Pewarnaan Giemsa

Pewarnaan Giemsa adalah kaedah biasa untuk mengkaji pelbagai tisu dan sampel darah

Apa pewarnaan Giemsa?

The Pewarnaan Giemsa Ia adalah jenis sampel klinikal (tisu, darah), berdasarkan campuran asid dan pewarna asas. Ia mencipta Gustav Giemsa, ahli kimia Jerman dan ahli bakteria, yang menyempurnakan kerja Romanowsky dengan menambahkan gliserol untuk menstabilkan sebatian.

Perubahan yang dihasilkan kepada teknik Romanowsky yang asal yang dibenarkan untuk meningkatkan pemerhatian mikroskopik dengan ketara, oleh itu, teknik itu dibaptiskan dengan nama pewarnaan Giemsa.

Menjadi teknik mudah untuk melaksanakan, fungsi yang hebat dan ekonomi, kini digunakan secara meluas di makmal klinikal untuk bau hematologi, sampel sumsum tulang dan pemotongan tisu.

Teknik pewarnaan Giemsa sangat berguna untuk kajian sitologi, kerana ia membolehkan pemerhatian struktur sel tertentu. Teknik ini mengotorkan sitoplasma, nukleus, nukleolos, vaksin dan granul sel, bahkan membezakan jejak kromatin halus.

Di samping itu, perubahan ketara dalam saiz, bentuk atau pewarnaan nukleus dapat dikesan, di mana mungkin.

Asas pewarnaan Giemsa

Romanowsky jenis pewarna mempunyai perbezaan asas antara asid dan pewarna asas, untuk membunuh struktur asas dan berasid,. Seperti yang dapat dilihat, terdapat pertalian pewarna berasid pencelupan struktur asas dan sebaliknya.

Pewarna asas yang digunakan adalah metilena biru dan derivatif berkarat (azure a dan azure b), manakala pewarna berasid adalah eosin.

Struktur asid sel adalah asid nukleik, butiran basofilik yang dibahagikan, antara lain. Oleh itu, mereka akan dicelup dengan metilena biru.

Dalam erti kata yang sama, struktur asas sel -sel adalah hemoglobin dan beberapa butiran, seperti kandungan dalam eosinophils segmen, antara lain. Ini akan dicelup dengan eosina.

Sebaliknya, kerana metilena dan biru azure dicirikan dengan menjadi pewarna metacromatic, mereka dapat memberikan nada berubah kepada struktur yang berbeza, menurut beban polian yang mereka miliki.

Ini adalah bagaimana kombinasi strategik pewarna asas dan berasid berjaya membangunkan spektrum warna yang luas, mengikut ciri -ciri biokimia setiap struktur, berjalan melalui warna biru pucat, biru gelap, ungu dan warna biru ungu, dalam hal struktur asid asid.

Pewarnaan yang disediakan oleh Eosina lebih stabil, menjana warna antara kemerahan, oren dan salmon.

Bahan

Penyediaan penyelesaian ibu

Penyediaan penyelesaian ibu memerlukan berat 600 mg debu Giemsa, berukuran 500 cc alkohol metilolik bebas aseton dan 50 cc gliserin neutral.

Cara penyediaan

Letakkan habuk giessa berat di atas mortar. Sekiranya terdapat benjolan, mereka mesti dihancurkan. Selanjutnya, tambahkan jumlah yang cukup besar dari gliserin yang diukur dan campurkan dengan baik. Campuran yang diperoleh dicurahkan ke dalam botol ambar yang sangat bersih.

Selebihnya gliserin diletakkan di mortar. Campurkan lagi untuk membersihkan seluruh pewarna yang telah terjebak ke dinding mortar dan buang botol yang sama.

Boleh melayani anda: conidia

Botol ditutup dan mengambil masa selama 2 jam dalam mandi air pada suhu 55 ° C. Selagi.

Selanjutnya, campuran dibenarkan untuk menyejukkan alkohol. Sebelum ini, sebahagian daripada alkohol yang diukur diletakkan di dalam mortar untuk menyelesaikan mencuci apa yang pewarna dan kemudian ditambah ke campuran, di sebelah seluruh alkohol.

Penyediaan ini harus dibenarkan untuk matang selama sekurang -kurangnya 2 minggu. Bahagian yang digunakan dari penyelesaian ibu mesti ditapis.

Untuk mengelakkan pencemaran penyediaan, disarankan untuk lulus bahagian yang akan sentiasa digunakan untuk botol ambar kecil dengan dripper. Reracharge setiap kali reagen habis.

Penyediaan penyelesaian penampan

Sebaliknya, penyelesaian penampan pH 7.2 disediakan seperti berikut:

6.77 gr natrium fosfat (anhydrous) (NAHPO ditimbang₄), 2.59 gr kalium dihydrogen fosfat (KH₂PO₄) dan air suling sehingga 1.000 cc.

Penyediaan pewarna akhir

Untuk penyediaan penyelesaian pewarnaan akhir, 2 cc penyelesaian ibu yang ditapis diukur dan dicampur dengan 6 cc penyelesaian penampan. Campuran diaduk.

Fakta yang relevan yang mesti diambil kira ialah teknik penyediaan pewarna boleh berubah mengikut rumah komersial.

Bahan tambahan diperlukan untuk melakukan pewarnaan

Selain daripada bahan -bahan yang diterangkan, jambatan pewarna, treads dengan air atau penampan untuk mencuci, slaid kepingan atau penutup, jam randik, jam randik untuk mengawal masa pewarna dan kertas pengeringan atau beberapa bahan yang berfungsi untuk kering (kain kasa atau kapas (kain kasa atau kapas).

Teknik

Proses pewarnaan

1. Sebelum mewarna, sampel lanjutan pada slaid bersih mesti siap.

Sampel boleh darah, sumsum tulang, tisu histologi atau sampel serviks-vaginal. Disarankan agar yang dilanjutkan baik -baik saja dan mempunyai 1 atau 2 jam pengeringan sebelum mewarnai mereka.

2. Di jambatan pewarna diletakkan semua helaian yang akan berwarna. Ia selalu berfungsi dalam urutan yang sama dan setiap helaian dikenal pasti dengan baik.

3. Letakkan beberapa titisan 100% (methanol) alkohol logam pada bau dan biarkan selama 3 hingga 5 minit, untuk memperbaiki dan mendidih sampel.

4. Buang metanol yang ada di dalam lembaran dan biarkan kering di udara.

5. Sekali kering, letakkan penyelesaian pewarnaan terakhir dengan penitis sehingga ia meliputi keseluruhan lembaran. Tinggalkan Akta selama 15 minit. Beberapa penulis mengesyorkan sehingga 25 minit. Ia bergantung pada rumah komersial.

6. Tuangkan pewarna dan basuh menggosok dengan air suling atau dengan penyelesaian penampan 7.2.

7. Di atas kertas pengeringan, biarkan lembaran luaran kering, diatur secara menegak dengan bantuan sokongan.

Boleh melayani anda: Renina: Struktur, pengeluaran, rembesan, fungsi

8. Bersihkan bahagian belakang slaid dengan kain kasa atau kapas dibasahkan dalam alkohol untuk menghapuskan sisa pewarna.

Penggunaan/Aplikasi Pewarnaan Giemsa

Teknik pewarnaan Giemsa digunakan dalam pelbagai bidang: dalam hematologi, mikologi, bakteriologi, parasitologi, sitologi dan sitogenetik.

Hematologi

Ia adalah penggunaan yang paling kerap diberikan kepada pewarnaan ini. Dengan itu, setiap sel yang terdapat dalam sampel sumsum tulang atau darah periferal dikenal pasti. Selain mengira bilangan setiap siri, dapat mengesan leukositosis atau leukopenia, thrombocytopenia, dll.

Kerana ia sensitif untuk mengenal pasti sel -sel yang tidak matang, ia relevan dalam diagnosis leukemia akut atau kronik. Ia juga mungkin untuk membuat diagnosis anemia, seperti anemia drepanocytic, falciform, antara lain.

Mycology

Di kawasan ini penggunaannya biasa untuk dicari Histoplasma capsulatum (kulat dimorphic intraselular) dalam sampel tisu.

Bacteriology

Dalam smear hematologi yang dicelup dengan giemsa, ada kemungkinan untuk mengesan Borrelias sp Pada pesakit yang mengkaji penyakit yang disebut demam recurrentis. Spiroquettes diperhatikan banyak di antara erythrocytes, dalam sampel yang diambil di puncak demam.

Ia juga mungkin untuk menggambarkan bakteria intrasel seperti Rickettsias sp dan Chlamydia trachomatis Dalam sel yang dijangkiti.

Parasitologi

Dalam bidang parasitologi, pewarnaan Giemsa telah membenarkan diagnosis penyakit parasit, seperti malaria, Chagas Evil dan Leishmaniasis.

Pada dua yang pertama, parasit Plasmodium sp dan juga Cruzi Tripaosoma, masing -masing, mereka boleh digambarkan dalam darah periferal pesakit yang dijangkiti. Mereka boleh didapati dalam pelbagai peringkat mengikut fasa di mana penyakit itu.

Untuk meningkatkan pencarian parasit darah, disarankan.

Begitu juga, leishmaniasis kulit boleh didiagnosis ketika menilai sampel biopsi kulit yang dicelup dengan Giemsa, di mana parasit dijumpai.

Cytology

Pewarnaan Giemsa juga digunakan untuk kajian sitologi sampel endokervis, walaupun bukan teknik yang paling kerap digunakan untuk tujuan ini.

Tetapi dalam kes kekurangan sumber, ia boleh digunakan, mempunyai fungsi yang serupa dengan yang ditawarkan oleh tasik pap dan kos yang lebih rendah. Walau bagaimanapun, ia memerlukan kepakaran oleh pemeriksaan.

Cytogenetics

Ciri yang berkaitan dengan pewarnaan Giemsa adalah keupayaannya untuk bergabung dengan kawasan yang kaya dengan adenin dan timinas DNA. Ini membolehkan DNA digambarkan semasa myitosis sel, dalam keadaan pemeluwapan yang berbeza.

Kajian -kajian ini diperlukan untuk mengesan penyimpangan kromatik, seperti duplikasi, penghapusan atau translocations dari kawasan kromosom yang berlainan.

Pewarnaan Giemsa. Sumber: Panreac Applichem ITW Reagen. Versi 2: JMBJUL17 CEIVD10ES. Castellar del Vallés, Sepanyol.

Cadangan untuk pewarnaan yang baik

- Pengeringan lembaran tidak boleh dipercepat. Masa berhemat untuk pengeringannya mesti dijangka di luar rumah. Kira -kira 2 jam.

Boleh melayani anda: Timina

- Mewarnai sebaik sahaja 2 jam untuk hasil yang lebih baik.

- Agar bau diperbaiki dan dicelup lebih baik, sampel mesti diedarkan di atas lembaran supaya terdapat lapisan nipis dan seragam.

- Sampel darah pilihan adalah kapilari, kerana smere.

- Sekiranya darah vena digunakan, EDTA harus digunakan sebagai antikoagulan dan bukan heparin, kerana yang terakhir biasanya mengubah sel sel.

Kesalahan biasa dalam pewarnaan Giemsa

Dalam amalan pewarnaan ini, anda boleh membuat kesilapan. Mereka dibuktikan dengan perubahan secara tiba -tiba dalam tonaliti struktur.

Warna yang sangat biru

Mungkin disebabkan oleh:

- Smear sangat tebal.

- Melebihi masa pewarnaan.

- Tidak mencukupi.

- Penggunaan reagen jauh melebihi pH neutral (alkali).

Di bawah syarat-syarat ini, warna-warna struktur berikut diputarbelitkan, sedemikian rupa sehingga erythrocytes, bukannya pencelupan garam mawar, n akan menjadi hijau, granul eosinofil yang mesti dicelupkan dalam bata merah akan menjadi kebiruan atau kelabu atau kelabu atau kelabu atau kelabu atau kelabu atau kelabu atau kelabu atau kelabu atau kelabu atau kelabu, dan sebagainya akan ada penyimpangan dalam warna biasa.

Pewarnaan merah jambu yang berlebihan

Mungkin disebabkan oleh:

- Masa pewarnaan yang tidak mencukupi.

- Mencuci yang berpanjangan atau berlebihan.

- Pengeringan yang kurang baik.

- Penggunaan reagen yang sangat berasid.

Dalam kes ini, struktur yang biasanya dicelupkan dalam warna biru tidak akan hampir kelihatan, sementara struktur yang dicelupkan sebagai mawar akan mempunyai nada yang sangat dibesar -besarkan.

Contoh: erythrocytes akan mengambil warna merah terang atau oren yang kuat, kromatin nuklear akan kelihatan merah jambu pucat dan granul eosinofilik akan dicelup dari cerah merah terang terang.

Kehadiran precipitates dalam smear

Penyebabnya boleh:

- Gunakan kepingan kotor atau buruk.

- Jangan biarkan smear kering.

- Tinggalkan penyelesaian penetapan terlalu lama.

- Mencuci tidak mencukupi pada akhir pewarnaan.

- Penapisan yang tidak mencukupi atau tidak berfungsi dengan pewarna yang sedang digunakan.

Kehadiran artifak morfologi

Di smear, artifak morfologi mungkin kelihatan menghalang visualisasi dan tafsiran struktur yang hadir. Ini adalah kerana:

- Jenis antikoagulan yang digunakan, seperti heparin.

- Penggunaan lembaran kotor, merosot atau berminyak.

Mod penyimpanan

Setelah disediakan, pewarna mesti dikekalkan pada suhu bilik (15-25 ° C), untuk mengelakkan pewarna dari precipitating. Ia mesti disimpan dalam bekas amber yang tertutup.

Rujukan

1. Cannova, d., Brito, e. Dan simons, m. (2016). Penilaian teknik pewarna untuk diagnosis leishmaniasis kutaneus. Salus. 
2. Panreac applichem itw reagnts. Pewarnaan Giemsa. Versi 2: JMBJUL17 CEIVD10ES. Castellar del Vallés, Sepanyol.
3. Clark, g. Prosedur Pewarnaan (1981). Williams & Willkins.