Simmons Citrate Agar

Pseudomonas Fluorescens di Simmons Citrate Agar. Sumber: A Doubt, CC By-SA 3.0, Wikimedia Commons

Apa itu Simmons Citrate Apar?

Dia Simmons Citrate Agar Ia adalah medium pepejal yang digunakan sebagai ujian biokimia pengenalpastian mikroorganisma, terutama bacilli gram -negatif. Medium asal dicipta oleh Koser pada tahun 1923.

Medium sitrat Koser terdiri daripada sup yang mengandungi natrium fosfat, ammonium fosfat, fosfat monopotonik, magnesium sulfat dan natrium sitrat.

Seperti yang dapat dilihat, satu -satunya sumber karbon dalam medium adalah sitrat, dan nitrogen adalah ammonium fosfat, menghilangkan protein dan karbohidrat sebagai sumber unsur -unsur ini, biasanya terdapat di media lain.

Oleh itu, bakteria yang disuntik dalam medium itu hanya dapat menghasilkan semula jika ia dapat mengambil karbon sitrat. Ujiannya positif jika terdapat kekeruhan di tengah. Walau bagaimanapun, saya mengalami kesulitan yang boleh berlaku.

Masalah ini diselesaikan oleh simmons dengan menambahkan bromotimol agar ke formula asal Koser. Walaupun prinsipnya sama, ia ditafsirkan secara berbeza.

Asas

Sesetengah bakteria mempunyai keupayaan untuk bertahan dengan ketiadaan penapaian atau pengeluaran asid laktik, yang perlu mencapai tenaga melalui penggunaan substrat lain. Dalam ujian ini satu -satunya sumber karbon yang ditawarkan adalah sitrat.

Bakteria yang mampu bertahan di bawah syarat -syarat ini memetabolisme sitrat dengan cepat dengan laluan alternatif kepada yang tradisional, menggunakan kitaran asid tricarboxylic, atau kitaran penapaian sitrat.

Katabolisme sitrat oleh bakteria termasuk mekanisme enzimatik tanpa campur tangan koenzim ke. Enzim ini dikenali dengan nama Citrica (Citrate Oxalacetate-Liasa) atau Demolase Citrate. Reaksi memerlukan kehadiran kation bivalen, yang dalam hal itu dibekalkan oleh magnesium.

Boleh melayani anda: Jenis pernafasan dan ciri -ciri mereka

Reaksi menghasilkan oxaloacetate dan piruvat, yang kemudiannya menimbulkan asid organik di tengah -tengah pH alkali yang dibentuk oleh penggunaan sumber nitrogen. Asid organik ini digunakan sebagai sumber karbon yang menjana karbonat dan bikarbonat, selanjutnya alkali medium.

Mod yang disemai

Simmons sitrate medium mesti sedikit disuntik dalam ekor ikan menggunakan lurus atau jarum, dan diinkubasi selama 24 jam hingga 35-37 ° C. Memuncak masa hasilnya diperhatikan.

Yang ditaburkan hanya dilakukan di permukaan agar, tanpa tusukan.

Tafsiran

Jika medium adalah warna asal (hijau) dan tidak ada pertumbuhan yang dapat dilihat, ujiannya negatif, tetapi jika medium berubah biru, menunjukkan kehadiran produk alkali, yang dikesan oleh penunjuk pH. Dalam kes ini, ujiannya positif.

Ini berlaku kerana jika bakteria menggunakan karbon sitrat, ia juga dapat mengambil nitrogen dari fosfat ammonium yang mana ia melepaskan ammonia, alkali medium.

Sebaliknya, jika pertumbuhan bakteria diperhatikan di tengah, tetapi tidak ada perubahan warna, ujian juga harus dianggap positif, karena jika ada pertumbuhan, itu bermakna bakteria dapat menggunakan sitrat sebagai sumber karbon, walaupun tidak ada perubahan pH pada masa itu (kadang -kadang dapat diambil).

Sekiranya ada keraguan dalam tafsiran warna akhir, ia dapat dibandingkan dengan tiub sitrat yang tidak disusun.

Penyediaan

Timbang 24.2 gr medium dehidrasi untuk satu liter air. Campurkan dan tinggalkan kira -kira 5 minit. Selesaikan pembubaran pemanasan sederhana selama 1 atau dua minit, melambai dengan kerap.

Boleh melayani anda: Apakah tahap makromolekul?

Hidangkan 4 ml dalam ujian dan tiub autoclavar pada 121 ° C selama 15 minit. Semasa meninggalkan autoklaf, menyengetkan dengan bantuan sokongan, sehingga agar itu dipertahankan dalam bentuk puncak seruling dengan sedikit taco atau latar belakang dan lebih banyak bezel.

PH akhir sitrat sederhana ialah 6.9 (warna hijau). Medium ini sangat sensitif terhadap perubahan pH.

Ph 6 atau ke bawah, medium menjadi warna kuning. Warna ini tidak diperhatikan dalam ujian bakteria.

Dan pada pH 7.6 atau ke atas, perubahan sederhana dalam biru prusia yang sengit.

Gunakan

Simmons Citrate Agar digunakan untuk mengenal pasti mikroorganisma tertentu, terutama bacilli milik keluarga Enterobacteriaceae dan lain -lain Bacilli Glukosa.

Pertimbangan Akhir

Simmons Citrate Medium adalah ujian yang sangat halus, kerana positif palsu dapat diperoleh jika beberapa kesilapan dibuat.

Penjagaan yang mesti diambil adalah seperti berikut:

Inoculo

Inokulum bakteria yang sangat tebal atau dimuatkan tidak boleh dilakukan, kerana ia boleh menyebabkan warna kuning coppery berkembang di tempat yang ditaburkan, tanpa menjejaskan selebihnya medium, tetapi boleh percaya bahawa terdapat pertumbuhan. Itu tidak bermaksud positif bukti. 

Begitu juga, inokulum tebal dapat menghasilkan positif palsu, kerana sebatian organik yang terbentuk di dalam dinding sel bakteria morboundary dapat melepaskan karbon dan nitrogen yang cukup untuk menghidupkan penunjuk pH.

Oleh itu, idealnya adalah untuk menabur menggunakan jarum dan bukannya pemegang platinum, untuk mengelakkan mengambil bahan yang berlebihan.

Boleh melayani anda: rantaian makanan hutan

Disemai

Sebaliknya, apabila bateri ujian biokimia untuk pengenalpastian mikroorganisma yang dipersoalkan adalah menyemai, adalah penting bahawa ujian sitrat adalah yang pertama untuk menghidupkan, untuk mengelakkan seretan protein atau karbohidrat dari medium lain.

Di bawah keadaan ini adalah mungkin untuk mendapatkan positif palsu, kerana mana -mana bahan yang diperkenalkan oleh kesilapan akan dimetabolisme dan akan menyebabkan perubahan pH.

Cara lain untuk mengelakkan penyerapan bahan adalah membakar pemegang dan mengambil inokulum baru antara satu ujian dan yang lain.

Penjagaan juga harus diambil ketika menyentuh tanah jajahan untuk melaksanakan inokulum, karena harus dielakkan untuk menyeret sebahagian dari agar tanaman dari mana bakteria datang, kerana di atas dijelaskan.

Dalam pengertian ini, Matsen, Sherris dan Branson mengesyorkan mencairkan inokulum dalam penyelesaian fisiologi sebelum memancarkan ujian sitrat untuk mengelakkan pemindahan sumber karbon lain.

Intensiti warna

Perlu dipertimbangkan bahawa intensiti warna yang dihasilkan apabila ujian positif boleh berubah mengikut rumah komersial.

Di samping itu, terdapat mikroorganisma yang positif pada 24 jam, tetapi ada strain lain yang memerlukan 48 jam atau lebih untuk menghasilkan perubahan pH.

Rujukan

1. BBL Simmons Citrate Agar Slants. BD pulih.com.
2. Simmons Citrate Agar. Pulih dari Britanialab.com.