Asas ujian, prosedur dan kegunaan koagulase

The Ujian Coagulase Ia adalah teknik makmal yang digunakan untuk menyerlahkan kehadiran enzim koagulase. Enzim ini mempunyai milik plasma koagular. Loeb pada tahun 1903 adalah yang pertama menggambarkan enzim ini.

Ujian ini dilakukan untuk kelapa positif gram, catalase positif, yang membolehkan strain Staphylococcus aureus dari seluruh Staphylococci, kerana dia adalah satu -satunya mikroorganisma kepentingan klinikal yang menghasilkannya.

Kedua -dua imej mendedahkan ujian koagulase positif. Sumber: Imej Kiri: Philippinjl [CC BY-SA 3.0 (http: // creativeCommons.Org/lesen/by-sa/3.0/]]. Imej yang betul: Foto yang diambil oleh pengarang MSC. Marielsa Gil.

Dalam pengertian ini, ahli keluarga Staphylococaee yang memberikan ujian negatif ini sering dipanggil Staphylococcus coagulase negatif.

Terdapat beberapa strain yang berbeza dari S. Aureus  yang boleh menghasilkan koagulase, seperti Staphylococcus schleiferi spp coagulans, s. Hyicus, s. Intermedius dan s. Delphini.

Walau bagaimanapun, tiga yang pertama adalah kepentingan klinikal di peringkat veterinar dan jarang dijumpai sebagai agen kausal jangkitan manusia, sementara S. Delphini Hanya terdapat di persekitaran laut.

Di samping itu, mereka berbeza dengan mudah kerana S. Hyicus dan S. Intermedius Mereka tidak menuai mannitol dan S. Schleiferi spp coagulans tidak menanam maltose, atau trehalosa, sementara S. Aureus Ya fermentasi karbohidrat ini.

Kehadiran enzim koagulase telah dikaitkan dengan ketegangan strain.  Walau bagaimanapun, teori ini telah jatuh, memandangkan fakta bahawa spesies koagulase negatif yang lain diperhatikan mampu menghasilkan jangkitan penting.

[TOC]

Asas

Staphylococcus aureus Ia menghasilkan dua jenis koagulase, yang tetap dikaitkan dengan dinding sel, juga dipanggil faktor agglutination atau faktor reaktif koagulase (FRC), dan ekstraselular yang dikeluarkan dalam tanaman cecair. Itulah sebabnya mereka dipanggil United Coagulase dan Free Coagulase masing -masing.

Enzim koagulase berhutang namanya kepada tindakan yang dihasilkannya. Ini mempunyai keupayaan untuk mengubah fibrinogen menjadi fibrin, mewujudkan bekuan yang jelas apabila ia berada dalam plasma, iaitu, enzim ini menyerupai aktiviti thrombin air terjun pembekuan.

Sebenarnya, salah satu teori yang paling diterima ialah United Coagulase bertindak balas dengan koagulase percuma untuk mengaktifkan faktor pembekuan. Pengaktifan ini menghasilkan bahan yang sama seperti bagaimana prothrombin, mewujudkan sebatian dengan fungsi thrombin.

Boleh melayani anda: Profil tiroid: fungsi hormon, kepentingan, kuantifikasi

Perbezaan dengan air terjun pembekuan biasa ialah tindak balas ini tidak memerlukan kehadiran kalsium dan tidak terjejas oleh heparin.

Untuk melaksanakan ujian koagulase, sudah cukup untuk menghadapi tanaman Staphylococcus segar dengan plasma arnab yang lebih baik dan dengan itu memerhatikan pembentukan atau bukan gumpalan.

Terdapat teknik khusus untuk mengesan koagulase bersatu dan koagulase bersatu dan percuma pada masa yang sama.

Beberapa strain S. Aureus Mereka memberikan hasil positif yang lebih cepat daripada yang lain. Kelajuan pembentukan bekuan berkadar terus dengan kepekatan koagulase sekarang.

Teknik ujian koagulase dalam slaid mengesan koagula bersatu.

Prosedur

-Ujian Coagulase dalam Pemegang

Bahan

-Lembaran slaid bersih

-Plasma arnab lebih baik, plasma manusia atau kuda juga boleh digunakan. Plasma boleh diperolehi secara komersial dan direkulasi semula secara komersial apabila ia akan digunakan atau boleh digunakan segar (baru -baru ini diambil). Alternatif lain yang berdaya maju ialah penggunaan fibrinogen.

-Penyelesaian garam (0.85%) steril (SSF).

Mendapatkan plasma segar

Ekstrak darah vena manusia atau haiwan. Mana -mana antikoagulan berikut boleh digunakan: EDTA, kalsium oxalate, heparin atau natrium sitrat. Campurkan dengan baik dan centrifuge. Aseptik mengeluarkan supernatan (plasma), tanpa sel darah merah dan deposit dalam tiub steril.

Pemisahan plasma. Sumber: Foto yang diambil oleh pengarang: MSC. Marielsa Gil.

Plasma lyophilized

Rekonstitusi seperti yang ditentukan oleh botol kit komersial.

Fibrinogen segar

Dari plasma citrated, campuran plasma dengan larutan tepu natrium klorida. Biarkan.

Buang supernatant, rekonstitusi mendakan sehingga 5 kali jumlahnya dengan air sulingan steril. Tambah 5 unit heparin untuk setiap ml fibrinogen. Simpan.

Teknik

Dalam slaid setetes larutan garam dan setitik plasma secara berasingan diletakkan. Ambil dengan mengendalikan platinum 1 atau 2 koloni tulen mikroorganisma untuk mencuba.

Campurkan beban bakteria dalam penurunan plasma dan ulangi operasi dalam penurunan SSF. Perhatikan hasilnya dengan segera. Hasil positif adalah di mana pembentukan makroskopik agglutinated (precipitate putih) diperhatikan selepas satu minit di bahagian drop dengan plasma.

Ia boleh melayani anda: Ecophysiology: Kajian dan aplikasi dalam haiwan dan sayur -sayuran

Penurunan SSF berfungsi sebagai kawalan negatif. Sekiranya aglutinasi dengan SSF diperhatikan, ini bermakna bahawa mikroorganisma adalah aglutin diri, dapat memberikan hasil positif palsu. Dalam kes ini, ia mesti disokong dengan ujian tiub.

Ia juga disyorkan untuk melancarkan kawalan positif dengan ketegangan yang diketahui S. Aureus.   

Tafsiran

Agglutination dalam 5 hingga 20 SEG (ujian positif yang kuat).

Agglutinasi berubah antara 20 saat dan satu minit (ujian tertunda positif).

Tahap aglutinasi tertentu selepas satu minit (ujian ragu). Disyorkan untuk mengulangi ujian atau mengesahkan dengan kaedah tiub.

Tidak ada agglutination (ujian negatif).

Hasil dengan SSF. Ia mesti selalu memberi negatif, jika hasil ujian secara automatik.

-Ujian tiub coagulase

Bahan

-Tiub ujian steril

-Plasma

-Maria Bath pada suhu 37 ° C.

Teknik

Ukur dengan pipet 0.5 ml plasma steril dan letakkan dalam tiub ujian 12 x 75. Muatkan pemegang platinum dengan 2 hingga 4 koloni tulen untuk belajar dari tanaman pepejal dari 18 hingga 24 jam dan berbeza dalam plasma dengan berhati -hati, campurkan dan inkubasi pada suhu 37 ° C selama 4 jam.

Periksa tiub pada jam pertama tanpa menggegarkannya, hanya condong dengan lembut. Sekiranya tiada pembekuan masih diperhatikan, anda boleh terus memerhatikan setiap 30 minit sehingga menyelesaikan 4 jam. Sekiranya selepas 4 jam ia masih negatif, ia boleh ditinggalkan sehingga 24 jam tetapi pada suhu bilik. Perhatikan dan laporkan hasilnya.

Berdasarkan pengalaman, sesetengah ahli mikrobiologi mengesyorkan menggunakan 500 μl penggantungan bakteria dari tanaman 18 -hour dalam medium cecair untuk melaksanakan ujian.

Rupa -rupanya ia menawarkan hasil yang lebih cepat dan lebih dipercayai daripada ketika koloni dari media pepejal diemulsi, terutama jika plasma manusia diperoleh dari bank darah telah digunakan.

Penggunaan strain dari sup membantu mencairkan kemungkinan kemungkinan antibodi anti-staphylococcal manusia dalam plasma yang dapat menghalang tindakan koagulase.

Tafsiran

Sekiranya bekuan yang meliputi semua cecair (pembekuan lengkap) atau bekuan yang tiada apa -apa dalam cecair yang tinggal (pembekuan separa) harus dianggap sebagai ujian positif.

Boleh melayani anda: cabang biologi dan apa yang mereka pelajari

Sekiranya ia tidak terbentuk, iaitu, penggantungannya homogen, ujiannya negatif.

-Ujian koagulase menggunakan fibrinogen

Fibrinogen digunakan seperti plasma dan berfungsi untuk ujian pemegang dan ujian tiub. Teruskan seperti yang diterangkan untuk plasma dan mentafsirkan dengan cara yang sama.

Gunakan

Ia digunakan untuk membezakan Staphylococcus aureus staphylococci coagulase negatif.

QA

Mempunyai tanaman segar dari ketegangan S. Aureus Untuk digunakan sebagai kawalan positif. Anda juga boleh mempunyai ketegangan S. Epidermidis sebagai kawalan negatif.

Batasan

-Ujian positif tidak boleh ditinggalkan dalam pengeraman selama 24 jam, seperti S. Aureus menghasilkan fibrinolisin yang membubarkan bekuan.

-Untuk ujian yang boleh dipercayai, plasma segar atau segar yang baru diperbaharui harus digunakan, dan juga penting untuk menggunakan tanaman bakteria segar (18 hingga 24 jam). Ini mengelakkan negatif palsu.

-Ujian mesti dijalankan bersama dengan kawalan negatif dan yang positif.

-Beberapa media pepejal boleh mengganggu ujian koagulase. Ia tidak disyorkan.

-Sekiranya plasma citrated digunakan, disyorkan untuk meletakkan 5 unit heparin per ml plasma untuk mengelakkan positif palsu. Ini kerana beberapa mikroorganisma yang berbeza dari S. Aureus Mereka boleh mengurai sitrat dan membuat bekuan plasma. Dalam kes ini, disarankan untuk melakukan gram dan ujian catalase.

-Penting, dalam ujian tiub, memantau tindak balas setiap 30 minit, kerana terdapat strain S. Aureus yang menghasilkan kepekatan fibrinolisin yang tinggi dan akan mencairkan bekuan yang baru terbentuk. Elakkan negatif palsu.

-Apabila memantau ujian, tiub mesti dielakkan dengan tiba -tiba, ini boleh memusnahkan permulaan pembentukan bekuan yang tidak akan dipulihkan, menyebabkan negatif palsu.

Rujukan

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologi. Edisi ke -5. Pan -American Editorial S.Ke. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Pan -American Editorial S.Ke. Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Ujian biokimia untuk mengenal pasti bakteria kepentingan klinikal. Edisi ke -3. Pan -American Editorial. Buenos Aires. Argentina.
4. Makmal Pro-Lab. Arnab coagulate plasma. Terdapat di: pro-lab.com
5. "Coagulase." Wikipedia, ensiklopedia percuma. Feb 2019, 04:23 UTC. ABR 2019, 15:50 Wikipedia.org.