Separuh asas, penyediaan, kegunaan dan batasan

Dia Separuh atau penapaian glukosa adalah agar semi-pepejal yang direka khas untuk mengkaji metabolisme karbohidrat oksidatif dan fermentatif dalam kumpulan mikroorganisma yang penting yang berbeza daripada Enterobacteria, yang dipanggil Bacilli Negatif bukan Enteréric.

Ia dicipta oleh Hugh dan Leifson; Penyelidik ini menyedari bahawa media konvensional untuk kajian pengeluaran asid dari karbohidrat tidak sesuai untuk kumpulan bakteria tertentu ini.

Ke. Tengah komersial basal. B. Tiub dengan separuh daripada ditaburkan. Sumber: Foto A dan B yang diambil oleh pengarang MSC. Marielsa Gil.

Ini kerana bacilli negatif bukan enteric biasanya menghasilkan jumlah asid yang rendah, tidak seperti Enterobacteria.

Dalam pengertian ini, medium mempunyai ciri -ciri khas yang dapat mengesan sejumlah kecil asid yang terbentuk, baik oleh oksidatif dan penapaian. Perbezaan ini berkaitan dengan jumlah peptones, karbohidrat dan agar.

Medium ini mengandungi kurang peptonas dan kepekatan karbohidrat yang lebih besar, dengan cara ini produk -produk yang menghiasi medium dikurangkan akibat metabolisme protein dan pengeluaran asid meningkat dengan penggunaan karbohidrat.

Sebaliknya, penurunan jumlah agar nikmat penyebaran asid yang dihasilkan oleh seluruh medium, selain memerhatikan motilitas.

Medium terdiri daripada peptone, natrium klorida, bromotimol biru, dipotassium fosfat, agar dan karbohidrat. Karbohidrat yang paling biasa adalah glukosa tetapi yang lain boleh digunakan mengikut yang anda ingin belajar, seperti laktosa, maltosa, xylose, antara lain.

[TOC]

Asas

Seperti mana -mana cara budaya, alam sekitar mesti mengandungi bahan pemakanan yang menjamin pertumbuhan bakteria; Bahan -bahan ini adalah peptones.

Bagi pihaknya, karbohidrat menyediakan tenaga dan pada masa yang sama berfungsi untuk mengkaji tingkah laku mikroorganisma terhadapnya, iaitu, ia membolehkan untuk mengklasifikasikan bakteria sebagai organisma oksidatif, penapaian atau bukan akas.

Medium mengandungi nisbah peptone/karbohidrat 1: 5 tidak seperti media konvensional 2: 1. Ini menjamin bahawa jumlah amina alkali yang terbentuk daripada kemerosotan peptones tidak meneutralkan pembentukan asid lemah.

Boleh melayani anda: sphingomyeline: apakah, struktur, fungsi, sintesis

Sebaliknya, medium mengandungi natrium klorida dan dipotassium fosfat. Sebatian ini menstabilkan osmotik di tengah dan mengawal pH masing -masing. Bromootimol Blue adalah penunjuk pH, yang menjadikan warna hijau kuning dengan pengeluaran asid.

Sesetengah mikroorganisma boleh menggunakan karbohidrat dengan oksidatif atau melalui laluan fermentatif, sementara yang lain tidak mengambil jalan.

Ini bergantung pada ciri setiap mikroorganisma. Sebagai contoh, beberapa mikroorganisma aerobik yang ketat dapat mengoksida karbohidrat tertentu, dan anaerob pilihan dapat mengoksida dan menanam bergantung kepada persekitaran yang mengelilingi mereka, sementara yang lain tidak mengoksida atau menanam karbohidrat (askarolitik).

Akhirnya, terdapat pengubahsuaian medium yang disyorkan oleh CDC yang mengandungi asas khas dengan fenol merah sebagai penunjuk.

Proses pengoksidaan

Proses pengoksidaan glukosa tidak memerlukan fosforilasi glukosa, seperti yang berlaku dalam proses penapaian. Dalam kes ini kumpulan aldehid dioksidakan ke kumpulan karboksil, mengakibatkan asid glukonik. Ini seterusnya dioksidakan ke 2-zo-glyconic.

Molekul asid piruvik yang terakhir atau dua terkumpul atau merendahkan. Sistem ini memerlukan kehadiran oksigen atau sebatian bukan organik sebagai penerima elektron akhir.

Pengeluaran asid dengan laluan ini lebih lemah daripada yang diperolehi oleh laluan fermentatif.

Proses penapaian

Untuk membuat penapaian glukosa oleh mana-mana jalan yang ada, ia mesti terlebih dahulu fosforilasi, menjadi glukosa-6-fosfat.

Fermentasi glukosa boleh mengambil beberapa jalan, yang utama adalah jalan embden-meyerhof-pair dari degradasi pentose.

Laluan yang dipilih bergantung kepada sistem enzimatik yang mempunyai mikroorganisma.

Melalui de embden-meyerhof- Parna

Dalam penapaian glukosa oleh embden-meyhof-parna. Dari sana bahan perantara berasal, iaitu asid pyruvic.

Boleh melayani anda: photoperiod

Dari sana, pelbagai jenis asid campuran akan dibentuk yang boleh berbeza dari satu spesies ke yang lain.

Sistem ini berlaku tanpa ketiadaan oksigen dan memerlukan sebatian organik sebagai penerima elektron akhir.

Laluan Encoudoroff

Dalam penapaian glukosa oleh laluan intner-doucoroff, glukosa 6-fosfat pergi ke glukone-ᵼ-lactone-6-fosfat dan dari sana ia dioksidakan ke 6-phosphogluvate dan 2-zo-3-dedexi-6 phosphogluconate, akhirnya membentuk asid pyruvic. Ini melalui keperluan oksigen sehingga terdapat glikolisis.

Laluan untuk kemerosotan pentos atau warburg-disens monophosphate monophosphate melalui

Laluan ini adalah hibrid dari 2 sebelumnya. Ia bermula sama dengan laluan entner-doudoroff, tetapi seterusnya glyceraldehyde-3-fosfat dibentuk sebagai prekursor asid pyruvic, seperti halnya di jalan embden-meyerhof-parna.

Penyediaan

Timbang:

2 gr peptone

5 gr natrium klorida

10 gr dari D-glukosa (atau karbohidrat yang akan disediakan)

0.03 gr bromotimol biru

3 gr dari agar

0.30 gr fosfat dipotasic

1 liter air suling.

Campurkan semua sebatian kecuali karbohidrat dan larut dalam 1 liter air suling. Panaskan dan kacau sehingga melarutkan secara keseluruhan.

Apabila penyejukan pada 50 ° C, 100 ml glukosa ditambah kepada 10% (ditapis).

Aseptik mengedarkan 5 ml medium dalam tiub ujian dengan tudung kapas dan autoklavate pada 121 ° C, 15 paun tekanan selama 15 minit.

Biarkan dalam kedudukan menegak.

PH sederhana mestilah 7, 1. Warna medium yang disediakan berwarna hijau.

Simpan dalam peti sejuk.

Aplikasi

Medium adalah cara khas untuk menentukan tingkah laku metabolik mikroorganisma terhadap karbohidrat. Terutamanya bagi mereka yang membentuk asid dengan cara yang kekurangan, lemah atau tidak sah.

Disemai

Untuk setiap mikroorganisma, 2 tiub diperlukan, kedua -duanya mesti disuntik dengan mikroorganisma untuk belajar. Koloni diambil dengan pemegang lurus dan tusukan dibuat di tengah tiub tanpa mencapai bahagian bawah; Anda boleh membuat beberapa punctures, selagi anda tidak berminat untuk memerhatikan motilitas.

Boleh melayani anda: Alanine: ciri, struktur, fungsi, biosintesis

Ke salah satu tiub ditambah lapisan vaseline cecair steril atau parafin cair steril (kira -kira 1 hingga 2 ml) dan dilabelkan dengan huruf "F". Tiub lain ditinggalkan asal dan dilabelkan dengan huruf "O". Kedua -dua tiub diinkubasi pada suhu 35 ° C dan diperhatikan setiap hari sehingga 3 hingga 4 hari.

Tafsiran

Metabolisme dan pengeluaran gas

Jadual: Klasifikasi mikroorganisma mengikut tingkah laku mereka dalam tiub terbuka (oksidatif) dan tertutup (fermentatif) (fermentatif)

Sumber: Dibuat oleh pengarang MSC. Marielsa Gil

Gas diperhatikan dengan pembentukan gelembung atau anjakan agar.

Harus diingat bahawa organisma yang hanya mengoksidakan glukosa tetapi tidak fermente, tidak dapat menanam karbohidrat lain, dalam apa jua keadaan ia hanya akan mengoksidakannya. Oleh itu, dalam keadaan ini tiub tertutup akan ditinggalkan untuk kajian karbohidrat lain.

Motilitas

Di samping itu, di tengah -tengah motilitas dapat dilihat.

Motilitas positif: Pertumbuhan yang tidak terhad kepada zon inokulasi. Terdapat pertumbuhan ke arah sisi tiub.

Motilitas negatif: Pertumbuhan hanya dalam inokulum awal.

QA

Sebagai kawalan kualiti, anda boleh menggunakan strain berikut: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa dan Moraxella sp. Keputusan yang diharapkan adalah:

1. coli: Fermenter Glukosa (kedua -dua tiub kuning dan gas).
2. Aeruginosa: Oxidader glukosa (tiub terbuka kuning dan meterai hijau atau biru).
3. Moraxella sp: Bukan -removal (tiub terbuka hijau atau biru, tiub pengedap hijau).

Batasan

-Beberapa mikroorganisma tidak dapat tumbuh di persekitaran. Dalam kes ini ujian diulang tetapi kepada serum 2% sederhana atau 0.1% ekstrak yis.

-Reaksi pengoksidaan sering diperhatikan dekat dengan permukaan dan selebihnya medium boleh hijau, dengan cara yang sama ia diambil sebagai positif.

Rujukan

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologi. Edisi ke -5. Pan -American Editorial S.Ke. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Pan -American Editorial S.Ke. Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Ujian biokimia untuk mengenal pasti bakteria kepentingan klinikal. Edisi ke -3. Pan -American Editorial. Buenos Aires. Argentina.
4. Makmal Francisco Soria Melguizo. 2009. Medium glukosa. Terdapat di: http: // f-soria.adalah
5. Makmal Conda Pronadisa. Tengah glukosa. Terdapat di: Condalab.com
6. Makmal BD. 2007. Medium basal. Terdapat di: BD.com