minit hingga 1 jam.

Penampilan warna merah merah jambu menunjukkan bahawa tindak balas voges-proskauer adalah positif. Sekiranya medium kekal kuning tindak balas negatif.

Penambahan pendedahan dalam perintah dan kuantiti yang ditunjukkan adalah penting untuk mengelakkan negatif palsu.

Gunakan

Ujian Voges-Proskauer berguna untuk membezakan antara strain dari Dan. coli yang negatif VP, genre Klebsiella, Enterobacter, Serratia, antara lain, yang positif VP.

Sumber: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologi. Edisi ke -5. Pan -American Editorial S.Ke. Argentina.

QA

Untuk menguji kualiti medium yang disediakan, anda boleh menggunakan kawalan kawalan, termasuk Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium dan Pembetung Enterobacter ATCC 13047.

Keputusan yang diharapkan adalah tindak balas voges-proskauer positif hanya untuk K. pneumoniae dan Dan. Cloacae. Selebihnya memberi reaksi negatif.

Rujukan

1. Laboratorium Britania. Purata MR-VP. Terdapat di: www.Britanialab.com