Ciri-ciri pewarnaan hematoxylin-eosin, kegunaan, teknik

The Pewarnaan Hematoxylin - Eosin Ia adalah teknik pewarna yang menggunakan gabungan pewarna hematoksylin dan eosin. Sepasang pewarna ini membuat duo yang sempurna, kerana hematoxylin bertindak sebagai pewarna asas dan eosin adalah pewarna berasid.

Penetapan pewarna asas atau berasid tidak merujuk kepada pH yang mereka perolehi dalam penyelesaian, tetapi sebaliknya bercakap tentang perkadaran yang berlaku dari segi beban anionik atau kationik yang mereka miliki atau di lokasi kromofor.

Epitelium silinder berwarna dengan hematoxylin - eosin (HE) Sumber: Todd Straus dan Vladimir Osipov [CC oleh 3.0 (https: // creativeCommons.Org/lesen/oleh/3.0)]

Dalam pengertian ini, hematoxylin dianggap sebagai pewarna asas (kationik) dan oleh itu mempunyai pertalian untuk struktur asid, seperti teras sel. Walaupun eosin menjadi pewarna berasid (anionik) mempunyai pertalian untuk struktur alkali atau asas, seperti sitoplasma sel.

Atas sebab ini, gabungan pewarna ini digunakan secara meluas untuk noda. Nukleus dicelupkan biru gelap atau ungu dan sitoplasma merah jambu.

Pewarnaan hematoxylin-eosin adalah salah satu teknik pewarnaan yang paling banyak digunakan dalam bidang histologi dan sitologi, kerana pengendaliannya yang mudah dan kos rendah. Ia digunakan untuk visualisasi sel, gentian saraf tebal dan kehadiran mikroorganisma tisu tertentu, seperti: parasit, kulat dan bakteria, antara lain.

[TOC]

Ciri -ciri

Hematoxylin

Hematoxylin adalah pewarna neutral. Walau bagaimanapun, komponen yang menyediakan warna (kromofor) terletak di pusat kationik atau asas molekul. Oleh itu pertaliannya untuk struktur berasid. Formula kimianya adalah c₁₆H₁₄Sama ada₆ dan nama saintifiknya 7.11b-dihydroindeno [2,1-c] Kromen-3, 4.6a, 9,10 (6H) -Pentol.

Pastikan pusat sel terutamanya, kerana ini sangat kaya dengan asid nukleik. Anda juga boleh mewarnai kemasukan sitoplasma dari asal virus.

Supaya pewarna hematoxylin mesti berada dalam keadaan teroksida dan dilampirkan pada logam. Yang terakhir akan berfungsi untuk melihat kain, iaitu, ia akan bertindak sebagai mordant.

Apabila hematoxylin dioksidakan, hematein dipanggil. Pengoksidaan dicapai dengan pendedahan kepada oksigen (penuaan) reagen atau bahan yang membantu pengoksidaannya (pengoksidaan kimia).

Ia dapat melayani anda: Kaedah pemisahan campuran heterogen

Eosina

Eosina adalah pewarna merah atau merah jambu. Tidak larut dalam air walaupun terdapat versi hidrosuble. Umumnya, eosina menyediakan alkohol yang larut (etanol pada 95).

Sitoplasma noda, serat otot, organel sitoplasma dan kolagen, tetapi jangan pewarna pusat sel. Ini kerana ia dikenakan negatif, oleh itu, ia mempunyai pertalian untuk struktur yang dimuatkan secara positif.

Terdapat dua jenis Eosina yang "Y" dan "B". Eosina "Y" dikenali sebagai Eosina Kuning. Nama saintifiknya ialah tetrabrome fl uorescein dan formula kimianya adalah c_{dua puluh}H₈Br₄Sama ada₅.

Sebaliknya, eosin "b" kadang -kadang dipanggil erythrosine kebiruan b. Nama saintifiknya adalah dibromodinitro fl uorescein dan formula adalah c_{dua puluh}H₈Br₂N₂Sama ada₉. Kedua -duanya sangat serupa dan perbezaan menggunakan satu atau yang lain tidak begitu ketara. Walau bagaimanapun, yang paling popular ialah Eosina "Y".

Eosin mempunyai harta membezakan antara sel hidup dan mati, kerana ia hanya dapat menyeberang membran untuk mewarnai sitoplasma ketika sel -sel mati, meninggalkan sitoplasma sel tidak berwarna jika masih hidup.

Aplikasi

Pewarnaan serat saraf

Dengan hematoxylin-eosin, gentian saraf tebal dapat dicelup dan dikenal pasti. Walau bagaimanapun, ia tidak berguna untuk mewarnai gentian saraf nipis, kerana untuk memvisualisasikan warna perak yang diperlukan.

Pemotongan kulit histologi

Di dalam stache lapisan kornea kulit pewarna yang bertindak adalah eosin, kerana pada tahap ini sel tidak mempunyai nukleus.

Di lapisan kulit granulosa, noda hematoxylin kuat ke granul keratohialin yang terdapat di dalam sel -sel berbutir. Sebaliknya, lapisan kulit berduri lemah dicelup dengan hematoxylin, manakala lapisan basal atau kuman jika ia cukup bernoda.

Eosin mengotorkan sitoplasma semua sel dan intensiti warna boleh berubah antara satu lapisan dan yang lain.

Pewarnaan pewarnaan dengan hematoxylin-eosin

Gómez dan kolaborator, pada tahun 2005 mereka menunjukkan bahawa pewarnaan dengan hematoxylin -eosin lebih berkesan dalam mengenal pasti kes amibiasis oleh Entamoeba histolytica dan Entamoeba berbeza bahawa kaedah visualisasi segar (penyelesaian saline dan lugol) pada pesakit dengan penyakit diare akut.

Boleh melayani anda: alkohol sekunder: apakah, struktur, sifat, kegunaan

Ia juga menunjukkan bahawa ia mempunyai kepekaan yang hebat untuk mengesan erythrophagocytosis (amoebas yang mempunyai erythrocytes phagocytes).

Mengotorkan pemotongan histologi untuk diagnosis jangkitan

Walwyn dan kolaborator, pada tahun 2004 mereka mencadangkan penggunaan pewarnaan histologi untuk mengesan mikroorganisma yang menyebabkan jangkitan.

Menggunakan pewarnaan hematoxylin-eosin berjaya menggambarkan jangkitan yang disebabkan oleh Clostridium, Actinomyces, Spirile atau Candida. Mereka juga berjaya melihat kehadiran parasit Sarcoptes Escabiei Dalam pemotongan kulit dan kemasukan virus oleh sitomegalovirus dan herpes dalam luka tisu yang berbeza.

Teknik

Untuk sampel histologi

Pewarnaan pemotongan histologi melalui beberapa langkah. Yang pertama adalah untuk mendapatkan pemotongan histologi. Ini mesti diberi cara dan kemudian mendapatkan luka (ultra-fin) dengan microtome. Teknik ini terdiri daripada langkah -langkah berikut:

1-malmasi parafin berlebihan: Xilol atau hemo -d boleh digunakan, tenggelam selama 3-5 minit.

2 relief sampel: Ini dicapai dengan merendam sampel dalam kepekatan alkohol yang berbeza (etanol) dalam urutan menurun (100 °, 90 °, 70 °). Dalam semua kes selama 7 minit.

3-penghapusan alkohol yang berlebihan: Untuk melakukan ini, ia direndam dalam air selama 7 minit.

4-koleksi dengan hematoxylin: Sampel tenggelam 6-10 minit pada dulang yang mengandungi hematoxylin. Waktu pendedahan bergantung pada saiz dan ketebalan sampel.

5-penghapusan hematoksylin berlebihan: Air dibasuh selama 5 minit dan kemudian laluan cepat (10-20 saat) dibuat oleh alkohol asid. Kemudian dibasuh dengan air lagi selama 5 minit. Kemudian direndam dalam etanol pada 96 ° setiap 1 minit.

6-berwarna dengan Eosina: Untuk melakukan ini, sampel selama 5 minit di dulang Eosina direndam.

7-Desidrasi sampel: Untuk melakukan ini, dulang alkohol (etanol) diluluskan lagi, tetapi kali ini dalam urutan menaik. (70 °, 90 °, 100 °). (Selama 5 saat, 5 saat, 1 minit masing -masing).

8-sampel penjelasan: Ini terdedah kepada xylol selama 5-10 minit dan mengering untuk menutupi secara kekal dengan balsem Kanada atau bahan serupa yang lain.

Untuk sampel najis untuk mencari Dan. Histolytica

Dalam lamella yang dilanjutkan dengan najis pesakit dan ditetapkan dengan alkohol 80% selama 5 minit. Lembaran tenggelam dalam hematoxylin selama 5 minit dan segera dibasuh dengan air.

Boleh melayani anda: Sumbangan dari Kimia ke Perubatan

Seterusnya, ia dengan cepat direndam dalam alkohol asid dan kemudian dalam air ammoniacal. Basuh dengan air. Ia berwarna selama 5 minit di eosina. Sampel itu dehidrasi seperti yang dijelaskan dalam teknik sebelumnya dan akhirnya dijelaskan dengan xileno.

Penyediaan reagen

- Hematoxylin

Dalam satu liter air suling, larut 50 gram kalium atau ammonium aluminium sulfat. Apabila anda dibubarkan sepenuhnya, tambahkan 1 gram hematoxylin kristal. Apabila melarutkan secara keseluruhan, 1 gr asid sitrik ditambah bersama dengan 50 gr hidrat kloral dan 0.2 gr natrium iodinus.

Campuran direbus selama 5 minit, maka dibenarkan untuk menyejukkan dan ditapis untuk menghapuskan zarah pepejal yang masih ada. Reagen yang disediakan oleh itu dapat digunakan dengan segera.

- Eosina

Ia boleh disediakan dengan asas alkohol atau berair.

Eosin alkohol

Dalam 100 ml etanol pada 95 ° larut 0.5 gram eosina "y". Kemudian tambahkan beberapa tetes asid asetik glasial.

Eosin berair 2%

Pada 1250 ml air suling, larut 25 gram eosin "y" hidrosuble. Kemudian tambahkan beberapa tetes asid asetik glasial.

Alkohol asid

Ukur 0.5 ml asid hidroklorik pekat dan lengkapkan 100 ml dengan alkohol mutlak.

Air ammoniacal

Ukur 0.5 ml ammonia pekat dan lengkapkan 100 ml dengan air suling.

Rujukan

1. Navarrete, g. Histologi kulit. Rev fac med unam 2003; 46 (4): 130-133. Tersedia di: Metigrafi.com
2. Gómez-Rivera N, Molina A, García M, Castillo J, Castillo J, García R, Fonseca I, Valenzuela atau.
3. Pengenalpastian Entamoeba histolytica/e. berbeza Untuk teknik amiba segar berbanding pewarnaannya dengan hematoxyin-eosin dalam cirit-birit akut. Rev Mex Pediatr 2005; 72 (3); 109-112. Tersedia di: Metigrafi.com
4. Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. Kegunaan teknik histologi untuk diagnosis jangkitan dalam kepingan anatomi. Rev Cub Med Mil, 2004; 33 (2). Terdapat di: Scielo.SLD
5. Panreac applichem itw reagnts. Hematoxylin-eosin pewarnaan. 2017, Sepanyol. Terdapat di: itwreagnts.com
6. "Eosina." Wikipedia, ensiklopedia percuma. 7 Nov 2018, 08:18 UTC. 4 2019, 22:13 adalah.Wikipedia.org
7. "Hematoxylin." Wikipedia, ensiklopedia percuma. Mei 2019, 11:23 UTC. 4 2019, 22:48 Wikipedia.org