Sejarah Kamera Neubauer, Ciri, Kegunaan

The Kamera Neubauer, Heatimeter atau hechocytometer, adalah instrumen makmal yang terdiri daripada plak kaca khas. Ruang ini berfungsi untuk menjalankan beberapa jenis sel seperti sel darah merah, sel darah putih dan platelet, walaupun ia boleh digunakan untuk mengira spora, sperma, parasit, dll.

Ia membentangkan ciri -ciri yang sangat pelik, kerana ia terdiri daripada 3 zon, pusat untuk kiraan dan dua zon sokongan. Setiap kamera mempunyai dua kawasan pengiraan atau reticles, satu di bahagian atas dan satu di bahagian bawah.

Kamera Neubauer. Sumber: Santibadia [CC BY-SA 4.0 (https: // creativeCommons.Org/lesen/by-sa/4.0)]. Imej yang diedit.

Ini mempunyai banyak bahagian dalam bentuk grid. Kawasan pengiraan adalah kotak sederhana yang terdapat di 4 sudut kedua -dua reticles, ditambah dengan dataran tengah.

Perhimpunan kamera harus dilakukan dengan sangat berhati -hati, kerana terperinci mempengaruhi kiraan sel. Terdapat banyak kesilapan yang boleh dibuat, tetapi jika mana -mana daripada mereka berlaku, kamera mesti disassembled, bersih dan dikumpulkan semula. Antara kesilapan utama, perkara berikut boleh disebutkan:

Rebosar kamera atau membuat pengisian yang tidak mencukupi, biarkan kamera kering, cuba keluarkan cecair berlebihan dengan kasa, condongkan kamera dengan mengangkutnya, mengisi kamera kotor atau basah, tidak mencampurkan pencairan atau sampel dengan baik, antara lain. Semua kesilapan ini akan menghasilkan nilai yang tidak nyata.

[TOC]

Sejarah

Kamera Neubauer adalah instrumen ketepatan, dan dalam proses pembuatan ia melalui kawalan kualiti yang ketat. Ia dibuat untuk zarah atau bentuk yang tepat oleh mm³, seperti sel dalam pelbagai cecair. Grafiknya yang halus diukir dengan pensil berlian.

Ciri -ciri ruang Neubauer

Kamera lengkap adalah saiz slaid biasa supaya ia boleh diletakkan di atas plat mikroskop.

Kamera terdiri daripada tiga permukaan segi empat tepat tengah (A, B, C). Di zon "B" z zon r atau kiraan terletak, juga dipanggil retikulum. Satu di setiap sisi kamera, dipisahkan oleh zon "d".

Skim grafik kamera Neubauer. Sumber: Panduan Hematologi Praktikal. Sekolah Bioanalisis Universiti Carabobo, Venezuela.

Setiap retikulum adalah kawasan yang digilap yang mengandungi kawasan sumbangan terukir. Ia terdiri daripada persegi dengan kawasan seluas 9 mm² Dan ia dibahagikan secara dalaman kepada 9 gambar dengan 1 mm² permukaan. Empat sudut dibahagikan kepada 16 grid yang lebih kecil (0.0625 mm² Permukaan).

Grid ini dibentuk oleh satu siri garis milimeter yang bersilang antara satu sama lain, membentuk grid grafik yang sempurna dan dibatasi kepada langkah -langkah yang ditentukan. Garis -garis ini telah direkodkan dengan hujung berlian.

Retikulum Neubauer yang lebih baik. Sumber: Panduan Hematologi Praktikal Sekolah Bioanalisis Universiti Carabobo, Venezuela.

Keempat -empat pihak sesuai dengan kawasan pengiraan. Di sisi atau sudut ini adalah di mana akaun kebanyakan sel (sel darah merah dan leukosit) dilakukan, sementara platelet dikira di kawasan tengah.

Boleh melayani anda: Malachite Green: Ciri, Penyediaan, Aplikasi, Ketoksikan

Zon Pusat mempunyai lebih banyak bahagian, ia terdiri daripada persegi 1 mm² dibahagikan kepada 25 lukisan yang mempunyai kawasan 0.04 mm² masing -masing. Ini seterusnya dibahagikan kepada 16 grid dengan kawasan 0.0025 mm².

Penerangan mengenai retikulum Neubauer yang lebih baik. a) persegi sudut, b) persegi pusat, c) persegi sederhana di dataran tengah. Sumber: Panduan Hematologi Praktikal Sekolah Bioanalisis Universiti Carabobo, Venezuela.

Kawasan "A" dan "C" berfungsi sebagai sokongan untuk meletakkan objek khas meliputi yang dipanggil lamella hematimetrik atau penutup hematimeter.

Ketinggian antara lamella dan permukaan pengiraan ialah 0.1 mm. Langkah permukaan kotak pengiraan, serta ketinggian kamera dan pencairan sampel, adalah data yang diperlukan untuk melakukan pengiraan akhir.

Aplikasi

Ia digunakan untuk kiraan sel. Terutama ia sangat membantu di kawasan hematologi, kerana ia membolehkan siri sel 3 darah dibuat; iaitu, sel darah merah, sel darah putih dan platelet.

Walau bagaimanapun, ia boleh digunakan di kawasan lain, contohnya untuk mengira sperma, spora, bakteria atau elemen penting lain bergantung kepada jenis sampel.

Bagaimana digunakan?

Penyediaan sampel

Untuk melaksanakan kiraan sel, biasanya ia bermula dari pencairan sebelumnya. Contoh: Untuk mengira sel darah putih, pencairan 1:20 disediakan dengan cecair Turk. Pencairan dicampur dengan baik sebelum memuatkan pipet dan menubuhkan kamera Neubauer.

Ada keadaan ketika pencairan 1:20 tidak cukup untuk dikira. Contohnya, pada pesakit yang menderita jenis leukemia kronik. Dalam kes ini, pelarut yang lebih tinggi harus dibuat sebagai 1: 100.

Jika sebaliknya akaunnya sangat rendah, seperti leukopenia yang teruk, pelarut yang lebih kecil boleh dibuat untuk menumpukan sampel. Contoh: Anda boleh melakukan pencairan 1:10.

Perubahan yang dibuat mempengaruhi pengiraan.

Perhimpunan Dewan Neubauer

Ruang Neubauer dipasang dengan meletakkan lamella hematimetrik di zon tengah. Kedua -duanya mesti sangat bersih dan kering. Untuk meletakkan lamella, ia diambil oleh tepi dan jatuh perlahan di kamera.

Ini dipenuhi dengan meletakkan hujung pipet automatik atau pipet Thoma pada sudut 35 ° di pinggir kawasan kargo. Cecair dibebaskan dengan lembut dan zon pemuatan dipenuhi dengan kapilari. Ini dilakukan di kedua -dua belah pihak untuk memuatkan dua reticles.

Tidak ada reticles yang tidak boleh dibebankan dan cecair tidak boleh dinafikan. Beban mesti tepat. Penting bahawa pengisian dilakukan secara homogen, iaitu tidak ada gelembung.

Sebaik sahaja kamera ditetapkan berehat selama 2 minit untuk sel -sel untuk mendakan di latar belakang dan visualisasi dan pengiraannya lebih mudah.

Selepas waktu rehat dipasang pada cahaya mikroskop cahaya untuk pemerhatian. Mula -mula ia memberi tumpuan kepada objektif 10x dan jika perlu maka ia diluluskan kepada 40x.

Boleh melayani anda: Anion jurang

Untuk meningkatkan visualisasi anda, cahaya mikroskop dikurangkan. Untuk melakukan ini, kondensor diturunkan dan diafragma menutup sedikit.

Akaun

Untuk akaun sel darah putih atau leukosit, seluruh permukaan empat dataran sederhana sudut dan dataran pusat setiap retikulum mesti dikira.

Kiraan bermula di kuadrat sudut kiri atas. Ia bermula dari dataran pertama barisan depan, iaitu, dari kiri ke kanan untuk mencapai hujung yang bertentangan.

Di sana diturunkan dan rupa dikembalikan dari kanan ke kiri sehingga sampai ke ujung yang lain dan sebagainya pada sel -sel dalam setiap grid dalam bentuk zigzag. 16 grid setiap dataran sederhana dikira.

Untuk mengelakkan mengira sel dua kali terdapat peraturan di sel yang terletak di garis bersempadan setiap grid. Sel -sel yang terletak di sebelah kiri dan atas dihitung dan yang terletak di sebelah kanan dan garis bawah tidak diendahkan.

Kaunter sel manual harus disediakan supaya pengendali menindas kunci peranti seberapa banyak yang memerhatikan sel. Dengan menggunakan akauntan, pengendali boleh dikira tanpa perlu melihat dari medan mikroskopik. Pada akhir akaun anda akan melihat jumlah sel yang dikira.

Pengiraan

Untuk pengiraan anda boleh meneruskan dengan beberapa cara. Anda boleh mengira satu retikulum atau kedua -duanya boleh dikira dan purata kedua -duanya. Dalam kedua -dua situasi ini sel -sel yang dikira mesti didarabkan dengan faktor, yang dalam kes ini akan menjadi 40. Oleh itu, jumlah kiraan per mm diperoleh³.

Tetapi jika kedua -dua reticles dikira dan tidak ada purata, ia mesti didarab dengan faktor yang berbeza, dalam kes ini sebanyak 20.

-Faktor pendaraban

Seterusnya, faktor pendaraban dikira.

Untuk pengiraan beberapa data diambil kira, termasuk tajuk pencairan, ketinggian ruang dan permukaan memberitahu.

Pencairan

Pencairan yang digunakan dengan cara standard adalah 1:20 untuk kiraan leukosit.

Ketinggian ruang

Ketinggian antara kamera dan lamina hematimetrik ialah 0.1 mm.

Permukaan yang dikira

Sekiranya 5 kotak 1mm dikira² permukaan, ini bermaksud bahawa jumlah akaun kiraan adalah 5 mm². Data ini mesti didarabkan dengan ketinggian kamera untuk mendapatkan jumlah jumlah yang diberitahu. Iaitu 5 mm² x 0.1 mm = 0.5 mm³.

Formula dan pengiraan

Dengan data yang dikatakan, dikatakan:

Sekiranya pada 0.5 mm³ -Terdapat ° sel yang dikira

Dalam 1 mm³ --Akan ada - bilangan sel x

Sel x n ° = (n ° sel caled x 1) /0.5 mm³

Tetapi pencairan juga harus diambil kira. Oleh itu, formula adalah seperti berikut:

(N ° sel yang dikira x 1) x 20/0.5 mm³

Akhirnya, untuk meringkaskan anda boleh mengalikan bilangan sel yang dikira oleh 40. Oleh itu, nilai leukosit per mm diperoleh³.

Boleh melayani anda: osmosis: proses, jenis, perbezaan dengan penyebaran dan contoh

Sekiranya kedua -dua reticles dikira, data data diubah bahawa dalam kes ini akan menjadi 10 dataran, iaitu 10 mm². Dan jumlah keseluruhan memberitahu 1 mm3. Formula akan kekal:

(N ° sel dikira x 1) x 20/1 mm³

Oleh itu, dalam hal ini faktor pendaraban akan menjadi 20.

Kesilapan

-Sekiranya apabila memuatkan kamera ia melebihi atau melebihi cecair, ketinggian kamera akan berbeza -beza. Ini mengakibatkan pengiraan sebenar. Sekiranya anda cuba mengeluarkan kelebihan dengan kain kasa atau kapas, ini mewakili kesilapan carafal. Tindakan ini akan menjadikan sel -sel menumpukan perhatian, meningkatkan kiraan.

-Sekiranya ia dipertanggungjawabkan dengan buruk, kiraan itu akan di bawah sebenar.

-Sekiranya kamera dipasang dan dibebaskan, tidak lagi mungkin untuk membuat kiraan kerana ia akan menyiarkan hasil yang salah.

-Jika sebelum memuatkan kamera, pencairan sampel tidak dicampur dengan baik, terdapat risiko ralat membaca, kerana sel -sel tidak akan diedarkan secara homogen. Oleh itu, terdapat kepekatan sel yang kurang atau lebih besar, bergantung kepada sama ada sampel diambil dari permukaan cecair atau bahagian bawah tiub masing -masing.  

-Kehadiran gelembung mengurangkan jumlah cecair yang mesti memasuki reticle, mengganggu visualisasi dan pengedaran sel yang betul. Semua ini memberi kesan kepada hasilnya.

-Semasa kiraan, jangan angkat mikroskop sehingga setiap persegi besar selesai untuk mengelakkan hilang.

-Sebab kesilapan adalah untuk menundukkan kamera setelah dipasang. Oleh itu, anda perlu memuat naik plat mikroskop dengan teliti.

Cadangan

Sekiranya atas sebab tertentu anda mengesan kelainan dalam pemfailan kamera, adalah yang paling disyorkan agar anda membongkar penyediaan itu, bersihkan kamera dan memasang semula dari awal.

Berhati -hati semasa membersihkan kamera untuk mengelakkan gores reticles. Sebaliknya, perlu diingat bahawa lamel hematimetrik adalah halus dan rapuh. Manipulasi yang tidak mencukupi dapat memecahkannya.

Sebelum memulakan pengiraan, pastikan sel -sel telah diedarkan dengan baik. Pengagihan sel yang tidak sama rata berlaku oleh campuran sampel atau pencairan yang lemah. Sekiranya ini berlaku, perhimpunan mesti diulang.

Cara mengetahui jika sel -sel diedarkan dengan baik membandingkan akaun setiap persegi besar, bilangan sel yang dikira oleh setiap persegi tidak boleh dibesar -besarkan berbeza antara satu dan yang lain.

-Sekiranya sel darah putih lebih daripada 50.000 mm³ Adalah dinasihatkan untuk mengulangi akaun, membuat pencairan yang lebih besar.

-Jika ia mengubah pencairan, faktor pendaraban mesti dikira lagi, kerana ini mempengaruhi formula.

Rujukan

1. Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. Perbandingan kepekatan sperma menggunakan kamera Makler dan kamera Neubauer. Urol Esp 2008; 32 (4): 443-445. Terdapat di: Scielo.
2. Kamera Neubauer. (2018, 27 Mac). Wikipedia, ensiklopedia percuma. Tarikh Perundingan: 04:10, 23 Jun 2019 dari ES.Wikipedia.org
3. Meneses A, Rojas L, Sifontes S. Penggunaan kaedah pengiraan alternatif di ruang Neubauer untuk menentukan kepekatan vaginalis trichomonas. REV. Cub Med Trop 2001; 53 (3): 180-8. Terdapat di: ResearchGate.jaring
4. Gómez-Pérez Roald e. Analisis Expermogram. REV. Venez. Endocrinol. Metab.  2007; 5 (2): 19-20. Terdapat di: ve.Scielo
5. Panduan Hematologi Praktikal Sekolah Bioanalisis Universiti Carabobo. Venezuela.1998