Pewarnaan negatif

Imej pewarnaan negatif virus selesema a. Sumber: Lihat halaman untuk Pengarang, Wikimedia Commons

Apa pewarnaan negatif?

The pewarnaan negatif Ini adalah kaedah pewarnaan khas untuk menyerlahkan kehadiran kapsul dalam beberapa mikroorganisma -mainnya Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae dan Cryptococcus neoformans-, dari sampel klinikal atau tanaman tulen.

Sampel langsung yang digunakan secara langsung untuk memohon pewarnaan negatif adalah cecair cerebrospinal. Teknik ini merupakan alternatif yang cepat untuk diagnosis meningitis, terutamanya oleh Cryptococcus neoformans.

Pewarnaan ini boleh digunakan untuk dahak steril dan cecair secara umum, serta pada strain yang diperolehi dari tanaman tulen muda. Teknik ini menggunakan dakwat nigrosin atau Cina untuk pelaksanaannya, oleh itu, ia adalah metodologi yang sangat mudah dan ekonomik untuk memohon yang memberikan maklumat tentang nilai diagnostik yang hebat dalam masa yang singkat.

Dalam pengertian ini, mana -mana makmal adalah keupayaan untuk melaksanakan pewarnaan ini. Sudah tentu, makmal mesti mempunyai kakitangan yang kompeten, yang mampu mengenali ragi Cryptococcus neoformans terisolasi atau di permata dan membezakannya dari leukosit dan artifak yang mungkin ada.

Asas

Nigrosine dan dakwat Cina bertindak sama, jadi sama ada bahan boleh digunakan secara tidak langsung.

Teknik ini dipanggil pewarnaan negatif kerana ia bertindak bertentangan dengan teknik pewarnaan yang lain. Dalam hal ini, apa yang tanpa pencelupan adalah struktur yang sedang dicari atau yang ingin anda lihat, iaitu, mikroorganisma.

Oleh itu, pewarnaan didasarkan pada pencelupan bahagian bawah smear dengan warna gelap. Dalam senario ini, struktur yang dilapisi akan menyerlahkan cahaya atau tidak berwarna.

Biasanya, ragi diperhatikan, dikelilingi oleh halo yang jelas yang sesuai dengan kapsul. Ini berlaku kerana dakwat dan nigrosin Cina adalah bahan yang tidak dapat menembusi polysaccharide yang membentuk kapsul mikroorganisma hidup.

Boleh melayani anda: penapaian butyric

Harus diingat bahawa struktur lain yang mungkin ada dalam sampel langsung, seperti leukosit atau sel darah merah sama ada.

Sekarang, jika mikroorganisma mati, tincture dapat menembusi mereka, sehingga pewarnaan ini juga berguna untuk menilai daya maju mikroorganisma.

Teknik

Bahan

Nigrosine

Nigrosine berhutang namanya kepada warna hitam yang ada. Ia adalah bahan sintetik yang diperolehi daripada pemanasan campuran sebatian organik -seperti nitrobenzeine, aniline dan aniline hydrochlorite -, menggunakan dalam reaksi itu pemangkin (besi atau tembaga).

Dakwat Cina

Dakwat Cina adalah bahan yang digunakan terutamanya oleh orang Asia untuk menulis, penjelasan karya seni dan lukisan monokromatik. Ia sangat popular dalam budaya Cina.

Ia diperoleh dari dakwat cumi -cumi yang dicampur dengan arang batu, produk pembakaran pokok resin kecil.

Ia juga mungkin untuk menyediakannya dari jelaga pembakaran hidrokarbon (minyak sayuran), bersama -sama dengan jeli protein yang memberikan konsistensi yang sesuai untuk mengelakkan pemendakan zarah arang batu.

Spesifikasi untuk persampelan

• Ia tidak memerlukan puasa.
• Sampel sampel, dahak atau cecair steril mesti mengandungi sekurang -kurangnya 1 ml jumlah dan mesti dipindahkan ke makmal pada suhu bilik.
• Sampel CSF dan cecair steril harus diambil oleh doktor khusus.
• Ia juga boleh menjadi tanaman tulen dari ketegangan yang mencurigakan yang dikaitkan dengan patogen yang disebutkan di atas.

Pelaksanaan teknik dengan sampel langsung

• Sampel mesti disentrifugasi, maka supernatan dibuang dan sedimen diambil.
• Setitik bahan sentrifuged (sedimen) dan setitik dakwat Cina atau nigrosin diletakkan.
• Ia mesti dicampur dengan baik dan tutup dengan penutup penutup, membiarkan penurunan itu meluas seperti filem yang baik tanpa melebihi tepi.
• Selanjutnya, penyediaan mikroskop dipasang.
• Sekiranya penyediaannya sangat gelap, ia boleh dicairkan dengan air.

Boleh melayani anda: chemotropism

Pelaksanaan teknik dengan strain dari penanaman

• Sebahagian kecil tanaman muda diambil dengan jarum yang ditaburkan dan larut dalam setitik dakwat Cina yang sebelum ini diletakkan pada slaid bersih.
• Penutup diletakkan di atas.
• Ia diperhatikan dalam mikroskop 10x dan kemudian pada 40x.

Anda juga boleh membubarkan sebahagian koloni dalam air suling, dan dari sana mengambil drop dan campurkan dengan dakwat Cina. Dengan cara ini, penyediaan tidak akan begitu tebal, memungkinkan pemerhatian struktur secara berasingan. Sekiranya terdapat aglomerasi, ia tidak akan diperhatikan dengan baik.

Metodologi lain adalah seperti berikut:

• Letakkan penurunan penggantungan pada satu hujung slaid.
• Letakkan setitik nigrosin di hujung yang sama dan campurkan.
• Dengan bantuan slaid lain, lanjutkan sampel seolah -olah ia membuat smear hematologi.
• Biarkan kering dan perhatikan dalam mikroskop.

Pemerhatian mikroskop

Pertama, ia mesti difokuskan dengan sasaran 10x untuk mempunyai visi luas bidang. Seterusnya, anda mesti mencari jika terdapat ruang yang jelas. Sekiranya ada, fokus dengan 40x untuk melihat perinciannya.

Kelebihan

• Mudah dilaksanakan.
• Ia adalah teknik ekonomi.
• Kaedah ini tidak memerlukan smear ditetapkan untuk memanaskan atau dengan bahan kimia, oleh itu, mikroorganisma diperhatikan tanpa gangguan.
• Penyediaan lukisan fresco tidak perlu kering, jadi dapat diperhatikan dengan segera, menghasilkan hasil dengan cepat.

Kelemahan

• Setelah dipasang, persiapan segar mesti diperhatikan dengan segera. Sekiranya mereka dibenarkan kering, tidak lagi mungkin untuk memerhatikannya dan yang baru.

Boleh melayani anda: Diri -fertilisasi

Tinning tisu dengan dakwat Cina

Fungsi lain yang dapat memenuhi dakwat Cina berada di makmal patologi. Ini digunakan dalam sampel pembedahan yang diekstrak dengan tujuan menandakan margin reseksi tumor.

Tisu yang ditandakan disembur dengan asid asetik. Ini bertindak sebagai mordant dan menghalang dakwat daripada keluar ketika tisu tertakluk kepada pemprosesan rutin untuk penyediaan biopsi.

Prosedur ini terdiri daripada mandi kain dalam alkohol dan xilena, dan kemudian embedd dalam lilin parafin. Penandaan ini membimbing ahli patologi ketika memerhatikan tisu, menunjukkan di mana margin pembedahan pembedahan atau titik minat yang lain adalah.

Rujukan

1. Nigrosine. Pulih dari ES.Wikipedia.org.
2. Forbes, b., Sahm, d., Weissfeld, a. Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. Pan -American Editorial S.Ke.