Biologi

Pewarnaan Kinyoun

Pewarnaan Kinyoun
Cryptosporidium parvum dicelup dengan pewarnaan Kinyoun. Sumber: Punlop AnusonPornperm, Wiikimedia Commons

Apa pewarnaan Kinyoun?

The Pewarnaan Kinyoun Ia adalah teknik pewarna yang digunakan untuk pewarna bakteria dan parasit tahan alkohol asid. Dia dilahirkan dari pengubahsuaian pewarnaan Ziehl-Neelsen. Kedua -dua teknik ini ditafsirkan dengan cara yang sama, tetapi mereka berbeza dalam dua elemen: dalam penyediaan reagen utama dan di mana teknik Kinyoun tidak menggunakan haba.

Atas sebab ini ia juga dikenali sebagai Ziehl-Neelsen dalam Modified Cold, atau Pewarnaan Sejuk Kinyoun. Ditunjukkan untuk warna Mycobacterium tuberculosis, Leprae Mycobacterium, Mycobacteria atipikal, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, cryptosporidium meleagridis, cryptosporidium felis, cryptosporidium muris dan Cyclosporras cayetanensis.

Perlu diperhatikan bahawa Nocardias Mereka dicelup dengan lemah dengan teknik ini kerana mereka adalah alkohol yang berasid sebahagian, jadi untuk genre ini terdapat pengubahsuaian metodologi.

Sebaliknya, teknik Kinyoun telah digabungkan dengan teknik trichromic yang diubahsuai oleh Didier untuk mengesan coccidios (Cryptosporidium parvum dan Isospora Belli) dan spora microsporidary (Enterocytozoon Bieneusi dan Enchelitozoon Intestinalis).

Asas

Reagen utama pewarnaan adalah carbolfucsin atau fenicada fuchsin, yang mempunyai milik menyertai asid karbolik yang ada di dalam dinding sel kesatria, kaya dengan lipid (asid mycolic) mycobacteria dan parasit tertentu.

Kesatuan ini tidak diatasi oleh decolorant asid, oleh itu, mikroorganisma ditakrifkan sebagai asid alkohol tahan.

Tidak seperti teknik ziehl-neelsen-yang membetulkan pewarna melalui haba-, dalam teknik Kinyoun langkah ini tidak diperlukan, kerana penyelesaian Fenicada Fuchsin yang disediakan mengandungi kepekatan fenol yang tinggi.

Ia boleh melayani anda: salmonella-shigella agar

Fenol membubarkan bahan lipid dinding sel, yang membolehkan kemasukan pewarna carbolfucsin. Selepas pewarna menembusi, ia tetap walaupun dibasuh dengan asid alkohol.

Dengan cara ini, mikroorganisma asid alkohol tahan mengambil warna merah ciri, sementara semua yang tidak berasid alkohol dicelupkan dan dicelupkan biru.

Teknik

Bahan

  • Fuchsin phoenicated yang diubahsuai.
  • Alkohol-asid.
  • Metilena biru.

Persediaan fuchsina phoenicated kinyoun

  • Asas fuchsina: 4 gr.
  • Phenol: 8 ml.
  • Alkohol (95%): 20 ml.
  • Air suling: 100 ml.

Fuchsin asas dalam alkohol harus perlahan -lahan dibubarkan, sentiasa mencampurkan. Seterusnya, fenol yang terhablur dalam bilik mandi di 56 ° C. Setelah dibubarkan, 8 ml ditambah kepada penyelesaian fuchsin yang disediakan sebelum ini.

Penyediaan asid alkohol

  • Asid hidroklorik pekat: 3 ml.
  • Ethanol (95%): 97 ml.

Anda mesti mengukur, bergabung dan campurkan.

Penyediaan pewarna kontras metilena biru

  • Metilena biru: 0.3 g.
  • Air suling: 100 ml.

Berat dan larut.

Teknik pewarnaan Kinyoun

  • Sediakan smear secara langsung dari sampel, yang boleh menjadi bujang, cecair pulmonari, sedimen air kencing, cecair cerebrospinal atau najis, antara lain, atau dari penggantungan mikroorganisma yang diperoleh dari koloni tulen yang dibangunkan dalam media media.
  • Betulkan smear dengan panas.
  • Letakkan smear di jambatan pewarna dan tutup dengan reagen Fenicada Fuchsin dari Kinyoun disediakan. Biarkan berdiri selama 3 atau 5 minit.
  • Basuh dengan air suling.
  • Hiaskan dengan alkohol asid selama 3 minit dan basuh lagi dengan air suling.
  • Hiaskan lagi dengan alkohol asid selama 1 atau 2 minit sehingga lebih banyak pewarna.
  • Basuh dengan air suling dan biarkan longkang, letakkan slaid dalam kedudukan menegak.
  • Tutup persediaan dengan metilena biru dan tinggalkan selama 4 minit.
  • Basuh dengan air suling dan biarkan udara kering.
  • Periksa 40x dan kemudian 100x.
Boleh melayani anda: mikroskop medan yang jelas: ciri, bahagian, fungsi

Sekiranya anda ingin memperbaiki dan mempercepatkan pewarnaan mikroorganisma asid alkohol yang tahan, 1 setitik agen pelembab ditambah (seperti katak No. 7) hingga 30 atau 40 ml fuchsin fenicate Kinyoun.

Beberapa makmal mengubah pewarna kontras metilena biru kerana asid hijau atau picric cerah. Yang pertama memberikan warna hijau ke latar belakang dan yang kedua menghasilkan warna kuning.

Teknik Kinyoun khas untuk Nocardias

Untuk meningkatkan pewarnaan bakteria jantina Nocardia Pengubahsuaian pewarnaan Kinyoun digunakan. Tekniknya adalah seperti berikut:

  • Tutup smear dengan fenicada fuchsina kinyoun selama 3 minit.
  • Basuh dengan air suling.
  • Menghidupkan secara ringkas dengan alkohol 3% yang disediakan sehingga lebih banyak pewarna.
  • Basuh lagi dengan air suling.
  • Tutup persediaan dengan metilena biru dan cuti aksi selama 30 saat.
  • Basuh dengan air suling dan biarkan udara kering.

Teknik gabungan fuchsina phoenication dan trichromic diubahsuai oleh Didier

Teknik ini disyorkan untuk analisis sampel najis untuk mencari coccidios dan spora Microsporidium sp pada masa yang sama. Prosedur yang perlu diikuti adalah seperti berikut:

  • Tutup smear dengan fenicada fuchsina kinyoun selama 10 minit.
  • Keluarkan pewarna dan basuh dengan air suling.
  • Hiaskan selama 30 saat dengan alkohol asid hidroklorik.
  • Basuh lagi dengan air suling.
  • Tutup smear dengan penyelesaian trichromic selama 30 minit pada suhu 37 ° C.
  • Basuh dengan air suling.
  • Hiaskan selama 10 saat dengan alkohol asid asetik.
  • Basuh bau selama 30 saat menggunakan etanol 95%.

QA

Sebagai kawalan positif, smear disediakan dengan strain Mycobacterium tuberculosis Dan mereka dicelup dengan reagen yang bersedia untuk mengesahkan bahawa bakteria mengambil warna yang betul (merah-fucsia).

Ia dapat melayani anda: gametoogenesis

Kawalan negatif juga boleh digunakan dengan menyediakan smear dengan sebarang ketegangan yang bukan asid alkohol yang tahan, dengan itu memeriksa bahawa keseluruhan sampel mengambil warna kontras.

Teknik Kinyoun berbanding dengan teknik Ziehl-Neelsen

Teknik Kinyoun lebih mudah kerana dia menghilangkan laluan pemanasan, tetapi kelebihan utamanya ialah mengelakkan pelepasan wap, sangat toksik dan menyebabkan kanser panjang. Oleh itu, pewarnaan Kinyoun lebih selamat bagi kakitangan yang bertanggungjawab melakukan pewarnaan.

Penting untuk mengambil kira bahawa anda harus berhati -hati bahawa reagen tidak bersentuhan langsung dengan kulit, kerana ia menghakis dan pembalasan mudah terbakar.

Bagi kelemahan, smear negatif tidak semestinya menunjukkan bahawa mikroorganisma tidak hadir. Di samping itu, kehadiran detritus selular boleh menyebabkan positif palsu, yang menghasilkan kekeliruan dalam diagnosis.

Rujukan

  1. Kimia klinikal yang digunakan. BK KINYOUN KIT. Cromakit pulih.adalah.
  2. Orozco-rico, m. Pewarnaan kinyoun dan dua coccidios dalam HIV. MADICE MEDICAL MD. 
  3. Forbes, b., Sahm, d., Weissfeld, a. Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. Pan -American Editorial S.Ke.