Sup tetration apa, asas, penyediaan, kegunaan

Dia Sup tetration o tt sup adalah medium kultur cecair terpilih untuk pengayaan dan pemulihan strain genus Salmonella. Ia dicipta oleh Müeller dan kemudian diubahsuai oleh Kauffmann, jadi ada orang yang memanggilnya Müeller-Kauffmann Broth.

Medium asal mengandungi protein peptonas, kalsium karbonat dan natrium thiosulfate. Kauffmann menambah garam hempedu dan mencipta modaliti lain dengan hijau terang. Bahan -bahan ini menghalang pertumbuhan koliform, meninggalkan medium bebas untuk pembangunan bakteria patogen, dalam hal ini Salmonella.

Agregat penyelesaian iodure iodure ke sup tetrationato. Sumber: Manuel Almagro Rivas [CC BY-SA 4.0 (https: // creativeCommons.Org/lesen/by-sa/4.0)]

Pengubahsuaian sangat berjaya kerana sensitiviti medium meningkat dengan ketara. Oleh itu, kini berguna untuk mencari salmonellas dalam apa -apa jenis sampel, tetapi terutama untuk najis pepejal atau cecair dan makanan.

Penyediaannya terdiri daripada dua fasa; Medium komersial adalah asas untuk menyediakan sup tetrationato, dan kemudian supaya tetrationato dapat dibentuk penyelesaian iodur yang melengkapkan medium.

Persatuan Kesihatan Awam Amerika (APHA) mengesyorkan penggunaan sup tetrasi yang ditambah dengan hijau terang untuk pengayaan sampel untuk mencari salmonella, kerana ia lebih selektif daripada sup tetration dan sup selenito.

Secara umum, sup tetrationato sangat sesuai apabila kehadiran bakteria genus Salmonella disyaki dalam kuantiti yang kecil atau yang dianiaya oleh pendedahan kepada bahan -bahan perencatan atau oleh proses perindustrian yang meminimumkan daya maju mereka.

Asas

Peptones yang hadir sesuai dengan kasein dicry dan digret peptik peptik diget. Ini memberikan sumber karbon, nitrogen dan nutrien secara umum untuk pertumbuhan bakteria.

Boleh melayani anda: mastozoologi: asal, kajian apa, contoh penyelidikan

Bagi bahagiannya, natrium thiosulfate bertindak balas dengan penyelesaian iodida untuk membentuk tetrationato. Ini menghalang pertumbuhan koliform dan nikmat perkembangan bakteria yang mengandungi enzim tetrationato reductase, antaranya adalah salmonella jantina, tetapi juga proteus.

Garam hempedu juga bertindak sebagai bahan penghalang bakteria gram yang paling positif dan beberapa gram negatif (coliforms).

Kalsium karbonat menyerap bahan toksik yang dihasilkan oleh penguraian tetrationato, yang membentuk asid sulfurik. Dalam pengertian ini, kalsium karbonat meneutralkan keasidan menjaga pH medium yang stabil.

Dalam kes modaliti dengan hijau yang cemerlang, bahan ini meningkatkan kuasa selektif sup tetration dengan menghalang mikroorganisma lain selain daripada Salmonella jantina.

Penyediaan

-Sup tetration

Penyelesaian iodur iodurada

Timbang:

• 6 gr iodin.
• 5 gr iodida kalium.

Potassium iodida larut dalam kira -kira 5 ml air suling steril, maka yodium ditambah sedikit demi sedikit sementara campuran dipanaskan. Setelah dibubarkan sepenuhnya, ia disiram dengan air sulingan steril sehingga mencapai jumlah akhir 20 ml.

Separuh asas untuk sup tetrationato

Timbang 46 gram medium dehidrasi dan gantung dalam 1 liter air sulingan steril. Campurkan dan panaskan sehingga pembubarannya, hanya boleh membawa beberapa minit. Jangan mensterilkan dalam autoklaf. Pangkalan medium dibenarkan untuk menyejukkan sehingga 45 ° C kira -kira dan pada masa itu 20 ml penyelesaian iodur ditambah.

Setelah menambah penyelesaian iodured ke medium, ia mesti digunakan dengan segera. Jika anda tidak mahu menggunakan keseluruhan campuran, teruskan seperti berikut:

Boleh melayani anda: Persaingan khusus: ciri, jenis dan contoh

10 ml dari medium asas diedarkan dalam tiub, dan hanya kepada mereka yang akan disuntik dengan sampel ditambah 0.2 ml penyelesaian iodured.

Mereka yang tidak akan digunakan masih boleh disimpan di dalam peti sejuk, bagaimanapun, kerana medium tidak disterilkan, yang ideal adalah untuk menyediakan jumlah yang tepat yang diperlukan.

Warna medium sebelum menambahkan larutan iodida iodida putih putih dengan mendakan putih dan selepas agregat berwarna coklat dengan mendakan padat. Endapan diperhatikan adalah normal dan sepadan dengan kalsium karbonat yang tidak dibubarkan. PH akhir medium ialah 8.4 ± 0.2.

-Variasi sup tetrationat dengan hijau terang

Untuk menyediakan sup tetrationato dengan hijau terang, semua langkah yang diterangkan di atas dilakukan, tetapi tambahannya ia akan ditambah kepada campuran penyelesaian hijau 0.1% terang yang disediakan.

Bersinar hijau

Penyelesaian ini disediakan seperti berikut:

Timbang 0.1 gr terang hijau dan gantung dalam 100 ml air sulingan. Panaskan sehingga mendidih untuk mencapai pembubarannya. Simpan dalam botol amber.

Gunakan

Untuk sampel najis (coproulture) protokol adalah seperti berikut:

Inokulasi 1 gr najis pepejal atau 1 ml najis cecair dalam tiub dengan 10 ml sup tetrasi yang sedia untuk digunakan. Meregangkan aerobiosis kuat dan inkubasi pada suhu 43 ° C selama 6-24 jam.

Selanjutnya, ambil aliquot 10 hingga 20 μl sup dan naik dalam medium terpilih untuk Salmonella, seperti SS agar, XLD agar, agar hijau terang, Hektoen Enteric Agar, antara lain.

Selari, cara terpilih untuk Salmonella mesti disuntik dengan sampel langsung (najis) tanpa pengayaan. Untuk sampel swab rektum, muat turun bahan yang dikumpulkan di dalam tiub dan teruskan dengan cara yang diterangkan di atas.

Boleh melayani anda: lipogenesis: ciri, fungsi dan reaksi

Untuk sampel makanan berat 10 gr makanan pepejal atau 10 ml makanan cair dan inokulasi botol dengan 100 ml sup tetrationat siap digunakan. Teruskan dengan cara yang sama seperti yang dinyatakan di atas tetapi inkubasi 37 ° C.

Seperti yang dapat dilihat hubungan antara sampel dan sup akan selalu 1:10.

QA

Untuk menguji medium kultur, anda boleh menggunakan strain kawalan yang diketahui. Yang paling banyak digunakan ialah strain yang disahkan ATCC.

Strain yang hendak digunakan adalah Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella Abony DSM 4224, Salmonella Enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 dan Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Untuk strain Salmonella, perkembangan yang sangat baik dijangka, sementara Escherichia coli Ia boleh mempunyai perkembangan yang lemah atau biasa, dan strain positif gram (Enterococcus dan Staphylococcus) sebahagiannya atau dihalang sepenuhnya.

cadangan

-Oleh kerana medium ini tidak menghalang pertumbuhan proteus, beberapa makmal biasanya meletakkan 40 mg/l novobiocin untuk mengelakkan perkembangan ketegangan mikroba ini. Antibiotik mesti ditambah sebelum penyelesaian iodo iodure.

-Setelah menyediakan medium termasuk penyelesaian iodin iodur, ia tidak sepatutnya menghabiskan lebih dari 2 jam untuk disuntik.

-Pada masa mengedarkan medium di dalam tiub, campuran mesti homogen secara berterusan untuk memulihkan semula pendahuluan yang terbentuk.

-Dalam sampel yang kurang tercemar, sampel 35-37 ° C diinkubasi, dan dalam sampel yang sangat tercemar, inkubasi pada 43 ° C disyorkan.

Rujukan

1. BBL Media. 2005. Disediakan dalam tiub untuk penanaman spesies Salmonella.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Pan -American Editorial S.Ke. Argentina.