Thayer Martin Agar Apa, Yayasan, Penyediaan, Kegunaan

Dia Thayer Martin Agar Ia adalah medium pepejal yang sangat berkhasiat dan selektif untuk pengasingan Neisseria meningitidis dan Neisseria gonorrhoeae; kedua -duanya dikenali sebagai kepentingan patogen atau klinikal.

Salah satu ciri khas yang paling penting yang dibentangkan oleh Thayer Martin Agar adalah kandungannya yang tinggi dalam suplemen berkhasiat. Harta ini sangat diperlukan, kerana neisseries sangat menuntut mikroorganisma dari sudut pandangan pemakanan dan oleh itu tidak tumbuh dalam media biasa.

Sebaliknya, kerana mikroorganisma ini biasanya dijumpai di kawasan yang tidak stabil, penambahan inhibitor yang menghalang pertumbuhan flora yang disertakan diperlukan, tanpa menjejaskan perkembangan genus Neisseria.

Agar ini terdiri daripada agar asas GC, hemoglobin, suplemen pemakanan tambahan dan kompleks bahan penghalang (antibiotik dan antijamur). Rumah komersial menjual setiap suplemen secara berasingan.

Sampel untuk disemai dalam medium ini bergantung kepada mikroorganisma yang sedang dicari. Untuk Neisseria Gonorrhoeae Sampel yang ideal adalah rembesan vagina dan uretral. Sementara untuk Neisseria meningitidis Sampel yang paling banyak digunakan ialah CSF, memancarkan pharyngeal dan nasopharyngeal.

Asas

Neisseries adalah mikroorganisma yang diklasifikasikan sebagai menjengkelkan dan oleh itu pengasingan mereka sukar.  Oleh itu, Thayer Martín adalah medium yang kompleks dan setiap komponennya memenuhi fungsi yang dijelaskan di bawah:

GC Base Agar

Agar GC mengandungi protein peptone, kanji jagung, natrium klorida, dipotassium phosphat. Komponennya menyediakan nutrien asas untuk pembangunan mikrob, meneutralkan asid lemak toksik, menyumbang untuk mengekalkan keseimbangan osmotik, menentukan pH dan memberikan konsistensi yang kukuh kepada alam sekitar.

Hemoglobin

Hemoglobin menyediakan faktor v dan x (nicotinamide adenine dinucleotide nad dan hemina masing -masing). Oleh itu dalam medium ini juga tumbuh spesies dari haemophilus. Hemoglobin boleh diperolehi secara komersil atau boleh menambah bovine yang baru ditolak ke alam sekitar.

Boleh melayani anda: elemen biogenetik

Suplemen Pengayaan

Sebaliknya, medium Thayer-Martin juga perlu ditambah suplemen pengayaan, kerana nutrien yang mengandungi asas tidak mencukupi untuk keperluan genus Neisseria.

Suplemen pengayaan yang paling biasa digunakan dipanggil isavalex. Ini mengandungi glutamin, adenine, nad, cocarboxylase, guanine, nitrat ferrik, asid p-amino benzoik, vitamin B12, tiamin dan glukosa. Semua sebatian ini diperlukan untuk perkembangan neisseries patogen yang baik.

Perencat

Kerana ia adalah inhibitor sederhana yang sangat berkhasiat yang menghalang pertumbuhan mikroorganisma dari flora biasa di kawasan itu dan dengan itu memihak kepada pengasingan genus Neisseria.

Kompleks inhibitor terdiri daripada vancomycin, colistin dan nistatin. Vancomycin menghalang pertumbuhan bakteria positif gram, colistin menghalang perkembangan bakteria negatif gram seperti pseudomonas dan beberapa neiseries saprophytic, dan nistatin bertindak pada ragi seperti ragi seperti ragi seperti Candida albicans.

Walau bagaimanapun, maka Thayer Martin Agar diubahsuai; Perubahan terdiri daripada penambahan trimetoprim, peningkatan jumlah agar dan agregat glukosa tambahan. Perubahan ini meningkatkan pemulihan spesies Neisseria Gonorrhoeae.

Harus diingat bahawa trimetoprim menghalang pertumbuhan genre protein dan pembentukannya yang akibatnya. Dalam pengertian ini, antibiotik adalah mereka yang memberikan watak selektif kepada medan Thayer Martin.

Penyediaan

Thayer Martin Agar Asli

-GC AGAR

Timbang 8.2 gr medium GC yang dehidrasi dan gantung pada 100 ml. Campurkan dan rebus selama 1 minit dengan pengadukan yang kerap untuk dibubarkan secara keseluruhan. Sterilkan campuran dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit.

Boleh melayani anda: proses hominization: ciri dan fasa

-2% hemoglobin

Tangguhkan 2 gr hemoglobin dehidrasi dalam 2 atau 3 ml air sulingan panas untuk membentuk campuran seragam. Secara beransur -ansur menambah air untuk melengkapkan jumlah 100 ml. Penggantungan mesti homogen sebelum mensteril.

Sterilkan dalam autoklaf selama 15 minit.

-Suplemen Pengayaan

Menyusun semula botol komersial dengan pencairan yang disediakan oleh rumah komersial yang sama. Campurkan dengan baik. Jumlah cair untuk digunakan akan ditentukan dalam arahan kit.

-Suplemen perencatan v.C.N (Vancomycin, Colistin, Nistatin)

Menyusun semula botol dengan pencair yang disediakan oleh rumah komersial. Campurkan dengan baik. Jumlah cair untuk digunakan akan ditentukan dalam arahan kit.

-Disediakan

Untuk setiap 100 ml GC Agar meneruskan seperti berikut:

Apabila agar GC meninggalkan autoklaf, biarkan sejuk sehingga suhu kira -kira 50 ° C dan tambahkan 2 ml larutan hemoglobin yang disediakan, 2 ml suplemen pengayaan (isoobalex atau bralex), dan 2 ml suplemen perencatan. Campurkan dan berkhidmat di Plat Steril Petri.

Biarkan menguatkan dan simpan di dalam peti sejuk sehingga digunakan.

Warna medium yang disediakan adalah ceri merah. PH akhir medium ialah 7.2 ± 0.2

Thayer Martin Agar diubahsuai

Timbang 8.2 gr medium GC yang dehidrasi dan gantung pada 100 ml. Tambah 1 gr air-air dan tambahkan 0.3 gr glukosa. Campurkan dan rebus selama 1 minit dengan pengadukan yang kerap untuk dibubarkan secara keseluruhan. Sterilkan campuran dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 minit.

Sediakan suplemen hemoglobin dan pengayaan seperti yang diterangkan di atas.

Tambahan perencatan yang digunakan ialah v.C.N.T (vancomycin, colistin, nistatin, trimetoprim).

Boleh melayani anda: teori pra -evolusionis, pengarang dan ideanya

-Disediakan

Teruskan dengan cara yang diterangkan untuk thayer Martin asal Agar.

Gunakan

Thayer Martin agar harus marah sebelum menyemai sampel. Sampel yang biasa digunakan adalah exudates pharyngeal, exudates hidung, vagina, uretral dan/atau rektum dan CSF.

Gunakan sampel yang baru diambil dan buat inokulum yang kuat mengenai agar. Sampel ditaburkan secara langsung disebabkan oleh pelepasan bahan dan kemudian menonjol kerana keletihan di permukaan.

Plat diinkubasi pada 35-37 ° C selama 24 hingga 48 jam dalam kendi mikroaerofilia (5% CO₂). Selepas masa inkubasi plat diperiksa untuk mencari koloni kecil, penampilan kelabu dan kadang -kadang mucoid.

Lakukan ujian biokimia gram dan pengesahan ke koloni yang mencurigakan.

QA

Untuk melaksanakan kawalan kualiti Thayer Martin boleh menggunakan strain mikroba berikut.

Neisseria Gonorrhoeae ATCC 49226 dan Neisseria meningitidis ATCC 13090; Dalam kedua -dua strain perkembangan yang memuaskan dijangka.

Strain berikut juga mesti dimasukkan: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 dan Candida albicans ATCC 10231. Dalam kesemuanya mereka, perencatan keseluruhan atau separa dijangka dalam medium ini.

Batasan

-Perlu diingat bahawa di bakteria tengah yang tahan terhadap perencat yang digunakan dapat tumbuh.

-Ada ketegangan Neisseria Gonorrhoeae yang boleh sensitif terhadap kepekatan vancomycin yang digunakan. Atas sebab ini, disyorkan untuk menggunakan agar coklat selari ditambah dengan isovalex, tetapi tanpa inhibitor.

-Terdapat ketegangan yis nistatine yang boleh tumbuh dalam medium ini dan mengganggu pengasingan neisseries patogen, terutamanya gonococci.

Rujukan

1. Laboratorium Britania. Thayer Martin Media diubahsuai. Terdapat di: Britanialab.com