Darah agar

Pendekatan darah. Dengan lesen

Apa itu Agar Darah?

Dia Darah agar Ia adalah medium budaya pepejal yang diperkaya, digunakan untuk pemulihan dan pertumbuhan pelbagai mikroorganisma dari sampel klinikal atau subjektif.

Medium budaya ini pada dasarnya terdiri daripada agar asas yang diperkaya dan darah domba 5%. Pangkalan agar boleh berubah mengikut keperluan, tetapi terutamanya akan terdiri daripada peptonas, asid amino, vitamin, ekstrak daging, natrium klorida, agar, antara lain. Adapun darah, darah manusia kadang -kadang digunakan.

Pengumpulan darah boleh disediakan di makmal atau sudah dapat dibeli, dari syarikat yang didedikasikan untuknya. Penyediaan medium ini sangat halus, apa -apa kecerobohan dalam penjelasannya akan menghasilkan banyak yang tercemar.

Oleh itu, semua langkah berjaga -jaga yang mungkin harus diambil dan pada akhirnya melaksanakan kawalan kualiti yang menginkubkan 37 ° C 1 plat setiap 100 yang disediakan.

Asas

Staphylococcus aureus ditanam dalam agar darah. Sumber: Nathan Reading on Flickr Nathan R. Di Twitter, Wikimedia Commons

Agar darah adalah medium yang diperkaya, berbeza dan tidak selektif. 

• Ia adalah medium yang diperkaya kerana ia membawa sebagai darah 5-10% bahan tambahan utama di pangkalan agar. Kedua -dua sebatian mengandungi banyak nutrien yang membolehkan bakteria yang paling ditanam tumbuh di dalamnya.
• Pertumbuhan itu berlaku tanpa sekatan, jadi tidak selektif. Walau bagaimanapun, jika sebatian ditambah yang menghalang pertumbuhan beberapa mikroorganisma dan memihak kepada orang lain, ia menjadi selektif. Contohnya, jika jenis antibiotik atau antijamur tertentu ditambah.
• Ia berbeza, kerana ia membolehkan membezakan 3 jenis bakteria: beta-hemolytic, alpha-hemolitik dan gamma-hemolytic.
• Beta-hemolytic adalah mereka yang mempunyai keupayaan untuk lisar atau lengkap. Contoh bakteria ß-hemolitik adalah Streptococcus pyogenes dan Streptococcus agalactiae.
• Alpha-hemolytic adalah yang melakukan hemolisis separa, di mana hemoglobin dioksidakan ke methemoglobin, menghasilkan warna kehijauan di sekitar koloni. Fenomena ini dikenali sebagai hemolisis α atau α-hemolisis, dan bakteria diklasifikasikan sebagai α-hemolitik. Contoh bakteria α-hemolitik adalah Streptococcus pneumoniae dan Streptococcus kumpulan Viridans.
• Bakteria gamma-hemolitik atau bukan hemolitik tumbuh di atas agar tanpa menghasilkan perubahan di dalamnya, kesan yang dikenali sebagai γ-hemolisis, dan mikroorganisma adalah γ-hemolitik. Contoh bakteria γ-hemolitik: Beberapa strain dari Streptococcus kumpulan D (Streptococcus bovis dan enterococcus faecalis).

Aplikasi

• Medium Budaya ini adalah salah satu yang paling biasa digunakan di makmal mikrobiologi. Antara mikroorganisma yang mampu berkembang dalam medium ini adalah: bakteria yang ketat, pilihan, mikroaerophilic, anaerobik, gram -positif atau gram -negatif, bakteria pertumbuhan pesat atau pertumbuhan perlahan atau pertumbuhan perlahan atau perlahan.
• Beberapa bakteria yang menuntut atau menjengkelkan juga tumbuh dari sudut pandangan pemakanan, serta kulat dan ragi. Ia berguna untuk strain subjektif atau mengaktifkan semula yang sangat lemah secara metabolik.

Boleh melayani anda: Cyclopentanoperhydropenantreno: Struktur dan kepentingan

Walau bagaimanapun, pilihan agensi darah dan asas akan berbeza -beza bergantung kepada mikroorganisma yang mungkin pulih dan penggunaan yang akan diberikan kepada plat (penanaman atau antibiogram).

Pilihan jenis darah

Darah boleh menjadi kambing, arnab, kuda atau manusia.

Yang paling disyorkan adalah darah kambing, kecuali beberapa pengecualian. Contohnya, untuk mengasingkan spesies Haemophilus, Di mana darah yang disyorkan adalah kuda atau arnab, kerana darah kambing mempunyai enzim yang menghalang faktor v.

Yang paling tidak disyorkan adalah manusia, walaupun ia adalah yang paling banyak digunakan, mungkin kerana ia adalah yang paling mudah diperoleh. 

Darah mesti ditelan, diperolehi tanpa aditif dan dari haiwan yang sihat. Untuk penggunaan darah manusia, beberapa faktor mesti diingat:

• Sekiranya darah berasal dari individu yang mengalami jangkitan bakteria, mereka akan mempunyai antibodi tertentu. Di bawah syarat -syarat ini, kemungkinan pertumbuhan beberapa bakteria akan dihalang.
• Sekiranya diperoleh dari bank darah, ia mengandungi sitrat dan mungkin bakteria tertentu tidak berkembang di hadapannya.
• Sekiranya darah berasal dari pesakit yang mengambil antibiotik, pertumbuhan bakteria yang terdedah dapat dihalang.
• Dan jika darah berasal dari orang kencing manis, glukosa berlebihan mengganggu corak hemolisis yang betul.

Pilihan kadar asas

Asas agar yang digunakan untuk penyediaan agar darah boleh menjadi sangat luas. Antaranya ialah: Agar Nutrien, Cerebro Heart Infusion, Triptych Soya, Müeller Hinton, Thayer Martin, Columbia Agar, Brucella agar, Campylobacter agar, dll.

Penggunaan agar darah mengikut medium asas yang digunakan untuk penyediaan

Agar nutrien

Pangkalan ini adalah yang paling kurang digunakan, kerana mereka akan tumbuh terutamanya bakteria yang tidak menonjol, seperti bacilli enterik, Pseudomonas sp, S. Aureus, Bacillus SP, dalam kalangan yang lain. Tidak disyorkan untuk mengasingkan Streptococcus.

Cerebro Heart Infusion (BHI)

Ia adalah salah satu yang paling digunakan sebagai pangkalan, kerana ia mempunyai nutrien yang diperlukan untuk pertumbuhan kebanyakan bakteria, termasuk Streptococcus sp dan bakteria lain yang menuntut. Walaupun tidak sesuai untuk memerhatikan corak hemolisis.

Dengan pangkalan ini, darah kambing digunakan.

Anda juga boleh menyediakan varian agar darah, di mana sebatian lain ditambah untuk mengasingkan mikroorganisma tertentu. Contohnya, Cerebro Hati Infusi ditambah dengan darah arnab, sista dan glukosa, berfungsi untuk mengasingkan Francisella tularensis.

Walaupun, dengan Cistina Telurito, berguna untuk mengasingkan Corynebacterium diphteriae. Darah manusia atau kambing boleh digunakan.

Boleh melayani anda: potensi biotik

Dengan yang pertama, beta-trimolisis akan dilihat sebagai halo sempit, sementara dengan yang kedua halo akan menjadi lebih luas.

Pangkalan ini, bersama -sama dengan Bacitracin, kanji jagung, darah kuda dan suplemen pengayaan lain (isovalex), digunakan untuk pengasingan jantina Haemophilus sp Dari sampel pernafasan.

Jika gabungan antibiotik chloramphenicol-gentamycin atau penisilin-stuffyin dengan darah kuda ditambah, ia berfungsi untuk mengasingkan kulat patogen yang menuntut, walaupun dengan prestasi yang lebih tinggi ke sabouraud glukosa agar agar sabouraud agar agar sabouraud glukosa agar. Terutamanya berguna dalam pengasingan Histoplasma capsulatum.

Triptyse Soy Agar

Pangkalan ini adalah yang paling disyorkan untuk mengamati corak hemolisis dan merealisasikan ujian diagnostik, seperti cukai opto -korner dan bacitracine. Ia adalah agar darah klasik yang digunakan oleh rutin.

Dengan pangkalan ini, anda juga boleh menyediakan agar darah khas untuk Corynebacterium diphteriae, Dengan Telurito Cistina dan Darah kambing.

Gabungan darah agar ini, lebih banyak kanamycin-vancomycin, sesuai untuk pertumbuhan anaerobik, terutamanya Bacteroides sp.

Müeller Hinton Agar

Darah ini ditambah asas digunakan untuk melaksanakan antibiogram menuntut mikroorganisma, seperti Streptococcus sp. Ia juga berguna untuk mengasingkan bakteria seperti Legionel pneumophila.

Thayer Martin Agar

Medium ini sesuai sebagai pangkalan agar darah ketika kecurigaan genus Neisseria, terutamanya Neisseria meningitidis, Memandangkan itu N. Gonorrhoeae Ia tidak tumbuh dalam agar darah. Ia juga berfungsi untuk melakukan ujian kerentanan ke Neisseria meningitidis.

Columbia Agar

Pangkalan ini sangat baik untuk menyemai sampel biopsi gastrik untuk mencari Helicobacter pylori.

Medium ini menyediakan 7% darah kambing defibrinate dengan antibiotik (vancomycin, trimetoprim, amphotericin B dan cefsulodin) untuk menyekat pertumbuhan bakteria lain yang mungkin hadir.

Pangkalan yang sama ini ditambah dengan darah manusia atau kambing, nalidíxico dan asid colistin berguna untuk mengasingkan Gardnerella vaginalis. Ia juga sesuai untuk menilai kerentanan antimikrob terhadap antibiotik mikroorganisma yang sama.

Di samping itu, ia berfungsi untuk penyediaan agar darah untuk penanaman anaerobik, menambah aminoglycosides dan vancomycin. Pangkalan ini membolehkan kita melihat corak hemolisis dengan betul.

Brucella Agar

Medium ini digunakan sebagai asas agensi darah, bersama -sama dengan penambahan vitamin K, sangat sesuai untuk penanaman bakteria anaerobik. Dalam kes ini, penggunaan darah kambing disyorkan.

Boleh melayani anda: pernafasan kulit: ciri dan contoh haiwan

Campylobacter Agar

Campylobacter agar ditambah dengan 5% RAM darah dan 5 antibiotik (cephalotine, amphotericin B, trimetoprim Campylobacter Jejuni Dalam sampel najis.

Penyediaan

Setiap rumah komersial membawa kepada pembungkusan petunjuk untuk menyediakan satu liter medium budaya. Pengiraan yang sepadan boleh dibuat untuk menyediakan jumlah yang dikehendaki, mengikut agar asas yang dipilih.

Berat dan larut

Agar asas dehidrasi (dalam habuk), oleh itu ia mesti dibubarkan dalam air suling yang diselaraskan ke pH 7.3.

Jumlah yang ditunjukkan oleh agar asas yang dipilih ditimbang dan dibubarkan dalam jumlah air yang sepadan dalam fixola, maka ia dipanaskan ke atas haba sederhana dan bercampur dengan pergerakan putar sehingga seluruh habuk.

Mensterilkan

Setelah dibubarkan, sterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 20 minit.

Agregat darah

Apabila meninggalkan autoklaf, fixola akan disejukkan sehingga suhu berkisar antara 40 hingga 50 ° C. Ia adalah suhu yang menyokong kulit manusia, dan pada masa yang sama agar belum menguatkan.

Untuk melakukan ini, fixola disentuh dengan tangan dan jika haba boleh diterima, ia adalah suhu yang ideal untuk menambah darah defibrinasi yang sepadan (50 ml seliter agar). Campurkan untuk homogen.

Laluan agregat darah adalah penting, kerana jika ia dilakukan apabila medium sangat panas, sel darah merah akan pecah dan medium tidak akan berfungsi untuk memerhatikan hemolisis.

Sekiranya ditambah terlalu sejuk, benjolan akan dibentuk dan permukaan medium tidak akan lancar untuk dapat membuat striatum dengan betul.

Tuangkan ke dalam pinggan Petri

Hidangkan dalam plat petri steril sejurus selepas homogenisasi darah. Di setiap plat petri kira -kira 20 ml dituangkan. Prosedur ini dilakukan dalam loceng aliran laminar atau berhampiran dengan lebih ringan.

Pada masa menghidangkan darah di atas plat Petri, gelembung udara tidak boleh ditinggalkan di permukaan plak. Sekiranya ini berlaku, api lebih ringan Bunsen diluluskan dengan cepat di atas pinggan untuk membuangnya.

Plat dibenarkan untuk menguatkan dan disimpan di dalam peti sejuk (2-8 ° C) terbalik sehingga digunakan. Sebelum menggunakan plat agar darah, mereka mesti membekalkan untuk dapat menanam.

Plat yang disediakan mempunyai tempoh kira -kira 1 minggu.

Rujukan

1. Bayona, m. Keadaan mikrobiologi untuk penanaman Helicobacter pylori. REV. Kobis. Gastroenterol. 
2. Forbes, B ,, Sahm, D., Weissfeld, a. Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. Pan -American Editorial S.Ke.