Pewarnaan Wright

Pelbagai smess darah periferal yang dicelup dengan pewarnaan wright. Ke. Leukemia akut b. Plasmodium vivax dalam erythrocyte. C. Plasmodium falciparum, macrogametocito. D. Limfosit

Apa pewarnaan Wright?

The Pewarnaan Wright Ini adalah teknik pewarnaan yang dicipta oleh ahli patologi Amerika James Homer Wright pada tahun 1902, berdasarkan pewarnaan Romanowsky, untuk membezakan pelbagai jenis sel darah yang berbeza. 

Pewarnaan ini polikromatik, yang bermaksud ia menghasilkan beberapa warna bergantung pada struktur yang menyerap pewarna. Teknik pewarnaan ini telah digunakan secara meluas untuk melakukan sel darah putih yang berbeza dan mengkaji morfologi sel darah merah, platelet dan leukosit dalam darah periferal dan sumsum tulang.

Aplikasinya sangat penting, kerana keabnormalan dapat dilihat dalam sel -sel sel yang berlainan darah, memudahkan diagnosis penyakit seperti leukemia atau jangkitan bakteria atau parasit.

Mungkin ini adalah aplikasi yang paling biasa di mana teknik ini digunakan, bagaimanapun, mereka bukan satu -satunya. Ia juga berguna dalam sampel lain selain darah dan sumsum tulang, seperti sampel rembesan hidung, lendir fecal, dahak, kulit, antara lain.

Asas pewarnaan Wright

Pewarnaan Wright dilahirkan dari noda Romanowsky.

Campuran pewarna yang digunakan dalam pewarnaan Wright menyebabkan kesan yang dikenali sebagai Romanowsky, iaitu, ia memberikan warna ungu yang indah kepada nukleus leukosit dan granul neutrofilik, sementara sel darah merah dicelup merah jambu.

Komponen yang bertanggungjawab untuk memberikan pelbagai warna tipikal dari pewarnaan Wright adalah biru b dan eosina dan. Kesan yang diperhatikan bergantung kepada pautan pewarna ke struktur kimia dan interaksi biru b dan eosin dan.

Struktur asid, seperti asid nukleik, protein nuklear dan sitoplasma reaktif yang tidak matang dari beberapa jenis sel, tetapkan biru B (pewarna asas).

Walaupun struktur asas, seperti hemoglobin, granul eosinofil yang dibahagikan, antara struktur sel lain, tetapkan eosin dan (pewarna asid).

Hasil pewarnaan boleh dipengaruhi oleh faktor yang berbeza, seperti pH pewarna wright, penyelesaian redaman dan basuh, serta pewarnaan dan masa penetapan.

Oleh itu, setiap langkah dalam penyediaan reagen adalah penting dan mesti dilakukan menjaga setiap butiran.

Bahan

Wright Dye. Untuk 100 ml diperlukan:

Timbang 0.3 gr pewarna wright, mengukur 97 ml metanol dan 3 ml gliserol.

Penyediaan

Di tempat mortar, jumlah pewarna Wright yang berat dan secara beransur -ansur menggabungkan gliserol sehingga habuk dibubarkan sepenuhnya.

Seterusnya, metanol ditambah, bercampur dan dicurahkan ke dalam botol amber.

Sebelum menggunakan, penyelesaian dengan pergerakan lembut dan penapis mesti diaduk.

Boleh melayani anda: Pemilihan arah: Apakah, definisi, contoh

Penyelesaian Buffered Buffer

Dalam satu liter air suling, 3.76 g disodium hidrofosfat ditambah (na₂HPO₄   2h₂0) ditambah 2.1 gr fosfat kalium dihydrogen (KH₂PO₄).

Campurkan dengan baik sehingga anda membubarkan semua reagen yang diperbadankan. Laraskan pH hingga 7.2.  Tuangkan ke dalam balang kaca dan simpan pada suhu bilik.

Bahan tambahan diperlukan untuk melakukan pewarnaan

Di samping itu, bahan -bahan lain diperlukan untuk menjalankan teknik pewarna, ini adalah: objek porta atau meliputi objek, jambatan pewarna, pita dengan air atau penampan untuk mencuci, jam randik untuk mengambil masa warna dan beberapa bahan pengeringan (kertas penyerap, kain kasa atau kapas ).

Komponen pewarnaan Wright

Methanol

Alkohol (Methanol) berfungsi sebagai pembekal smear darah ke slaid.

Pada dasarnya ia adalah pengurangan reaktif, dehidrator dan pembekal koagulan. Oleh itu, fungsi mereka adalah untuk membeku protein dan menjadikannya tidak larut, tetapi tanpa mendapat denatured.

Methanol adalah reagen yang paling banyak digunakan untuk memperbaiki smear di semua makmal, kerana ia memberikan hasil yang lebih baik daripada yang diperolehi dengan etanol. Kepekatan ideal adalah 99%.

Penyerap kejutan

Penyerap kejutan (penyelesaian buffered), mempunyai fungsi menyesuaikan atau mengekalkan.

Laluan penetapan dengan sel dehidrat metanol dan penyerap kejutan membantu menghidupkan semula mereka.

Eosina (y)

Eosina mempunyai pertalian untuk komponen asas kerana ia adalah pewarna berasid. Dua jenis eosin diketahui sangat mirip antara satu sama lain, sehingga dapat digunakan, memperoleh hasil yang sama.

Satu dipanggil eosin dan, eosin kuning atau tetrabromofluorescein, dan yang lain, eosin B, bluish e eritrosine atau dibromodyitrofluorescein. Walau bagaimanapun, eosin dan yang paling kerap digunakan.

Harta paling penting dalam pewarna ini adalah polaritas negatifnya, ini menjadikannya tertarik dengan struktur selular dengan beban positif.

Metilena biru

Adalah pewarna asas. Harta utamanya adalah metacromia, iaitu, tidak semua struktur akan dicelup dengan warna yang sama, ia bergantung kepada komposisi kimia struktur yang mewarna.

Ada yang akan menjadi cahaya atau biru gelap, dan yang lain berwarna ungu gelap atau pucat.

Teknik

1. Buat sampel yang dilanjutkan supaya terdapat filem nipis, sama ada pada slaid atau penutup.
2. Biarkan udara kering selama lebih kurang 2 jam.
3. Letakkan bau kering di jambatan pewarna atau pewarnaan baldi dengan sampel lanjutan.
4. Tutup lembaran dengan kejatuhan wright oleh gota untuk menutup seluruh permukaan. Tinggalkan Akta selama 5-8 minit.
5. Pewarna mesti menutupi sepenuhnya slaid, tanpa menumpahkan melalui tepi. Sekiranya semasa waktu pewarna ia mula menguap, titisan tambahan mesti diletakkan.
6. Selanjutnya menambah jumlah penyerap kejutan yang sama, meniup sedikit sehingga kecerahan logam ciri muncul. Jinak 10 hingga 15 minit.
7. Basuh dengan air paip, letakkan jet lembut sehingga lembaran kelihatan merah jambu.
8. Dengan kasa yang diresapi dengan alkohol menghapuskan pewarna pewarna di belakang slaid.
9. Biarkan smear kering sebelum meletakkan minyak rendaman untuk menggambarkannya dalam mikroskop.

Boleh melayani anda: tahap taksonomi

Penggunaan/Aplikasi Pewarnaan Wright

Hematologi

Ia sesuai untuk pewarnaan gosok darah periferal.

Oleh kerana sifat kimia gabungan pewarna ini, struktur sel dapat diiktiraf dengan mudah, dapat membezakan pelbagai jenis sel yang ada.

Hidung berair

Teknik ini sangat berguna untuk mengenal pasti sel rembesan hidung (sel epitelium, eosinofil yang dibahagikan, polimorfonuklear) dalam diagnosis rhinitis alahan.

Parasitologi

Dalam pengertian ini, ia berguna untuk kajian Leishmania sp Dalam histiocytes tisu sel subkutaneus dalam ulser kulit. Ia juga digunakan untuk mengenal pasti leukosit dalam sampel najis (fecal leukogram).

Dalam kes ini, ia menarik minat doktor untuk mengetahui sama ada leukositosis yang terdapat dalam najis adalah oleh polimorfonuklear atau mononuklear. Penemuan ini dalam leukogram fecal akan membimbing sama ada ia adalah jangkitan bakteria atau virus.

Sebaliknya, parasit yang beredar dalam darah boleh berada di dalam erythrocyte atau bebas dalam plasma. Parasit yang dicari adalah Plasmodium spp, Trypanosoma cruzii dan filarias, dan dalam veterinar berguna dalam pencarian THEILERY EQU dan Babesia Caballi, Ejen bayi kausal, terutama dalam kuda.

Pewarnaan Wright, dan juga Giemsa, membolehkan membezakan hemoparasit dari komponen sel biasa. Untuk ini, dua jenis yang dilanjutkan boleh digunakan:

Baik dilanjutkan

Darah dilanjutkan sebagai filem nipis pada slaid. Pewarnaan Wright, mendedahkan ciri -ciri nukleus dan sitoplasma.

Penurunan tebal

Metodologi ini digunakan untuk menyiasat kehadiran parasit dalam jumlah darah yang lebih besar.

Untuk ini, setitik besar darah diletakkan di atas slaid. Sekali di sana anda mesti defibrine, membuat bulatan yang lebih besar dan lebih besar dari pusat keluar, menggunakan pinggir slaid lain.

Akhirnya, untuk memerhatikan parasit dalam bau tebal, erythrocytes mesti disenaraikan dengan air.

Jangkitan pernafasan

Di peringkat pernafasan, teknik ini juga berguna, kerana sel -sel yang terdapat dalam sampel dahak, pencucian bronkial atau bronchalveolar adalah penting untuk menubuhkan diagnosis.

Di sini anda boleh membezakan sel polimorfonuklear dan sel mononuklear.

Bacteriology

Penggunaan teknik ini dalam bakteria adalah terhad, kerana tidak baik untuk bakteria pewarna. Oleh itu, untuk pewarnaan mereka, teknik pewarnaan khusus lain digunakan.

Walau bagaimanapun, ia telah digunakan untuk mencari sel epitelium dengan badan inklusi Chlamydia trachomatis Dalam smear urethral atau mukosa endokervis, walaupun harus diakui bahawa itu bukan kaedah terbaik.

Ia dapat melayani anda: hemocianin

Ia juga mungkin untuk diperhatikan, di antara sel darah merah, bakteria lingkaran, seperti Borrelia Burgdorferi Pada pesakit yang dijangkiti, serta morula atau badan kemasukan Ehrlichia sp Dalam sitoplasma limfosit, monosit atau neutrofil dalam smear darah.

Mycology

Dia Histoplasma capsulatum Ia adalah kulat patogen yang sering didiagnosis oleh pemerhatian mikroskopik pelbagai sampel tisu, pencelupan dengan pewarnaan Wright.

Bagaimana struktur sampel darah diperhatikan dengan pewarnaan Wright?

Cadangan untuk Tincion Sanguineous Srols untuk Membaca Hemogram. Sumber: Retamales E, Mazo V. Institut Kesihatan Awam, Kerajaan Chile

Cadangan untuk pewarnaan yang baik

- Sambungan sampel darah mesti kering secara spontan. Smear sepatutnya nipis mungkin untuk mendapatkan penetapan pewarna yang lebih baik dan elakkan tumpang tindih.

- Untuk pencelupan berkualiti tinggi, disarankan. Sebaliknya, sampel yang ideal adalah darah kapilari, tanpa antikoagulan.

- Walau bagaimanapun, jika darah vena digunakan, ia harus digunakan sebagai antikoagulan EDTA dan bukan -heparin, kerana yang terakhir dapat mengubah bentuk struktur selular.

- Untuk mengelakkan kemerosotan pewarna yang disediakan, ia mesti disimpan di tempat kering.

- Semasa proses mencuci penggunaan air yang diselaraskan ke pH neutral adalah disyorkan.

- Adalah dinasihatkan untuk menguji kaedah pencelupan yang digunakan di makmal dari semasa ke semasa.

Ini dilakukan sampel pewarnaan atau corak lanjutan, sebagai kawalan kualiti. Langkah ini penting, kerana ia memastikan bahawa pewarnaan disediakan dengan betul dan masa pewarnaan diseragamkan dengan baik.

Sekiranya lembaran corak berwarna teruk, maka ada masalah yang mesti diselesaikan.

Kesalahan biasa dalam warna Wright

Pewarnaan yang sangat pucat

Smear yang sangat pucat biasanya disebabkan oleh masa yang sangat singkat untuk mencuci atau mencuci yang sangat dibesar -besarkan. Ia diperbetulkan dengan memanjangkan masa hubungan dengan pewarna atau mengurangkan masa mencuci.

Loceng pewarna

Kehadiran pewarna precipitates dalam bau boleh mempunyai beberapa sebab. Yang paling kerap adalah: penggunaan pewarna yang tidak dibakar, pewarna pada jambatan pewarnaan yang tidak sekata, memakai lembaran kotor dengan habuk atau lemak, tidak membuat pencucian yang baik apabila pewarnaan selesai.

Menggosok dengan pewarnaan yang sangat kemerahan atau biru

Penyerap kejutan bertanggungjawab untuk pH pewarna. Warna dengan pH di bawah yang ditunjukkan (asid) akan menghasilkan bau yang sangat kemerahan.

Sekiranya pH pewarna di atas (alkali) akan mendapat smear yang sangat kebiruan.

Mod penyimpanan

Reagen mesti disimpan pada suhu bilik.

Rujukan

1. López-jácome, l., Hernández-durán, m., Colín-Castro, c., Ortega-peña, s., Cerón-González, g., Franco-Cendejas, f. (2014). Pewarnaan Asas di Makmal Mikrobiologi. Penyelidikan kecacatan.
2. Calderón, a., Cardona, J., Vergara, atau. (2013). Frekuensi babesia spp. Dalam kuda Montería, Córdoba (Colombia). REV. Udcaactual Disculg. saintis. 
3. Retamales, e., Mazo, v. Institut Kesihatan Awam Chile. Cadangan untuk Tincion Sanguineous Srols untuk Membaca Hemogram.