Agar m.R.Apa, asas, penyediaan, kegunaan

Dia Agar m.R.S. Ia adalah medium kultur pepejal terpilih, digunakan untuk penebat dan pengiraan bakteria asid laktik, terutama genus Lactobacillus. Agar ini dicipta pada tahun 1960 oleh Man, Rogosa dan Sharpe, membawa medium nama yang sama, tetapi disebabkan kerumitannya singkatan M sering digunakan.R.S.

Ia terdiri daripada protein peptone, ekstrak daging, ekstrak yis, glukosa, sorbitan monoleato, dipbotassium fosfat, natrium asetat, ammonium sitrat, magnesium sulfat, sulfat mangan dan agar.

Han dan Sharpe Man Agar (m.R.S.) disemai dengan lactobacillus sp. Sumber: Foto yang disumbangkan untuk artikel ini oleh penulis: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto yang diambil semasa siasatan bertajuk: Penilaian bakteria asid laktik dan bifidobakteria dengan potensi probiotik dalam susu ibu dan najis bayi.

Komposisi ini membolehkan perkembangan bakteria asid laktik yang baik dari sampel klinikal, seperti najis, rembesan vagina, sampel lisan dan susu ibu, serta makanan tenusu dan daging.

Ia tidak digunakan secara rutin di makmal klinikal, kerana bakteria asid laktik jarang terlibat dalam proses patologi. Walau bagaimanapun, di kawasan mikrobiologi makanan, penggunaan agar m lebih kerap.R.S.

Sebaliknya, medium ini digunakan oleh beberapa pusat penyelidikan yang objektifnya adalah kajian bakteria asid laktik.

Asas

Lelaki, Rogosa dan Sharpe mempunyai komposisi yang cukup kompleks. Dengan merobek fungsi yang setiap komponennya dipenuhi, anda boleh menerangkan asasnya.

Protein peptone, ekstrak daging, ekstrak yis dan glukosa, adalah nutrien yang menyediakan sumber karbon, nitrogen, vitamin dan mineral yang diperlukan untuk pertumbuhan bakteria. Di samping itu glukosa adalah sumber tenaga sejagat yang digunakan dalam kebanyakan media penanaman.

Sebaliknya, untuk memihak kepada pertumbuhan bakteria asid laktik, kehadiran cofactors yang sangat diperlukan (kation) diperlukan dalam metabolisme lactobacillus dan bakteria yang berkaitan; Sebatian ini adalah garam natrium, magnesium dan mangan.

Ia boleh melayani anda: opssonisasi: apakah, jenis, fungsi, molekul

Begitu juga, sorbitan atau polysorbate monoleoate 80 adalah sumber penting asid lemak apabila diserap sebagai nutrien.

Di samping itu, tindakan sorbitan monoleoat dan ammonium sitrat yang menghalang perkembangan flora yang disertakan, terutamanya bakteria negatif gram, memberikan sifat selektif agar ini.

Akhir.

Terdapat variasi lain dari Rogosa Sharpe Agar; Salah satu daripada mereka adalah ditambah dengan sistein (m.R.S.c), sangat berguna untuk pengasingan bifidobakteria, antara mikroorganisma lain. Sebaliknya, terdapat Puan ditambah dengan neomycin, paromomycin, asid buttical dan lithium chloride, istimewa untuk kiraan selektif bifidobacteria dalam produk tenusu.

Penyediaan

Timbang 68,25 gram medium dehidrasi dan larut dalam satu liter air suling. Biarkan selama 5 minit. Untuk membubarkan secara keseluruhannya membawa kepada sumber haba melambai dengan kerap dan mendidih selama 1 hingga 2 minit. Sterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit.

Semasa meninggalkan autoklaf, biarkan berdiri selama beberapa minit dan bising masih panas di plat steril petri.

Biarkan menguatkan dan melabur plat, pesanan di platelet dan simpan di dalam peti sejuk sehingga digunakan. Biarkan plat mengambil suhu bilik sebelum menggunakannya.

PH sederhana mestilah 6.4 ± 0.2. Beberapa rumah komersial mengesyorkan pH antara 5.5 hingga 5.9.

Medium dehidrasi adalah kuning air dan disediakan adalah amber gelap.

Kedua -dua plat sederhana dan disediakan mesti disimpan dari 2 hingga 8 ° C.

Aplikasi

Plat agar m.R.S. Mereka boleh disemai di permukaan (keletihan atau dengan drigalski spatula). Ia juga boleh disemai dengan kedalaman. Plat mesti diinkubasi pada suhu 37 ° C dalam mikroaerofilia (4% daripada atau₂ dan co 5-10%₂) Selama 24 hingga 72 jam.

Boleh melayani anda: Amensalisme: Ciri -ciri, Contoh, Perbezaan dengan Dinerisme

Kaedah yang ditabur dipilih mengikut tujuan yang dijalankan (pengasingan atau kiraan).

Ciri -ciri koloni

Tanah jajahan Lactobacillus yang dianggap sebagai warna putih dan mempunyai penampilan mucoid atau berkrim di agar ini. Selanjutnya mereka mesti mengenal pasti.

Pengasingan bakteria asid laktik

Untuk ini, permukaan yang ditaburkan digunakan. Sampel yang akan disaman memerlukan prosedur sebelumnya. 

Dalam kes sampel susu ibu, disyorkan untuk menyentuh 1 ml sampel pada 14.000 RMP selama 10 minit, untuk mengeluarkan lapisan lemak. 900 μl dibuang, dan dalam baki 100 μl sedimen digantung dan permukaan agar m.R.S. Kemudian anda mesti mengedarkan secara merata dengan spatula drigalski.

Dalam kes sampel najis, satu (1) gram najis ditimbang dan 9 ml air peptoned steril 0.1%dihomogenkan, sepadan dengan pencairan 1/10. Kemudian pelarut bersiri dilakukan, sehingga pencairan terakhir 10^-4.

Akhirnya 100 μl pelarut 10 diambil^-2, 10^-3 dan 10^-4 Dan setiap pencairan disemai pada Puan agar, mengedarkan secara merata dengan spatula Drigalski.

Bakteria Asid Laktik Mengira

Dalam kes ini yang ditaburkan dilakukan dengan mendalam.

Untuk sampel susu ibu, 1 ml diambil dan diletakkan di dalam tiub plastik kerucut steril. Agar MRS ditambah pada suhu anggaran 40 ° C hingga jumlah akhir 25 ml, mendapatkan campuran homogen. Seterusnya ia dicurahkan ke dalam petri steril.

Untuk sampel najis, pelarut dilakukan, seperti yang diterangkan di atas. 1 ml setiap pencairan diambil dan tiub plastik steril. Agar MRS MRS ditambah kepada jumlah 25 ml.

Boleh melayani anda: Biome Akuatik: Ciri -ciri, Jenis, Flora, Fauna, Contoh

Campuran setiap pencairan secara seragam dicurahkan ke dalam plat steril petri. Akhirnya biarkan berdiri sehingga pempolimeran anda.

Koloni bergantung kepada lelaki dan Sharpe agar (m.R.S.). Sumber: Foto yang disumbangkan untuk artikel ini. Penulis: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto yang diambil semasa siasatan bertajuk: Penilaian bakteria asid laktik dan bifidobakteria dengan potensi probiotik dalam susu ibu dan najis bayi.

Di peringkat penyelidikan

Setiap hari kajian bakteria asid laktik menjadi lebih menarik; Terutama penyelidik berusaha mengetahui strain baru dan potensi mereka sebagai inisiatif untuk penyeragaman dalam pembuatan produk tenusu, antara kegunaan lain.

Dalam pengertian ini, Alvarado et al. (2007) menggunakan agar m.R.S. Untuk menjalankan kajian di mana mereka mengasingkan, dikenal pasti dan dicirikan bakteria asid laktik yang terdapat dalam keju artisanal ahumado Andean.

Di dalam keju mereka mendapati kehadiran bakteria genre lactococcus dan lactobacillus, dan menyimpulkan bahawa campuran strain terpencil adalah mencukupi sebagai memulakan strain dalam pembuatan keju dari susu pasteurisasi dari susu pasteurisasi dari susu pasteur.

Sebaliknya, Sánchez y Cols. (2017) menggunakan agar m.R.S. Untuk menyiasat kehadiran bakteria asid laktik di saluran pencernaan piglet, untuk menggunakannya sebagai probiotik asli yang meningkatkan produktiviti babi yang sihat.

Dengan medium ini mereka berjaya mengasingkan empat spesies: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae dan Pediococcus pentosaceus.

Begitu juga, Báez et al. (2019) menggunakan penuaan m.R.S. Untuk menilai bakteria asid laktik (BAL) dan bifidobakteria dengan potensi probiotik dalam susu ibu dan najis bayi.

Mereka berjaya mengasingkan 11 bal dan 3 Bifidobacteria sp Dalam susu ibu, dan 8 bal dan 2 Bifidobacteria sp. Dalam najis. Semua memenuhi parameter tertentu yang mengiktiraf mereka sebagai bakteria dengan aktiviti probiotik.

Penulis menyimpulkan bahawa kedua -dua susu ibu dan najis bayi menyusu secara eksklusif berfungsi sebagai sumber semula jadi bakteria probiotik.

QA

Untuk menilai kualiti agar m.R.S. Kawalan seperti:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli dan Bacillus cereus.

Keputusan yang diharapkan adalah pertumbuhan yang memuaskan untuk 6 bakteria pertama, sementara Dan. coli dan Bacillus cereus mesti dihalang secara keseluruhan.

Rujukan

1. Makmal Britania. M.R.S agar. Terdapat di: Britanialab.com