May Grünwald-Giemsa Stain

Sampel leukemia myeloid kronik, dengan pewarnaan Mei Grünwald-Giemsa. Sumber: Paulo Henrique Orlandi Mourao, CC By-SA 3.0, Wikimedia Commons

Apa yang mungkin Grünwald-Giemsa pewarnaan?

The May Grünwald-Giemsa Stain, O Pappenheim, adalah teknik pewarna yang berbeza yang menggabungkan reagen Giemsa dan mungkin Grünwald. Ia digunakan untuk pembezaan sel darah normal dan tidak normal dalam smear darah periferal dan sumsum tulang, serta untuk pewarnaan potongan histologi dan sampel sitologi.

Kedua -dua reagen -Giemsa dan May Grünwald- berasal dari pewarnaan Romanowsky, teknik berdasarkan gabungan asid dan pewarna asas.

Giemsa meningkatkan teknik dengan menstabilkan campuran eosin, metilena biru dan derivatifnya, dengan gliserol. Sebaliknya, May Grünwald menggunakan eosin dan metilena biru, menggunakan metanol sebagai pelarut. Gabungan strategik ini telah memberikan hasil yang sangat baik.

Walaupun dari segi pemerhatian morfologi sel bertindak serupa dengan pewarnaan Giemsa dan Wright, teknik ini meningkatkan penapisan di atas pewarna parasit yang menyebabkan malaria, kejahatan chagas, leishmaniasis dan trichomoniasis.

Di samping itu, ia telah menunjukkan sangat berguna untuk kajian sitologi cecair spermatik. Bukan sahaja ia diserlahkan dengan menunjukkan ciri -ciri morfologi sperma, tetapi juga membolehkan leukosit, sel epitelium dan sel spermatogenesis menjadi sangat dibezakan.

Asas

Teknik ini mengikuti asas pewarnaan Romanowsky, di mana pewarna berasid mempunyai pertalian selektif untuk komponen sel asas dan komponen berasid menarik pewarna asas.

Dengan kata lain, kedua -dua struktur sel dan pewarna mempunyai beban elektrik positif atau negatif, beban yang sama ditolak dan beban yang berbeza menarik.

Sebagai contoh, pewarna asas, seperti metilena biru, dimuatkan secara positif dan tertarik dengan struktur yang dimuatkan negatif. Itulah sebabnya pewarna ini pewarna nukleus yang kaya dengan DNA dan RNA yang telah memuatkan kumpulan fosfat negatif.

Granul basofilik yang dibahagikan dan sitoplasma sel darah putih mononuklear yang mengandungi ARN juga bernoda.

Ia boleh melayani anda: Flora dan Fauna Jalisco: Spesies Perwakilan

Juga, pewarna berasid mempunyai beban negatif, jadi ia mengikat kepada struktur yang dimuatkan secara positif seperti erythrocytes dan granul dari eosinophils yang tersegmentasi. Bagi granul neutrofil yang dibahagikan, kedua -dua pewarna ditetapkan.

Pelbagai pewarna

Dalam teknik ini gabungan tindak balas antara pewarna ortochromatic dan metacromatic yang wujud bersama. Ortochromatic (eosin dan metilena biru) ditetapkan kepada struktur sel yang mana ia berkaitan dan memberikan warna yang stabil yang tidak berbeza.

Sebaliknya, metacromatic (yang berasal dari metilena biru, azure dan azure b), warna asalnya berbeza -beza apabila bersatu dengan struktur tertentu, mungkin ada pelbagai nuansa.

Akhirnya, langkah yang mengambil penyelesaian Grünwald Mei memerlukan kehadiran air, kerana tanpa pewarna ini akan menembusi struktur, tetapi tidak akan diperbaiki. Berlaku, pewarna mesti menjadi kutub atau pengion, dan dengan itu dapat mendakan dan melihat struktur yang berkaitan.

Teknik

Bahan

• Lembaran slaid.
• Jambatan pewarna.
• Penyelesaian Grünwald.
• Pewarnaan Giemsa.
• Air suling.

Pekat mungkin pewarna grünwald

0.25 gr methylene eosin-blue (pewarna mengikut Mei Grünwald) dan larut dalam 100 ml metanol harus ditimbang. Maka penyediaan dicampur selama 1 jam dan biarkan selama 24 jam. Selepas masa, ia ditapis.

Untuk menggunakan teknik ini, pewarna Grünwald boleh dicairkan seperti berikut: Untuk 200 ml pewarna cair, 30 ml larutan pekat diukur, 20 ml larutan penampan dan 150 ml air sulingan diselaraskan ke pH 7.2-7.3. Seterusnya, ia bercampur dan ditapis.

Pewarna giemsa pekat

0.5 gr azur-eosin puncak metilena (pewarna mengikut Giemsa), larut dalam 50 ml metanol dan tambah 50 ml gliserin.

Untuk melaksanakan teknik, 1:10 dicairkan dengan penyelesaian penampan dan biarkan selama 10 minit. Ia boleh ditapis jika perlu.

Boleh melayani anda: Mesénquima

Penyediaan penyelesaian penampan pada pH 7.2

Mereka harus ditimbang:

• 40 mg di-hydrogen kalium fosfat (KH2PO4).
• 151 mg hidrogen di-simotik fosfat 12-hidrat (Na2HPO4).

Kedua -dua sebatian dibubarkan dalam 100 ml air.

Prosedur Tincion Sanguine atau Bone Medol Srols

Terdapat dua modaliti: klasik dan cepat.

Modaliti klasik

• Tutup bau selama 2 atau 3 minit dengan penyelesaian Grünwald May.
• Basuh dengan air sulingan buffered untuk mengeluarkan penyelesaian sebelumnya.
• Tutup dengan penyelesaian basuh buffered yang sama dan tinggalkan selama 1 minit. Ideanya ialah pewarna anterior ditetapkan pada struktur dan, pada masa yang sama, sel -sel terhidrasi.
• Tambah 12 cair giemsa tincture jatuh pada air buffered dan tamparan untuk mencampur dan homogenisasi. Biarkan selama 15 atau 20 minit.
• Basuh smear dengan air suling buffered dan letakkannya kering di udara.
• Fokus dan perhatikan dalam mikroskop optik sel darah pencelupan menggunakan sasaran 40x. Sekiranya perlu, 100x boleh digunakan.

Mod pesat

• Tutup smear dengan pewarna grünwald Mei dicairkan selama 1 minit.
• Basuh dengan air suling buffered.
• Tutup dengan air buffer dan biarkan selama 1 minit.
• Letakkan pewarna Giemsa yang dicairkan dan biarkan selama 5 minit.
• Basuh dengan air suling buffered dan biarkan udara kering.

Teknik -teknik yang diterangkan di sini adalah panduan panduan, tetapi perlu diambil kira bahawa prosedur dan masa pewarna berbeza -beza mengikut rumah komersial yang menjual reagen. Adalah dinasihatkan untuk mengikuti langkah -langkah yang ditunjukkan oleh setiap rumah komersial.

Teknik pewarna cecair sperma yang dilanjutkan

• Tutup lanjutan dengan lapisan halus penyelesaian Grünwald Mei selama 4 minit.
• Keluarkan pewarna dan basuh dengan air suling.
• Letakkan lapisan Giessa yang dicairkan (1:10) dalam air suling selama 15 minit.
• Keluarkan pewarna dan basuh dengan air suling.
• Biarkan kering dan perhatikan dalam mikroskop.

Boleh melayani anda: penapaian butyric

Spesifikasi penting

Teknik menyatakan bahawa reagen dan penyelesaian mencuci mempunyai pH diselaraskan hingga 7.2-7.3, supaya pertalian pewarna oleh struktur sel tidak diputarbelitkan dan warna akhir yang diharapkan tidak berbeza.

Aplikasi

• Teknik ini digunakan oleh makmal klinikal untuk menggosok darah periferal dan sumsum tulang, luka tisu dan sitologi.
• Dalam bidang hematologi, teknik ini sangat penting dalam kajian keabnormalan sel dari segi bentuk, saiz dan nombor. Ini adalah alat yang sangat berharga untuk diagnosis penyakit tertentu, seperti leukemia dan anemia.
• Ia membentangkan utiliti yang luar biasa apabila dicari parasit dalam bidang hematologi (Plasmodium sp dan Cruzi Tripaosoma) atau histologi (Leishmanias sp).
• Bagi sitologi vagina, teknik ini sangat berfaedah untuk pemerhatian Trichomonas vaginalis. Ini adalah penemuan penting, kerana kehadirannya mensimulasikan lukisan karsinoma In situ yang kemudian hilang apabila parasit dihapuskan.
• Ia merupakan alat yang ideal untuk mengkaji sampel sperma, kerana ia memberikan maklumat yang berharga mengenai kualiti sperma. Data yang ditawarkannya perlu dilakukan terutamanya dengan bilangan dan morfologi, serta dengan sel -sel bersamaan yang mungkin hadir dan yang sangat penting, seperti sel kuman, leukosit dan sel epitelium. Dengan analisis ini adalah mungkin untuk menggambarkan keabnormalan yang diperhatikan dalam sperma di kepala, leher, sekeping tengah dan bahagian utama. Di samping itu, mereka juga boleh membantu menunjukkan kes -kes hosospermia (kehadiran sel darah merah) dan leukospermia atau piospermia (peningkatan bilangan leukosit dalam air mani).

Rujukan

1. Makmal Merck KGaa. Semoga metilena mikroskopi biru grünwald eosina.
2. Pewarnaan May-Grünwald-Giemsa. Pulih dari ES.Wikipedia.org.
3. Makmal Panreac Bahan Kaca Kaca. Reagen untuk teknik histologi, hematologi dan mikrobiologi. Dipulihkan dari Glasschemicals.com.