Asas penampan fosfat (PBS), penyediaan dan kegunaan

Dia penampan fosfat, bps atau penampan fosfat salin Ini adalah penyelesaian penampan dan isotonik, yang fungsinya adalah untuk mengekalkan tekanan pH dan osmotik yang paling dekat dengan persekitaran alam sekitar (fisiologi). Akronim PBS bermaksud salin buffer fosfat.

PH dan osmolariti adalah dua aspek yang sangat penting yang mesti dikawal dalam protokol makmal tertentu. Dalam kes pH adalah penting bahawa ia dikawal, terutamanya dalam tindak balas biokimia, kerana ini mungkin berbeza atau tidak melaksanakan jika reaktan berada dalam pH yang tidak sesuai.

Buffer salino pbs fosfat dalam dua pH yang berbeza. Sumber: Pixinio.com

Walaupun, kawalan osmolariti adalah penting terutamanya apabila bekerja dengan sel hidup, kerana membran plasma sel bertindak balas mengikut kepekatan larutan di mana mereka dijumpai.

Sekiranya sel dipindahkan ke medium hipertonik, mereka akan dehidrasi, kerana kecerunan air akan diangkut ke sisi di mana terdapat kepekatan larutan yang lebih besar. Jika, sebaliknya, sel -sel diletakkan dalam medium hipotonik, sel -sel akan menyerap cecair sehingga berbaring.

Itulah sebabnya penampan PBS untuk protokol makmal yang memerlukan penyelenggaraan sel digunakan In vitro, Dengan cara ini sel tidak akan rosak.

PBS terdiri daripada gabungan garam, seperti natrium klorida, natrium fosfat, kalium klorida dan kalium fosfat. Komposisi PBS boleh berbeza -beza bergantung pada protokol.

[TOC]

Asas

Pada dasarnya fungsi penampan fosfat salin adalah untuk mengekalkan pH fisiologi yang berterusan di sebelah kepekatan elektrolitik yang serupa dengan yang ada di dalam organisma.

Dalam persekitaran ini sel -sel dapat kekal stabil, kerana keadaan fisiologi mensimulasikan sebanyak mungkin.

Kepada formulasi PBS yang asal sebatian lain yang diperlukan dapat ditambah, contohnya penambahan EDTA ke penampan berguna untuk mencuci sel darah merah di Ujian Ketidakserasian Salib.

EDTA menghalang pecahan pelengkap C1 yang hadir dalam serum, untuk berpecah dan lise ke sel darah merah, iaitu, elakkan hasil yang salah dari ketidakcocokan. Di samping itu, EDTA membantu memisahkan sel.

Boleh melayani anda: Pokok Phylogenetic: Jenis dan Ciri mereka, Contohnya

Penyediaan

Jumlah garam yang mesti ditimbang untuk penjelasan PBS fosfat salin akan bergantung kepada jumlah yang diperlukan untuk menyediakan:

-Penyelesaian Penyelesaian Penyelesaian Salino Phfosphate (PBS 10X)

Untuk satu liter penyelesaian:

Timbang:

80.6 g NaCl,

2.2 g KCl,

11.5 g na₂HPO₄,

2.0 g KH₂HPO₄

Teknik Penyediaan

Di bikar tempat garam berat, tambahkan air yang cukup (80%) dan campurkan pada plat kacau dengan bar magnet sehingga garam dibubarkan.

Penyediaan PBS menggunakan besi yang mengasyikkan dengan bar magnet . Sumber: Pengguna: Ruhrfisch, Wikipedia. com

Penapis untuk membuang zarah yang tidak diingini. Gunakan penapis dengan liang 0.45 μm. Sterilis autoklaf dan mengedarkan aseptik dalam loceng aliran laminar dalam balang kaca dengan penutup.

Kepada penyelesaian 10x (pekat) tidak menyesuaikan pH. Pelarasan dibuat sekali dicairkan ke kepekatan penampan PBS 1X, (pencairan 1:10).

-Penampan fosfat salin (PBS 1X)

PBS 1X boleh disediakan secara langsung, menimbang jumlah yang sama setiap garam atau boleh menyediakan penyelesaian larutan ibu (1:10) dengan air sulingan steril.

-Untuk secara langsung menyediakan satu liter salin fosfat PBS 1x penyesalan:

8.06 g NaCl,

0.22 g KCl,

1.15 g na₂HPO₄,

0.20 g KH₂HPO₄

Teknik Penyediaan

Teruskan seperti yang dijelaskan dalam penyelesaian pekat. Selanjutnya pH mesti diselaraskan. Untuk melakukan ini, mengukur pH dan bergantung kepada hasil penggunaan asid (HCl) atau asas (NaOH) untuk menurunkan atau memuat naik pH masing -masing seperti yang diperlukan, sehingga 7.4.

Asid atau asas ditambah drop dengan drop semasa memantau nilai pH penyelesaian menggunakan meter pH. Penapis, steril autoklaf dan mengedarkan secara aseptik dalam tiub atau botol kerucut yang diperlukan.

-Untuk menyediakan PBS 1X dari penyelesaian ibu 10x:

Buat pencairan 1:10. Contohnya, untuk menyediakan 1 liter PBS 1X, mengukur 100 ml penyelesaian ibu dan tambahkan 700 ml air sulingan steril. Laraskan pH dan lengkapkan jumlah air sehingga mencapai 1000 ml.

Boleh melayani anda: Pemilihan arah: Apakah, definisi, contoh

Penampan PBS yang disediakan tidak berwarna dan telus.

PBS penggunaan harian boleh disimpan pada suhu bilik dan selebihnya di dalam peti sejuk.

.Penyelesaian untuk tetapan pH

HCl

Untuk 100 ml HCl (asid hidroklorik) hingga 1 molar.

Ukur 91 ml air suling dan letakkan di dalam kapal yang mendakan kapasiti 250 ml.

Ukur 8.62 ml HCl pekat dan perlahan -lahan menambahkannya ke bikar yang mengandungi air (tidak pernah terbalik). Ambil langkah biosekuriti yang berkaitan semasa mengendalikan asid yang kuat (bahan yang sangat menghakis).

Campurkan selama 5 minit menggunakan plat kacau dengan bar magnet di dalam kaca. Pergi ke bola 100 ml dan siram pada 100 ml dengan h₂Atau disuling.

NaOH

Untuk 100 ml NaOH (natrium hidroksida) 10 molar.

Ukur 40 ml air suling dan letakkannya dalam bikar kapasiti 250 ml. Ukur 40 gr naOH dan masukkan ke dalam air. Campurkan menggunakan plat kacau dengan bar magnet di dalam kaca.

Pergi ke bola aggroid 100 ml dan siram dengan air suling. Mematuhi piawaian biosafety, kerana tindak balas ini adalah eksotermik (melepaskan tenaga dalam bentuk haba).

Jika anda ingin menyediakan penyelesaian lain fosfat salin, anda boleh berunding dengan jadual berikut:

Sumber: "Makmal Genomik Virus dan Manusia, Sekolah Perubatan UASLP"

Aplikasi

Terutamanya ia digunakan dalam makmal biologi sel, imunologi, imunohistokimia, bakteriologi, virologi dan penyelidikan.

Adalah ideal untuk membuat pembasuhan sel oleh sentrifugasi (sel darah merah), monocapas sel dibasuh, dalam teknik ellipsometry spektroskopi, dalam kuantifikasi biofilm bakteria, dalam penyelenggaraan tanaman sel untuk virus, sebagai penyelesaian mencuci dalam teknik tidak langsung immunofluorescence dan teknik untuk pencirian antibodi monoklonal.

Ia juga berfungsi untuk mengangkut sel atau tisu, sebagai pencairan untuk mengira sel, penyediaan enzim sel (tripsin), sebagai pencairan kaedah desiccation biomolekul dan menyediakan reagen lain.

Boleh melayani anda: pemakanan heterotroph: ciri, peringkat, jenis, contoh

Sebaliknya, Martin dan kolaborator pada tahun 2006 menunjukkan bahawa PBS berguna dalam makmal sains forensik, khususnya dalam pemulihan sperma dari smear vagina, atau dalam pemulihan sel -sel vagina smear zakar. Dengan cara ini dapat diwujudkan jika ada hubungan seksual.

Batasan

-Beberapa penampan PBS membawa sebagai bahan pengawet bahan yang disebut natrium azid. Kompaun ini boleh menjana bahan letupan jika ia bersentuhan dengan plumbum atau tembaga. Atas sebab ini, penjagaan khas mesti diambil semasa membuang reagen ini untuk saliran. Sekiranya dibuang oleh laluan ini, air yang berlimpah mesti ditambah untuk mencairkan maksimum.

-Penampan fosfat tidak boleh ditambah zink, kerana ia menimbulkan beberapa garam.

-Wangen dan kolaborator pada tahun 2018 memutuskan bahawa penggunaan PBS tidak sesuai untuk mencuci leukemia myeloid akut utama (AML) yang diekstrak dari darah periferal, kerana banyak sel hilang oleh lisis, dengan penurunan besar dalam bahan protein.

Oleh itu, mereka memutuskan bahawa sel -sel utama AML tidak boleh dibasuh dengan PBS selepas penyimpanan dalam nitrogen cecair.

Rujukan

1. Coll j. (1993). Teknik diagnostik dalam virologi. Ed Díaz de Santos. 360 pg
2. Rodríguez M, Ortiz T. Kultur sel. Perubahan medium. Jabatan Histologi Normal dan Patologi Universiti Seville. Terdapat dalam kakitangan.kita.adalah
3. Penyediaan Saline Buffered (PBS) Fosfat. (2008). Prosedur Operasi Standard (SOP) Virus dan Manusia Makmal Fakulti Perubatan UASLP. Terdapat di: Genomik.Uaslp.mx
4. "Saline Fosfat Buff." Wikipedia, ensiklopedia percuma. Apr 2019, 19:36 UTC. Apr 2019, 02:57 adalah.Wikipedia.org.
5. Pietrasanta L, Von-Bilderling C.Topik dalam biofizik molekul. Tersedia di: Pengguna.Df.Uba.ar
6. REDIAR. Manual. PBS+EDTA. Terdapat di: Felsan.com.ar
7. Martin NC, Pirie AA, Ford LV, Callaghan CL, McTurbate K, Lucy D, Scrimger DG. Penggunaan salin buffer fosfat untuk pemulihan sel dan spermatozoa dari swab. Keadilan Sci. 2006; 46 (3): 179-84. Terdapat dalam: NCBI.NLM.NIH.Gov
8. Wangen R, Aasebø E, Treeni A, et al. Kaedah pemeliharaan dan fosfat buffered garine mencuci apfect proteome leukemia myeloid akut. Int j mol sci. 2018; 19 (1): 296. Terdapat dalam: NCBI.NLM.NIH.Gov
9. Martínez R, Gragera R.  (2008). Asas teoretikal dan praktikal histokimia. Majlis Penyiasatan Saintifik Superior. Madrid. Terdapat di: Buku.Google.co.Pergi