EMB

E Lungangangular Stain. Coli di Emb agar. Sumber: Eunice Laurent, CC By-SA 4.0, Wikimedia Commons

Apa itu embungan agar?

Dia EMB Ia adalah medium kultur pepejal selektif dan berbeza yang digunakan untuk pengasingan bacilli gram -negatif, terutamanya keluarga Enterobacteriacee, dan bacilli gram -negatif yang lain. Ia juga dikenali dengan akronim Eam, yang bermaksud Eosina-Azul Methylene.

Medium ini dicipta oleh Holt-Harris dan Teague pada tahun 1916. Ia mengandungi peptone, laktosa, sukrosa, dipotassium fosfat, agar, eosin, metilena biru dan air. Ia sangat serupa dengan agar MacConkey, terutamanya jika EMB Agar oleh Levine digunakan, yang tidak mengandungi sukrosa.

Malah, setiap makmal memutuskan sama ada ia berfungsi dengan satu atau yang lain, kerana mereka memenuhi fungsi yang sama, walaupun biokimia mereka berbeza.

Ia juga memberikan kesulitan yang sama seperti MacConkey Agar klasik dalam pengeluaran Swarming untuk jantina Proteus. Oleh itu, untuk mengelakkan fenomena ini, kepekatan agar dapat ditingkatkan sehingga 5%.

Asas

Selektif

EMP agar secara halus selektif kerana ia mengandungi pewarna anilinik (eosin dan metilena biru), yang bertindak sebagai inhibitor, mencegah pertumbuhan bakteria gram yang paling banyak dan beberapa menuntut menuntut bacilli.

Walau bagaimanapun, agar ini mempunyai kesulitan bahawa beberapa bakteria gram -positif dapat menahan kehadiran bahan penghalang dan tumbuh sebagai tanda tidak berwarna kecil, seperti Enterococcus faecalis dan beberapa Staphylococcus.

Ragi tertentu juga boleh tumbuh, seperti Kompleks Candida Albicans, yang akan memberikan koloni merah jambu yang sangat kecil. Clamidospores juga boleh berkembang dari yis ini jika sampel disemai dengan kedalaman.

Perbezaan

Sebaliknya, EMB agar juga merupakan medium pembezaan, kerana pewarna ini bersama -sama (eosin dan metilena biru) mempunyai harta untuk membentuk endapan dalam pH asid, oleh itu, mereka berfungsi sebagai penunjuk pengeluaran yang sama.

Boleh melayani anda: allometry

Oleh itu, bakteria penapaian atau sukrosa yang lemah menghasilkan warna ungu dalam 24 hingga 48 jam. Sebagai contoh, genre Klebsiella, Enterobacter dan Serratia.

Bakteria yang sangat laktosa, seperti Escherichia coli, atau sukrosa, suka Enterocolithic yersinia Sama ada Proteus penneri, Mereka membentuk endapan hitam kehijauan, memberikan penampilan kecerahan logam, ciri -ciri dalam spesies ini.

Harus diingat bahawa jika medium levine Emb digunakan (tanpa sukrosa), Enterocolithic yersinia dan Proteus penneri Mereka akan menghasilkan koloni telus.

Bakteria yang tidak menanam laktosa atau sukrosa dipelihara oleh kehadiran peptonas, yang memberikan asid amino dan nitrogen yang diperlukan untuk pembangunan bakteria, dan menghasilkan koloni telus. Sebagai contoh, genre Salmonella dan Shigella, dalam kalangan yang lain.

Ia juga penting untuk menekankan bahawa jantina Acinetobacter Ia boleh membentangkan koloni lavender biru, walaupun ia bukan fermeter laktosa, atau sukrosa, tetapi mereka mempunyai harta untuk menetapkan biru metilena di dinding selnya. Ini juga boleh berlaku dengan bakteria oksidatif lain.

Penyediaan

Medium dehidrasi asal adalah kuning air. Untuk menyediakan medium budaya ini, 36 gram medium dehidrasi mesti ditimbang dan digantung dalam pembaikan yang mengandungi satu liter air suling.

Setelah meninggalkan campuran 5 minit berehat, ambil fixola ke sumber haba, bercampur dengan cara yang kuat dan tetap sehingga ia mendidih dan larut sepenuhnya.

Selanjutnya, medium kultur yang sudah dibubarkan mesti disterilkan menggunakan autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit.

Masa selesai, ia dikeluarkan dari autoklaf dan biarkan berdiri sebentar. Kemudian ia masih panas (45-50 ° C) antara 15 hingga 20 ml agar pada setiap plat steril petri. Medium mesti litmus biru.

Boleh melayani anda: amilase: ciri, klasifikasi, struktur, fungsi

Selepas disajikan, plat dibiarkan sedikit ditemui sehingga agar sejuk sedikit. Kemudian mereka dilindungi dan dibenarkan menguatkan sepenuhnya. Selanjutnya, mereka diperintahkan di platelet terbalik dan disimpan di dalam peti sejuk (8 ° C) sehingga digunakan.

Prosedur ini lebih baik dilakukan dalam loceng aliran laminar atau di hadapan Bunsen lebih ringan untuk mengelakkan pencemaran.

Adalah penting untuk diingat bahawa setiap rumah komersial akan menunjukkan jumlah yang mesti ditimbang untuk menyediakan medium budaya.

PH akhir medium mestilah 7.2 ± 0.2

Aplikasi

• Medium ini digunakan untuk menyemai air kencing dan najis atau apa -apa jenis sampel klinikal, terutamanya jika kehadiran bacilli negatif gram -negatif yang tidak disyaki, seperti bacilli milik keluarga Enterobacteriaceae, yang tumbuh dengan baik dalam medium ini.
• Bakteria enteropatogenik genre Shigella dan Salmonella Mereka dibezakan oleh koloni tidak berwarna atau sedikit amber.
• Bacilli yang tidak bertenaga lain tumbuh, seperti Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, dalam kalangan yang lain.
• Juga, medium ini sangat berguna dalam analisis mikrobiologi makanan dan air, kerana ia sesuai untuk fasa pengesahan lengkap penentuan koliform, iaitu, untuk menyokong kehadiran Dan. coli Dari sup EC yang keruh, dari teknik nombor yang paling mungkin (NMP).

QA

Untuk mengesahkan bahawa medium budaya yang baru disediakan berfungsi dengan baik, kawalan dapat disemai untuk memerhatikan ciri -ciri koloni dan mengesahkan bahawa mereka memberi seperti yang diharapkan.

Untuk melakukan ini, anda boleh menggunakan strain ATCC atau strain yang dikenal pasti dengan baik Dan. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella Flexneri, Pseudomonas aeruginosa dan beberapa bakteria gram -positif, seperti S. Aureus.

Diharapkan itu Dan. coli menjana koloni hitam kebiruan yang maju dengan bersinar logam hijau. Manakala Enterobacter aerogenes dan Klebsiella sp Mereka mesti memberikan koloni mukus yang baik.

Ia boleh melayani anda: lajur winograsky

Untuk bahagiannya, Salmonella Typhimurium dan Shigella Flexneri Mereka mesti mengembangkan koloni besar dan tidak berwarna atau dengan warna ambar ringan.

Akhirnya, genre Pseudomonas aeruginosa Ia tumbuh sebagai koloni tidak berwarna dengan saiz yang tidak teratur, sementara bakteria gram -positif harus dihalang sepenuhnya atau membesar dengan koloni yang sangat kecil.

Pertimbangan Akhir

Kadang -kadang, pensterilan menyebabkan metilena biru mengurangkan, memerhatikan medium oren. Agar metilena biru ke oksida dan pulih warna ungu, ia mesti dicampur dengan lembut sehingga warna pulih.

Juga, setelah disterilkan pewarna dapat mendakan, jadi ia mesti dicampur dengan baik sebelum menghidangkan plat petri.

Rujukan

1. Eosina dan metilena biru agar. Pulih dari Calab.com.
2. Levine e.M.B. (Dengan eosina dan metilena biru). Pulih dari Britanialab.com.