Agar Lia (Iron Lysina) Apa, Yayasan, Penyediaan, Kegunaan

Dia Agar Lia (Besi lysina) Ini adalah ujian biokimia yang digunakan untuk mengenal pasti bakteria keluarga Enterobacteriaceae. Medium ini dicipta oleh Edwards dan Fife, berdasarkan Formula Falkow.

Asalnya ujian ini adalah sup yang mengandungi peptones, ekstrak yis, glukosa, lisin, bromokres dan air suling ungu. Edwards dan Fife menambah Agar-Adagar, Ferric Citratus Ammonium dan Natrium Tiosulfate.

Ujian positif dan negatif terhadap decarboxylation lysine. Sumber: Foto dan skim yang dimiliki oleh pengarang MSC. Marielsa Gil

Ujian ini pada dasarnya terdiri daripada menunjukkan kehadiran enzim rudboxylase, yang mampu bertindak balas dengan kumpulan karboksil asid amino Lisin. Pengurangan asid amino juga boleh berlaku kerana kehadiran enzim lysine heartbreak.

Di samping itu, komposisi medium membolehkan untuk menunjukkan keupayaan beberapa genera bakteria untuk menghasilkan hidrogen sulfida. Akhirnya, ia juga mungkin untuk memerhatikan generasi atau bukan gas di tengah.

Asas

Ekstrak peptonas dan ragi

Seperti kebanyakan media tanaman, agar besi lisine mengandungi komponen yang menyediakan sumber nutrien yang diperlukan untuk pertumbuhan bakteria. Komponen ini diwakili oleh ekstrak peptones dan ragi.

Glukosa

Begitu juga, agar ini mengandungi glukosa karbohidrat yang boleh ditapai. Diketahui bahawa semua bakteria keluarga Enterobacteriaceae menanam glukosa.

Langkah ini sangat penting, kerana ia akan bertanggungjawab mengasingkan alam sekitar, keadaan yang sangat diperlukan untuk enzim lysine decarboxylase - jika ada - bertindak pada substratnya.

Dalam beberapa genre bakteria, pengeluaran gas dapat diperhatikan kerana penapaian glukosa.

Gas dibuktikan apabila anjakan AGAR OCC.

Boleh melayani anda: biomaterials

L-lisina

Sebaik sahaja lisin dikurangkan, diamine (cadaverine) dan anhidrida karbonik terbentuk.

Pemusnahan berlaku dengan kehadiran koenzim pyridoxal fosfat. Tindak balas ini tidak dapat dipulihkan.

Penunjuk PH (Bromocresol Ungu)

Semua perubahan pH berlaku di tengah oleh pelbagai tindak balas, dikesan oleh penunjuk pH pH bromocresol.

Dalam pengertian ini, apabila terdapat pengasidan, medium menjadi kuning, dan apabila terdapat alkali, medium kembali ke warna ungu atau ungu asal.

Apabila kesakitan lysine berlaku kerana kehadiran lysine enzim, warna kemerahan terbentuk di permukaan, tipikal di proteus, Providence dan beberapa spesies Morganella.

Ini disebabkan oleh hakikat bahawa semasa proses disaminasi, asid alpha-zo-karbonik terbentuk, yang bertindak balas dengan ammonium sitrat dengan kehadiran oksigen, yang menyebabkan warna yang disebutkan di atas.

Ferric sitrat ammonium dan natrium tiosulfat

Sebaliknya, bakteria yang menghasilkan hidrogen sulfida akan menjadi bukti₂S.

Bakteria yang mempunyai enzim thiosulfate yang dikurangkan mempunyai keupayaan untuk bertindak dengan mengurangkan natrium thiosulfate sekarang, membentuk sulfit dan hidrogen sulfida (H₂S).

Yang terakhir adalah gas tidak berwarna, tetapi apabila bertindak balas dengan bentuk garam besi sulfida logam, yang merupakan sebatian yang tidak larut (mendakan hitam yang kelihatan).

Walau bagaimanapun, kapasiti latihan H₂S dengan medium ini tidak terlalu dipercayai, kerana beberapa bakteria decarboxylase negatif mampu menghasilkan h₂S tidak akan membentuk endapan hitam, kerana keasidan medium mengganggu. Oleh itu adalah disyorkan untuk menyokong dengan cara lain yang mengandungi besi.

Boleh melayani anda: neuron

Tafsiran ujian

Recboxylation lisin

Tiub harus dibaca setelah selesai 24 jam pengeraman, jika tidak ada risiko salah faham reaksi, melaporkan negatif palsu.

Ingat bahawa tindak balas pertama yang akan berlaku akan menjadi penapaian glukosa, oleh itu semua tiub selepas 10 hingga 12 jam akan berubah menjadi kuning.

Sekiranya pada akhir masa inkubasi (24 jam) terdapat latar belakang kuning dengan permukaan ungu atau ungu, tindak balasnya negatif. Warna ungu permukaan sepadan dengan alkali medium dengan menggunakan peptones.

Reaksi positif ialah di mana bahagian bawah dan permukaan tiub benar -benar ungu, iaitu, ia kembali ke warna asal.

Oleh itu, yang menentukan positif ujian adalah asas atau bawah medium. Sekiranya anda mempunyai keraguan tentang warna, ia boleh dibandingkan dengan tiub LIA yang tidak diselaraskan.

Lysine Deamination

Tiub yang menunjukkan patah hati lysine akan mempunyai permukaan kemerahan garnet dan latar belakang kuning (asid), atau keseluruhan tiub kemerahan garnet.

Reaksi ini ditafsirkan sebagai negatif untuk decarboxylation lisin, tetapi positif untuk deaminasi lysina.

Tindak balas ini ditakrifkan dan ditafsirkan dalam serong.

Pengeluaran hidrogen sulfida (h₂S)

Tindak balas positif diperhatikan oleh penampilan mendakan hitam di seluruh tengah atau sebahagian daripadanya. Umumnya di antara liml bezel dan asas.

Sekiranya endapan berlaku di seluruh tiub, ia tidak akan dilihat reaksi lain yang berlaku di tengah.

Pendaftaran Keputusan

Apabila mentafsirkan ujian, hasilnya direkodkan seperti berikut:

Boleh melayani anda: Eksperimen Miller dan Urey

Pertama bezel dibaca, maka latar belakang atau taco, maka pengeluaran h₂S, dan akhirnya pengeluaran gas.

Contoh: k/a + (-). Ini bermaksud:

• K: bezel alkali (warna ungu)
• A: Latar Belakang Asid (Kuning), iaitu, tindak balas decarboxylation negatif dan patah hati negatif.
• +: Pengeluaran sulfida hidrogen
• (-): tanpa gas.

Penyediaan

Timbang 35 gr dari besi berbaring sederhana dehidrasi dan larut dalam satu liter air suling.

Panas sehingga sepenuhnya membubarkan agar, mendidih selama satu minit melambai dengan kerap. Bagikan 4 ml medium dalam tiub ujian 13/100 dengan penutup kapas.

Sterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit. Keluarkan dari autoklaf dan biarkan berdiri cenderung, sehingga ada pangkalan yang mendalam dan serong pendek.

Simpan dalam peti sejuk 2-8 ° C. Biarkan marah sebelum menyemai ketegangan bakteria.

Warna medium dehidrasi adalah kuning air dan medium ungu kemerahan yang disediakan.

PH terakhir medium yang disediakan ialah 6.7 ± 0.2

Medium menjadi kuning dengan pH sama dengan atau kurang daripada 5.2, dan ungu pada pH 6.5 ke atas.

Aplikasi

Ujian ini, bersama -sama dengan ujian biokimia yang lain, digunakan untuk mengenal pasti bacilli keluarga Enterobacteriaceae.

Medium disemai dengan lurus atau jarum, satu atau dua punctures dibuat ke bahagian bawah tiub, dan kemudian permukaan medium di zigzag berdiri.

Incuba selama 24 jam pada 35-37 ° C dalam aerobiosis. Sekiranya perlu, ia ditinggalkan selama 24 jam lagi.

Terutamanya berguna untuk membezakan spesies citrobacter negatif dari Salmonellas sp.

Rujukan

1. Mac Faddin J. (2003). Ujian biokimia untuk mengenal pasti bakteria kepentingan klinikal. Edisi ke -3. Pan -American Editorial. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Pan -American Editorial S.Ke. Argentina.