Agar Count Standard Foundation, Penyediaan dan Kegunaan

Dia Agar Standard Ia adalah medium kultur yang kukuh, bukan selektif, yang direka untuk kuantifikasi beban mikroba aerobik yang terdapat di perairan pengguna, air kumbahan, minuman tenusu, antara makanan lain. Medium ini juga dikenali sebagai PCA Agar) kerana akronimnya dalam kiraan plat Bahasa Inggeris Agar. Ia dicipta pada tahun 1953 oleh Buchbinder, Baris dan Goldstein.

Medium akaun standard terdiri daripada ekstrak yis, tripteine, glukosa, agar dan air suling. Perumusan ini mengandungi unsur -unsur asas pemakanan yang membolehkan perkembangan beban mikroba aerobik sekarang.

Pelarut perpuluhan untuk kiraan standard menghitung UFC. Sumber: Quentin Geissmann [CC BY-SA 3.0 (https: // creativeCommons.Org/lesen/by-sa/3.0)]

Oleh kerana medium tidak mengandungi inhibitor, bakteria boleh berkembang tanpa sebarang sekatan, jadi sesuai untuk jajahan umum mengira. Walau bagaimanapun, teknik kuantiti plak tidak akan mengesan semua bakteria yang ada, tetapi hanya mereka yang mampu berkembang di bawah keadaan alam sekitar yang mana agar tertakluk.

Dalam pengertian ini, teknik kuantifikasi plak biasanya ditentukan oleh jumlah bakteria jenis mesophile aerobik, iaitu, yang dibangunkan dalam suhu antara 25 dan 40 ° C, dengan suhu pertumbuhan yang optimum pada suhu 37 ° C.

Kumpulan bakteria ini sangat penting, kerana terdapat bakteria patogen untuk lelaki.

Harus diingat bahawa kadang -kadang minat mengukur jumlah bakteria psikik yang terdapat dalam makanan. Bakteria ini adalah yang berkembang pada suhu rendah (< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.

Begitu juga, bakteria thermophilic, yang berkembang dalam jarak antara 50 ° C pada 80 ° C atau lebih, boleh menjadi penting dalam jenis makanan tertentu seperti tin.

Kuantifikasi mikrob dinyatakan dalam unit pembentukan kolon (UFC) per gram atau sampel mililiter.

[TOC]

Asas

Akaun standard direka untuk membolehkan perkembangan yang memuaskan bakteria aerobik yang tidak menonjol, kerana ekstrak yis, tripteine ​​dan glukosa memberikan nutrien yang diperlukan untuk pembangunan mikrob yang baik.

Ia boleh melayani anda: Alizarina: Ciri -ciri, Penyediaan, Kegunaan dan Ketoksikan

Sebaliknya, medium mempunyai warna cahaya dan penampilan telus, jadi sangat sesuai untuk visualisasi koloni yang dibangunkan oleh kaedah yang ditanam di dalam (tumpahan plat).

Ia juga kemungkinan koloni yang dikira oleh kaedah yang ditanam permukaan dengan spatula drigalski.

Apabila beban mikrob adalah tinggi, pelarut perpuluhan sampel di bawah kajian mesti dibuat untuk dapat melaksanakan kiraan UFC.

Harus diingat bahawa medium ini disyorkan oleh Persatuan Kesihatan Awam Amerika (APHA) untuk kiraan Messophils aerobik.

Penyediaan

Timbang 23.5 gr medium dehidrasi dan larut dalam satu liter air suling. Untuk membubarkan sepenuhnya campuran harus dipanaskan dengan melambai dengan kerap sehingga ia mendidih. Langkah -langkah berikut bergantung pada teknik yang ditanam yang akan digunakan.

Untuk teknik pembuangan plat

Mengedarkan dengan memberikan 12 hingga 15 ml dalam tiub ujian. Seterusnya, Sterilily dalam Autoclave pada 121 ° C selama 15 minit. Biarkan menguatkan secara menegak dalam bentuk taco. Simpan sehingga digunakan.

Cairkan taco apabila ia akan digunakan. Sebaik sahaja anda dapat menyimpannya di Maria hingga 44-47 ° C sementara sampel disediakan.

Untuk permukaan yang disemai

Sterilkan medium dalam autoklaf pada 121 ° C dan kemudian mengedarkan 20 ml dalam plat steril petri. Biarkan menguatkan, melabur dan simpan di dalam peti sejuk sehingga digunakan.

Marah plat sebelum menggunakan. PH sederhana mestilah 7.0 ± 0.2.

Gunakan

Akaun standard digunakan dalam teknik pengiraan mesophilic aerobik semasa analisis mikrobiologi air dan makanan. Akaun mesophilos aerobik diperlukan, kerana ia menentukan kualiti kesihatan sampel yang sedang dikaji.

Penggunaan teknik ini (menggunakan medium ini) membolehkan visualisasi makroskopik koloni terpencil untuk kuantifikasi.

Teknik Pelepasan Plat (disemai dengan kedalaman)

-Prosedur

Teknik ini terdiri daripada yang berikut:

1) homogene sampel untuk mengagihkan semula bakteria yang ada.

2) Penggantungan awal dilakukan dalam botol atau beg steril, menghormati nisbah 10 gr atau 10 ml dalam 90 ml pencair (10^-1).

Ia dapat melayani anda: fikologi

3) Dari penggantungan awal, pencairan perpuluhan yang berkaitan dibuat bergantung kepada jenis sampel. Cth: (10^-2, 10^-3, 10^-4). Pencahatan dilakukan dengan penyelesaian penampan air peptonada atau fosfat.

Untuk ini^-2 dan sebagainya.

4) 1 ml setiap pencairan diambil dan diletakkan di atas plat petrie steril kosong.

5) Tambahkan ke setiap plat 12 hingga 15 ml agar sebelum ini cair dan berehat pada suhu 44 - 47 ° C.

6) Berikan pergerakan putar lembut ke plat untuk mengedarkan sampel di sebelah agar secara merata dan biarkan menguatkan.

7) Melabur plat dan inkubasi pada suhu 37 ° C dalam aerobiosis selama 24 hingga 48 jam.

8) memuncak masa untuk memeriksa plat dan mengira koloni dalam pencairan yang membolehkannya. Plat yang mempunyai antara 30 hingga 300 UFC dipilih untuk akaun.

Kiraan boleh dibuat manual atau boleh menggunakan pasukan akauntan koloni.

Nilai -nilai yang dibenarkan oleh ML sampel boleh berbeza dari satu negara ke negara yang lain mengikut peraturan yang dikawalnya.

-Pengiraan UFC

Pengiraan umum dilakukan menggunakan formula berikut:

Formula untuk pengiraan umum kuantifikasi UFC. Sumber: Pentadbiran Dadah Kebangsaan dan Teknologi Perubatan (ANMAT). Analisis mikrobiologi makanan, metodologi analisis rasmi, penunjuk mikroorganisma. 2014 Jilid 3. Terdapat di: Anmat.Gov.ar

Menyatakan hasil dalam 1 atau 2 digit, mendarab dengan asas yang sesuai 10. Contoh: Sekiranya hasilnya adalah 16.545 dibulatkan berdasarkan digit ketiga pada 17.000 dan akan dinyatakan seperti berikut: 1.7 x 10⁴. Sekarang, jika hasilnya adalah 16.436 dibundarkan hingga 16.000 dan menyatakan 1.6 x 10⁴.

Teknik yang disemai permukaan

-Prosedur

-Inokulasi dengan 0.1 ml sampel langsung jika cecair, penggantungan awal 10^-1 atau pencairan berturut -turut 10^-2, 10^-3 dll, di tengah plat akaun standard.

Boleh melayani anda: Flora dan fauna tamaulipas: spesies yang lebih mewakili

-Mengedarkan sampel dengan drigalski spatula atau rod kaca dalam bentuk l. Biarkan selama 10 minit.

-Melabur plat dan inkubasi dalam aerobiosis pada suhu 37 ° C selama 24 hingga 48 jam.

-Teruskan untuk mengira koloni, pilih plat yang berada dalam jarak antara 20 - 250 UFC.

-Pengiraan UFC

Untuk pengiraan faktor pencairan digunakan, yang merupakan songsang. Jumlah kepada 2 digit penting dibulatkan (bulat mengikut digit ketiga) dan dinyatakan dalam Base Power 10. Sebagai contoh, jika 224 UFC dikira dalam sampel tanpa pencairan (10^-1), 22 x 10 dilaporkan¹  UFC, tetapi jika angka itu 225 dilaporkan 23 x 10¹ UFC.

Sekarang, jika 199 UFC dikira dalam pencairan 10^-3, 20 x 10 akan dilaporkan⁴ UFC, tetapi jika 153 UFC dikira dalam pencairan yang sama akan dilaporkan 15 x 10⁴ UFC.

QA

Medium akaun standard boleh dinilai menggunakan strain yang diketahui yang disahkan, seperti: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Shigella Flexneri ATCC 12022.

Sekiranya medium budaya berada dalam keadaan yang optimum, pertumbuhan yang memuaskan dijangka dalam semua kes, kecuali L. Fermentum yang boleh mempunyai prestasi biasa.

Untuk menilai kemandulan medium budaya, satu atau dua plat setiap lot yang disediakan (tanpa inokulasi) pada suhu 37 ° C dalam aerobiosis selama 24 jam mesti diinkubasi. Selepas masa ini, tiada pertumbuhan atau perubahan warna medium harus diperhatikan.

Batasan

-Jangan cairkan agar lebih dari sekali.

-Medium yang disediakan boleh bertahan sehingga 3 bulan selagi ia kekal di dalam peti sejuk dan dilindungi dari cahaya.

-Medium ini tidak sesuai untuk menuntut mikroorganisma, atau anaerob.

Rujukan

1. Pentadbiran Nasional ubat dan teknologi perubatan (ANMAT). Analisis mikrobiologi makanan, metodologi analisis rasmi, penunjuk mikroorganisma. 2014 Jilid 3. Terdapat di: Anmat.Gov.ar
2. Diffco Laboratories Francisco Soria Melguizo, S.Ke. Plate Count Agar. 2009. Terdapat di: http: // f-soria.adalah
3. Makmal Conda Pronadisa. Agar untuk Kaedah Standard (PCA) Menurut APHA dan ISO 4833. Terdapat di: Condalab.com
4. Laboratorium Britania. Kiraan plat agar. 2015. Terdapat di: Britanialab.com
5. Camacho A, Giles M, Ortegon A, Palao M, Serrano B dan Velázquez atau. 2009. Teknik untuk analisis mikrobiologi makanan. Edisi ke -2. Fakulti Kimia, UNAM. Mexico. Terdapat di: DEPA.Fquim.Unam